在仔猪饲料中添加抗生素或保健药物可以减少仔猪断奶应激，促进仔猪生长，防治细菌性疾病。天然植物提取物具有抑菌、抗炎、抗氧化等多种生物活性[1]，具有安全、不易产生耐药性、无残留、无污染等优点[2]。在“饲料禁抗、养殖限抗”的背景下，需要遵循“整肠、抗炎、促生长”共性的饲用替抗技术思路[3]。因此，开发能够有效保障仔猪肠道健康、缓解炎症反应、促进仔猪生长发育的植物提取物类饲料添加剂，具有广阔的发展前景。假蒟（Piper sarmentosum Roxb.）为胡椒科属多年生草本植物，广泛分布于热带及亚热带地区。假蒟提取物富含黄酮类和生物碱类等活性成分，具有抗炎、镇痛、解热和抑菌等多种生物活性[4]。本课题组前期研究表明，在日粮中添加50~200 mg/kg假蒟提取物可改善断奶仔猪抗氧化性能和肠道黏膜抗炎能力[5-7]。番石榴叶是桃金娘科植物番石榴（Psidium guajava L.）的干燥叶，叶中含有酚类等活性成分，具有降低血糖、收敛止血、止泻、抗氧化、抗菌、抗病毒等生物活性[8-10]，具有较高的药用价值。研究表明，日粮中添加番石榴叶提取物可降低仔猪腹泻率，提高仔猪抗氧化能力和免疫功能[11-12]。本试验以假蒟、番石榴叶等植物提取物为主要成分，探讨复合植物提取物对断奶仔猪生长性能和血清指标的影响，为开发复合植物提取物饲料添加剂在养猪生产上的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料假蒟乙醇提取物和番石榴叶乙醇提取物膏状冻干粉及饲料级二氧化硅粉以5∶5∶10比例混匀，得到复合植物提取物。1.2试验设计试验选取200头平均体重为6.67 kg、约21日龄的健康断奶“杜×长×大”仔猪，随机分为2组，每组5个重复，每重复20头仔猪（每个重复1栏）。对照组断奶仔猪饲喂基础日粮，试验组断奶仔猪饲喂在基础日粮中添加混合提取物200 mg/kg的日粮。试验期21 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.004.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米30.00消化能/(MJ/kg)14.03膨化玉米25.00粗蛋白质/%20.05膨化全脂大豆12.00赖氨酸/%1.19发酵豆粕8.00蛋氨酸/%0.75鱼粉8.00苏氨酸/%0.75乳清粉8.00色氨酸/%0.25酵母培养物3.00钙/%0.62豆油2.00有效磷/%0.55预混料4.00注：1.预混料为每千克日粮提供：铜125 mg、铁100 mg、锰35 mg、锌100 mg、硒0.3 mg、碘1mg、VA 11 000 IU、VD3 1500 IU、VE 16 IU、VK 1 mg、叶酸0.3 mg、烟酸15 mg、泛酸10 mg、生物素2.5 mg、VB1 1 mg、VB2 4.0 mg、VB12 0.01 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理饲养试验在海南省保亭黎族苗族自治县海南农垦金牧农业发展有限公司猪场进行。试验仔猪均饲养于封闭式猪舍内，舍温20~25 ℃。仔猪均以栏为单位，每天饲喂2次（9：00、16：00），自由饮水，漏缝地板，自动清粪，每周猪舍消毒2次。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能分别于试验第1、22 d清晨以栏为单位，对每栏仔猪进行空腹称重，记录每栏仔猪的采食量，计算每栏仔猪的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清指标试验第22 d清晨每栏随机选取1头仔猪，前腔静脉采集血液，4 ℃、3 500 r/min离心10 min，分离血清，分装，-20 ℃保存。血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、尿素氮（UN）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CHOL）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和丙二醛（MDA）含量；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性以及总抗氧化能力（T-AOC）均采用南京建成生物工程研究所试剂盒检测。采用酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）、二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）和内毒素（ET-1）指标，试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。1.5数据统计与分析采用Excel 2010整理数据，采用SPSS 23.