益生菌具有改善动物肠道菌群平衡、防治疾病、促进动物生长和提高饲料消化率等功能[1-2]。硒可提高机体免疫力，清除机体自由基，具有抗氧化、调节机体代谢等功能[3-4]。酵母硒在动物体内具有吸收率高、生物活性强、毒性低、环境污染小等特点[5]。Rotruk等[6]发现，很多硒蛋白参与动物机体代谢，如抗氧化作用、三大营养物质代谢、辅酶的合成。目前，蛋鸡日粮中添加益生菌或者酵母硒对蛋鸡生产性能、脂类代谢、蛋白质代谢等的影响已有报道，如张水晶[7]、褚素乔等[8]、张浩等[9]、杨玉等[10]，但结果存在差异，且关于具体机理方面的研究甚少。本试验在蛋鸡日粮中添加益生菌和酵母硒，探讨两者对蛋鸡的肝功能、脂类代谢、蛋白质代谢以及生产性能的影响，对其机理做初步探讨，旨在为益生菌和酵母硒在蛋鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验鸡由广西玉林某农牧公司提供。酵母硒（硒含量为0.1%，湖北安琪酵母股份有限公司）。益生菌主要包括枯草芽孢杆菌（活菌数1.5×109 CFU/g）、乳酸片球菌（活菌数3.0×109 CFU/g）、沼泽红假单胞菌（活菌数2.5×109 CFU/g）、产朊假丝酵母菌（活菌数1.0×109 CFU/g），总活菌数为8.0×109 CFU/g，均购自沧州旺发生物技术研究所有限公司。1.2试验设计及试验日粮试验选择健康、产蛋性能相近、26周龄的处于产蛋高峰期（产蛋率90%）的罗曼粉壳蛋鸡800只，随机分为4组，分别为对照组、1.0 g/kg益生菌组（简称益生菌组)、0.3 g/kg酵母硒组（简称酵母硒组）、1.0 g/kg益生菌+0.3 g/kg酵母硒组（简称益生菌＋酵母硒组），每组5个重复，每个重复40只鸡。益生菌和酵母硒添加量为每千克日粮中分别添加1.0 g益生菌和0.3 g 0.1%酵母硒，即每千克日粮中含益生菌活菌总数为8.0×109 CFU，硒含量为0.000 3 g。试验期共12 w，预试期4 w，正式试验期8 w。基础日粮参考美国NRC标准配制。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.011.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米54.40代谢能/(MJ/kg)11.34豆粕26.00粗蛋白/%16.56麦麸6.00赖氨酸/%0.83磷酸氢钙1.40蛋氨酸/%0.42石粉8.00蛋胱氨酸/%0.66大豆油3.00钙/%3.47DL-蛋氨酸0.20总磷/%0.60预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VＡ 8 000 IU、VD 1 600 IU、VE 5 IU、VK 0.5 mg、硫胺素0.8 mg、核黄素2.5 mg泛酸2.2 mg、吡哆醇3.0 mg、生物素0.10 mg、叶酸0.25 mg、VB12（钴胺素）0.004 mg、胆碱500 mg、铁60 mg、铜8 mg、锰60 mg、锌80 mg、碘0.35 mg、氯化钠3 g。2.营养水平均为计算值。1.3日常饲养管理试验于广西农业职业技术大学养殖场进行。试验期60 d。采用人工与自然光照相结合，总光照时间为16 h。按常规程序进行鸡只免疫和栏舍消毒。试验期间，自由饮水，自由采食；人工清粪1次/d，人工饲喂2次/d（分别为8：00和17：00），收集鸡蛋2次/d，喷雾消毒2次/w，日常喷雾降温6次/d。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验期间记录各组试验鸡产蛋数量、总蛋重、软破蛋数、死淘数和耗料量，计算平均蛋重、平均采食量、产蛋率、合格蛋率、死淘率和料蛋比。平均蛋重=每组总蛋重/每组产蛋个数(1)平均采食量=每组采食量总量/每组鸡存栏数(2)产蛋率=统计期内产蛋总数/(存栏鸡数×统计期天数)×100%(3)合格蛋率=(每组产蛋个数－每组软破壳蛋数)/每组产蛋个数×100%(4)死淘率=死亡或淘汰鸡数/入舍鸡数×100%(5)料蛋比=耗料量/总蛋重(6)1.4.2血清生化指标测定试验期第56 d采集血样，采血前12 h禁食，正常饮水。每个重复的第3笼鸡中随机抽取2只健康的鸡，翼下静脉采血3 mL，3 000 r/min离心20 min，-4 ℃保存。