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行组间多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合植物提取物对断奶仔猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验组断奶仔猪的试验末重、平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著差异（P0.05），但试验组断奶仔猪的料重比与对照组相比有降低的趋势，比对照组降低了3.60%。在整个试验期间，对照组和试验组仔猪均未出现死亡或生病淘汰现象。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.004.T002表2复合植物提取物对断奶仔猪生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[g/(头·d)]料重比对照组6.86±0.9413.58±1.33319.64±23.89443.45±20.781.39±0.05试验组6.48±0.5813.17±0.47318.25±15.64424.60±9.571.34±0.07注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4~表6与此同。2.2复合植物提取物对断奶仔猪血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，对照组与试验组断奶仔猪血清中TP、ALB、IgG、IgA、IgM、UN、GLU、TG、HDL-C含量及ALT、AST、ALP活性均无显著差异（P0.05）。与对照组相比，试验组断奶仔猪血清中CHOL和LDL-C含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.004.T003表3复合植物提取物对断奶仔猪血清生化指标的影响项目对照组试验组TP/(g/L)35.84±3.2233.02±1.97ALB/(g/L)21.64±2.3920.16±1.53IgA/(g/L)0.09±0.030.09±0.02IgG/(g/L)1.72±0.311.71±0.35IgM/(g/L)0.29±0.060.36±0.07ALT/(U/L)56.84±8.1155.72±12.27AST/(U/L)47.52±20.2642.58±17.72ALP/(U/L)272.25±27.10258.62±30.21BUN/(mmol/L)0.64±0.070.78±0.35GLU/(mmol/L)4.45±0.534.07±0.41TG/(mmol/L)0.23±0.070.24±0. 08CHOL/(mmol/L)1.82±0.24a1.44±0.14bHDL-C/(mmol/L)0.86±0.140.73±0.10LDL-C/(mmol/L)0.86±0.13a0.65±0.11b注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.3复合植物提取物对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，对照组和试验组仔猪血清中SOD活性、CAT活性、MDA含量、T-AOC均无显著差异（P0.05）。与对照组相比，试验组仔猪血清中GSH-Px活性显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.004.T004表4复合植物提取物对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响组别GSH-Px/(U/mL)T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组1 084.70±66.24b3.04±0.3558.69±5.312.56±0.145.77±0.54试验组1 230.78±82.40a3.21±0.7561.24±8.842.33±0.194.49±1.34注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.4复合植物提取物对断奶仔猪血清细胞因子的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验组断奶仔猪血清中IL-4、IL-10和TGF-β含量显著升高（P0.05），IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.004.T005表5复合植物提取物对断奶仔猪血清细胞因子的影响组别IL-4IL-10TGF-βIL-1βIL-6TNF-α对照组10.73±0.46b45.04±1.00b261.13±2.93b167.81±2.66a145.58±1.47a39.35±0.65a试验组11.22±0.11a48.62±0.30a282.27±2.39a157.35±1.13b142.81±1.53b37.83±0.44bng/L2.5复合植物提取物对断奶仔猪血清DAO活性、D-LA、ET-1浓度的影响（见表6）由表6可知，和对照组相比，试验组断奶仔猪血清中ET-1浓度和DAO活性均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.004.T006表6复合植物提取物对断奶仔猪血清DAO活性、D-LA、ET-1浓度的影响组别D-LA/(mmol/L)ET-1/(EU/mL)DAO/(mg/L)对照组0.75±0.0214.72±0.08a39.05±0.62a试验组0.75±0.0314.37±0.06b35.64±0.71b3讨论3.1复合植物提取物对断奶仔猪生长性能的影响植物提取物富含多糖、酚类、生物碱等活性成分，具有免疫调节、抗炎、抗菌等生物活性，可通过改善消化道生态结构、增强机体免疫功能等发挥防治疾病和促生长作用[13]。