血清抗氧化指标包括谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、硫氧还蛋白氧化还原酶（TRXR）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）；肝功能指标包括谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）和间接胆红素（IBIL）；脂类代谢指标包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）；血液蛋白质代谢指标包括总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、尿酸（UA）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CPK）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）。上述指标均采用日立7600型自动生化分析仪进行测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.5数据统计与分析数据采用Excel2007进行处理，SPSS 18.0软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1酵母硒和益生菌对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，益生菌+酵母硒组蛋鸡的合格蛋率、平均日采食量均显著提高（P0.05），料蛋比显著降低（P0.05）。结果显示，日粮中添加1.0 g/kg益生菌和0.3 g/kg酵母硒可显著提高蛋鸡平均日采食量和合格蛋率，降低料蛋比。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.011.T002表2酵母硒和益生菌对蛋鸡生产性能的影响项目对照组益生菌组酵母硒组益生菌+酵母硒组产蛋率/%92.03±4.0891.09±6.1590.61±7.4292.73±6.75合格蛋率/%96.54±6.32b97.12±7.32ab97.01±6.92ab98.68±8.02a平均日采食量/[g/(只·d)]111.61±6.81b110.32±4.08b111.25±6.63b114.11±7.08a平均蛋重/g49.11±3.7850.71±4.1151.56±3.3252.36±3.38料蛋比2.27±0.05a2.20±0.05ab2.16±0.05b2.18±0.05b死淘率/%0.05±0.000.00±0.000.03±0.000.00±0.00注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2添加酵母硒和益生菌对蛋鸡血清抗氧化性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，酵母硒组与益生菌+酵母硒组蛋鸡血清GSH-Px和SOD活性均显著升高（P0.05），益生菌组蛋鸡血清GSH-Px和SOD活性差异不显著（P0.05）。结果表明，日粮中添加1.0 g/kg益生菌和0.3 g/kg酵母硒能够显著提高蛋鸡血清抗氧化性能。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.011.T003表3酵母硒和益生菌对蛋鸡血清抗氧化性能的影响项目对照组益生菌组酵母硒组益生菌+酵母硒组GSH-Px772.56±32.64b784.41±41.64b914.22±44.64a1 002.13±36.64aSOD280.45±11.60b270.61±15.63b352.61±17.21a374.08±22.72aCAT4.08±0.554.25±0.334.11±0.254.21±0.64TRXR0.41±0.020.42±0.00.44±0.110.44±0.03U/mL2.3酵母硒和益生菌对蛋鸡肝功能指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，益生菌+酵母硒组蛋鸡血清ALT活性极显著降低（P0.01）；酵母硒组血清AST活性显著降低（P0.05），和益生菌+酵母硒组蛋鸡血清AST活性极显著降低（P0.01）；益生菌+酵母硒组血清ALP、LDH含量均显著降低（P0.05），CPK含量极显著降低（P0.01）。结果表明，日粮中添加1.0 g/kg益生菌+0.3 g/kg酵母硒组对改善蛋鸡的肝功能效果最显著。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.011.T004表4酵母硒和益生菌对蛋鸡肝功能指标的影响项目对照组益生菌组酵母硒组益生菌+酵母硒组ALT/(U/L)2.46±0.12Aa2.30±0.45Ab1.69±0.05Bc1.32±0.38BcAST/(U/L)209.21±27.89Aa200.67±31.84Aa180.21±40.88Ab163.67±20.14BcGGT/(U/L)18.52±3.0217.65±7.4118.03±4.0418.22±4.55ALP/(U/L)1 608.31±86.41a1 564.97±91.51a1 461.09±79.28ab1 089.52±98.91bCPK/(U/L)4 657.34±154.51Aa4 001.85±86.93Ab3 564.77±97.17Ac2 078.10±87.87BdLDH/(U/L)1 204.65±95.68a1 155.24±68.51a1 111.34±59.79a1 002.53±84.69bTBIL/(μmol/L)8.50±0.658.44±0.538.08±0.478.22±0.81DBIL/(μmol/L)6.70±1.316.29±0.696.44±1.146.51±0.77IBIL/(μmol/L)1.80±0.231.78±0.071.74±0.181.71±0.512.4酵母硒和益生菌对蛋鸡脂类代谢的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，益生菌+酵母硒组的TC和TG值均显著降低（P0.05）；酵母硒组和益生菌+酵母硒组的HDL-C含量均极显著提高（P0.01），益生菌+酵母硒组的LDL-C含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.011.T005表5酵母硒和益生菌的蛋鸡脂类代谢的影响项目对照组益生菌组酵母硒组益生菌+酵母硒组TC3.67±0.89a3.07±0.51a2.98±0.51ab2.44±0.92bTG19.38±2.12a18.46±2.16a16.69±2.96a13.32±3.21bHDL-C0.06±0.00B0.08±0.00B0.11±0.01A0.13±0.02ALDL-C1.24±0.12a1.16±0.08a1.01±0.08ab0.91±0.11bmmol/L结果表明，日粮中添加1 g/kg益生菌+0.3 g/kg酵母硒组对改善蛋鸡脂类代谢效果最好。2.5酵母硒和益生菌对蛋鸡蛋白质代谢的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，益生菌+酵母硒组蛋鸡血液TP含量显著提高（P0.05），CREA、UA含量显著降低（P0.05）；酵母硒组血液BUN含量显著降低（P0.05），益生菌+酵母硒组的BUN含量极显著降低（P0.01），益生菌组与酵母硒组BUN含量差异不显著（P0.05）。结果表明，日粮添加1.0 g/kg益生菌+0.3 g/kg酵母硒组对改善蛋鸡蛋白质代谢的效果最显著。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.011.T006表6酵母硒和益生菌的蛋鸡蛋白质代谢的影响项目对照组益生菌组酵母硒组益生菌+酵母硒组TP/(g/L)48.78±5.64b50.73±7.54ab51.44±8.19ab52.41±8.62aALB/(g/L)18.62±2.6019.56±5.5519.81±7.1220.11±2.72GLB/(g/L)30.16±3.5530.77±6.9530.92±8.3432.30±3.64BUN/(mmol/L)0.49±0.02Aa0.37±0.01Ab0.34±0.02Ab0.26±0.05BcCREA/(μmol/L)10.32±0.79a8.93±0.88b9.54±0.69a8.68±0.51bUA/(μmol/L)99.02±11.32a94.34±8.4690.25±7.5487.95±9.17bIgG/(g/L)3.46±0.673.48±0.523.45±0.653.46±0.77IgA/(g/L)0.23±0.010.23±0.020.25±0.030.24±0.023讨论3.1酵母硒和益生菌对蛋鸡生产性能的影响蛋鸡生产性能包括产蛋率、合格蛋率、平均采食量、平均蛋重、死淘率和料蛋比等。产蛋率和平均蛋重是反映鸡群产蛋能力的指标；合格蛋率是衡量饲养效率和盈利能力的生产指标之一；料蛋比是反映蛋鸡养殖行业盈亏趋势的指标。目前，有关硒元素提高蛋鸡的生产性能的研究已取得一定成果，如添加酵母硒能够降低海兰褐蛋鸡的料蛋比[10]，提高蛋鸡的产蛋率、日均产蛋重和平均蛋重[11-12]。本研究结果显示，添加酵母硒和益生菌可显著提高蛋鸡的合格蛋率，降低料蛋比。其机制为：甲状腺素5'-脱碘酶是一种含硒酶，直接参与甲状腺素（T4）转化为三碘甲状腺原氨酸（T3）的脱碘过程，可维持T3的稳定，改善机体的代谢，从而提高蛋鸡的生产性能[13]。