植物提取物具有多成分、多作用靶点的作用特点[14]，可整体改善动物机体免疫功能，已经在养殖生产被广泛应用。本研究中，在试验过程中，对照组和试验组仔猪均未出现死亡或生病淘汰现象，而且与对照组相比，试验组仔猪的生长性能并未显著提高。本研究中的动物饲养试验在商业化猪场中进行，猪舍严格执行清洁和消毒，全封闭的温控系统、严格的卫生条件和饲养管理降低了断奶仔猪的断奶应激。植物提取物在动物受到应激时发挥的作用更加显著。研究表明，日粮中添加50~200 mg/kg的番石榴叶提取物可有效缓解产肠毒素大肠杆菌感染导致的仔猪腹泻，改善仔猪肠道通透性和黏膜损伤，增强仔猪肠道屏障功能和免疫功能[11-12]。本研究中，添加复合植物提取物后有改善仔猪生长性能的趋势，试验组仔猪料重比比对照组降低了3.60%，与陶新等[15]报道复合植物提取物能够改善仔猪生长性能的结果一致。3.2复合植物提取物对断奶仔猪血清生化指标的影响血清生化指标可以反映动物机体物质合成代谢和组织器官功能变化状态。如总蛋白、白蛋白和尿素氮浓度可一定程度上反映动物对蛋白质的消化能力和机体免疫力；血清中的谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性可以反映肝脏功能状况；血清中葡萄糖水平可衡量机体的能量代谢状况；甘油三酯和总胆固醇可以反映体内脂质代谢的状况[16]。本研究中，复合植物提取物对仔猪大部分血清生化指标无显著影响，可能与饲养环境、试验持续时间等因素有关。但复合植物提取物显著降低了血清胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量，表明复合植物提取物能够促进仔猪机体脂肪合成，与本课题组前期研究中单独添加假蒟提取物可降低仔猪血清中胆固醇和低密度脂蛋白水平的结果一致[5]。3.3复合植物提取物对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响研究表明，假蒟和番石榴叶富含酚类和生物碱类，酚类和生物碱具有较强的抗氧化作用[4,17-19]。本试验中使用的复合植物提取物为醇溶性活性物，可显著提高仔猪血清中GSH-Px活性，可能与假蒟和番石榴叶含有较高的酚类和生物碱类有关，与Wang等[6]、Wang等[11]研究结果一致。仔猪断奶时离开母乳免疫保护，自身免疫力降低，极易感染细菌产生各种疾病。作为细胞间的信号传递分子，细胞因子主要包括白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、趋化因子、生长因子等，在免疫应答与炎症反应调节中发挥重要作用[20]。通过细胞因子水平的检测可以评价动物机体的免疫状态。IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子是炎症细胞在炎症反应过程中产生的蛋白质，TNF-α含量可以反映机体炎症状态。研究表明，动物发生免疫应激反应时，会刺激单核/巨噬细胞系统分泌，释放IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性细胞因子[21]。IL-4、IL-10、TGF-β等抗炎细胞因子在动物在发生免疫应激反应时，可促进T2淋巴细胞发育，抑制发炎细胞因子合成从而发挥抗炎作用[22]。研究表明，断奶应激或腹腔注射大肠杆菌脂多糖模拟免疫应激可使仔猪血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著升高[23]。中药制剂可以降低免疫应激的仔猪血清中炎性细胞因子浓度，提高抗炎细胞因子水平[24]，进而提高仔猪的细胞免疫和体液免疫水平，提高仔猪的免疫功能。本研究结果和上述研究结果一致，表明仔猪日粮中添加假蒟和番石榴叶复合提取物可上调血清中抗炎细胞因子含量，抑制炎性细胞因子含量，增强仔猪的免疫功能。3.4复合植物提取物对断奶仔猪血清细胞因子的影响血清中D-LA、ET-1浓度以及DAO活性变化可以作为反映肠道屏障功能的指标。DAO作为细胞内酶主要存在于肠黏膜绒毛中，D-LA和ET-1是肠道内细菌发酵代谢产物。动物肠黏膜受损导致肠黏膜通透性增加，肠道中的D-LA、ET-1和DAO通过受损肠黏膜渗透进入血液[25]。本研究中，假蒟和番石榴叶复合提取物显著降低了仔猪血清中ET-1浓度和DAO活性，和本课题组前期研究单独添加假蒟提取物可改善仔猪肠道黏膜的屏障功能的结果一致[7]。此外，也可能是因为复合提取物中的抗菌活性成分影响了肠道内细菌的代谢，减少了ET-1等肠道内细菌发酵代谢产物的产生。4结论本研究结果表明，日粮中添加200 mg/kg的假蒟和番石榴叶复合提取物可以提高断奶仔猪机体抗氧化性能和免疫功能，改善仔猪肠道黏膜屏障功能。