另外，益生菌在生长繁殖过程中产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，促进营养物质的消化吸收，提高了饲料转化率。因此，酵母硒和益生菌的协同作用能够显著提高蛋鸡生产性能。3.2添加酵母硒和益生菌对蛋鸡血清抗氧化性能的影响动物机体的氧化-抗氧化系统会维持在一个动态平衡状态。高温、毒物、辐射、压力或者营养缺乏等应激会引起机体的羟基自由基（OH·）、活性氧（ROS）水平急剧增加，损害细胞结构，使蛋白质变性，进而引起氧化应激[14]。机体的抗氧化水平高，受到氧化应激的危害即可减少[15]。本试验结果表明，益生菌+酵母硒组的GSH-Px和SOD活性显著升高。司雪阳等[16]和杨清丽等[17]研究发现，在日粮中添加酵母硒和纳米硒均能够显著提高蛋鸡血液GSH-Px、SOD和CAT含量，与本试验结果一致。原因可能为硒蛋白（如硒蛋白K、硒蛋白P、GPX和TR家族）参与的机体抗氧化过程，清除自由基使细胞免受氧化应激，缓解氧化应激过程[18]。因此，酵母硒提高机体的抗氧化能力。3.3酵母硒和益生菌对蛋鸡肝功能指标的影响肝功能包括肝的代谢功能、解毒功能、储存功能、胆汁的合成和代谢等，反映肝脏疾病和肝脏损害程度等。AST、ALT、ALP、CPK、LDH是反映肝功能的重要指标。当肝细胞受损、肝细胞障碍时，肝功能指标明显升高。本研究结果表明，益生菌+酵母硒组血液AST、ALT、ALP、CPK、LDH含量显著降低。Wang等[19]和朴善英等[20]研究报道，益生菌治疗可降低血液中ALT及AST含量。郭云霞等[21]研究发现，添加酵母硒能够显著提高柴鸡血清中ALP和LDH含量，有效降低ALT和CPK的活性，与本研究的结果一致。LDH是机体糖酵解途径中重要的氧化还原酶，LDH升高可造成动物机体肝功能障碍[22-23]。张琳等[24]研究发现，硒能够缓解肝功能的损伤。王菊平等[25]研究表明，益生菌能够有效保护肝损伤,其机制可能与益生菌下调血清二胺氧化酶（DAO）、Ｄ-乳酸（D-LA）及肝组织核因子－κＢ（NF-kB）、肿瘤坏死因子－α（TNF-α）表达有关。因此，酵母硒和益生菌可改善蛋鸡的肝功能。3.4酵母硒和益生菌对蛋鸡脂类代谢的影响脂类代谢是在相关酶的参与下，完成脂肪消化吸收、合成与分解，加工成机体所需要的物质，保证正常生理机能的运作，对于生命活动具有重要意义。TC、TG、LDL-C和HDL-C是反映脂类代谢的重要指标。研究表明，益生菌具有降胆固醇的生物学功效[26]。Cavallini等[27]研究表明，日粮中添加益生菌可显著降低血清中TG含量，提高HDL-C含量。本研究结果显示，益生菌+酵母硒组的TC、TG、LDL-C水平显著降低，HDL-C显著升高，与上述结果一致。原因可能是硒蛋白质参与合成GSH-Px，有效清除动物机体内的过氧化氢或脂质过氧化产物，从而影响机体脂代谢过程[28]。微生物普遍具有对胆酸的解偶联和去羟基作用，进一步生成脱氧胆酸和石胆酸等次级胆汁酸，从而影响动物的胆固醇代谢[29]。3.5酵母硒和益生菌对蛋鸡蛋白质代谢的影响蛋白质是生物体的重要组成，维持组织细胞的生长、更新和修复。蛋白质的代谢合成受阻，必然影响组织细胞的正常功能。TP、ALB和GLB是反映肝脏蛋白合成能力的重要指标，BUN、CREA和UA均是蛋白质代谢的产物。上述指标不同程度地反映蛋白质代谢的效率。本研究中，益生菌+酵母硒组的BUN、CREA和UA含量均显著降低，TP含量显著升高，与陈丽艳[30]和黄晨轩等[31]的结果一致。原因可能是益生菌在生长繁殖过程中产生的消化酶、肽酶可促进蛋白质分解成氨基酸；氨基酸的脱氨基反应所产生的NH3通过肠道进入肝，肝内通过BUN循环使氨被解毒，形成BUN[32]。但是，由于肠道中益生菌利用氨基酸的脱氨基反应所产生的NH3合成菌体蛋白，进入肝的NH3将大大减少，导致BUN的生成受阻，从而导致BUN和UA均显著降低。硒能够保护机体免受活性氧和自由基的侵害,并对消化器官起到保护作用，进而影响机体蛋白酶活性，促进蛋白质的消化、吸收和利用[33]。因此，日粮中添加酵母硒和益生菌可改善蛋白质代谢。4结论本研究结果表明，每千克蛋鸡日粮中添加1.0 g益生菌和0.3 g酵母硒，蛋鸡血液ALT、ALP、CPK和LDH含量显著降低；蛋鸡血液的GSH-Px和SOD活性显著提高；血液TC、TG和LDL-C含量显著降低，HDL-C含量显著升高；BUN、CREA和UA含量显著降低，提高了蛋白质的合成效率。综上所述，蛋鸡日粮中添加1 g/kg益生菌和0.3 g/kg酵母硒，对改善蛋鸡的肝功能、改善脂类代谢、提高蛋鸡的抗氧化性能和生产性能的效果最佳。