我国饲料行业禁抗政策的出台及实施，为绿色、高效、安全的饲料发展带来机遇，寻找抗生素替代品成为饲料行业的研究热点[1]。蒲公英作为一种传统中草药，已被卫健委列入食药同源物质名单。蒲公英叶富含黄酮类、酚酸类等多种药理活性成分，具有清热解毒、抗炎、抗菌、抗病毒[2-3]和抗肿瘤等作用[4-6]。研究表明，蒲公英及其提取物在提高养殖动物生产性能、增强机体抗氧化能力、调节免疫机能等方面具有较好的效果[7-8]，但所选用的蒲公英品种各有不同，功效成分的不同极易影响试验结果的稳定性。因此，本试验采用自主选育新品种“滨蒲1号”（省级登记号20181421）为试验材料，旨在研究饲粮中添加蒲公英对蛋鸡的生产性能、蛋品质、血清抗氧化能力及肝脏的影响，以期为蒲公英新品种“滨蒲1号”的综合开发利用、家禽健康养殖、饲用抗生素替代品开发提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验蛋鸡为海兰褐蛋鸡。蒲公英：滨蒲1号，耐盐力0.4%，在土壤全盐含量0.2%~0.45%的情况下，长势旺盛、抗病性强，叶片平均长度46.17 cm，叶片平均宽度12.5 cm；硒含量8.9 μg/100 g，绿原酸含量48.7 mg/100 g，总黄酮含量0.66 g/100 g。晒干后超微粉，过80~100目网筛。滨蒲1号采收于河北省农林科学院滨海农业研究所基地（118.293523E，39.312476N）。1.2试验设计试验采用单因素完全随机试验设计，选用300只20周龄体况良好、体重和产蛋率接近的海兰褐蛋鸡，随机分为3组，每组5个重复，每个重复20只蛋鸡。对照组（CG组）蛋鸡饲喂基础饲粮；试验组（0.5%EG组、1.0%EG组）蛋鸡分别在基础饲粮中添加0.5%、1.0%蒲公英粉。预试期3 d，正式试验期64 d。1.3试验饲粮根据NY/T 33—2004《鸡饲养标准》营养标准配制试验基础饲粮，依据《中国饲料成分及营养价值表》（2020年第31版）计算营养水平。基础饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.010.T001表1基础饲粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米63.54粗蛋白质/%16.53豆粕29.30钙/%3.86豆油1.50有效磷/%0.36玉米蛋白粉0.80赖氨酸/%1.03食盐0.33蛋氨酸/%0.91石粉2.31代谢能/(MJ/kg)12.23氯化胆碱0.10L-苏氨酸0.38DL-蛋氨酸0.26磷酸氢钙1.12预混料0.31多维0.05注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 9 920 IU、VB1 4.96 mg、VB2 4.46 mg、VB5 49.6 mg、VB6 4.96 mg、VB12 0.02 mg、VD3 3 720 IU、VE 24.8 IU、VK3 2.48 mg、生物素 0.19 mg、叶酸 1.24 mg、D-泛酸 13.64 mg、烟酸 12.4 mg、抗氧化剂 124 mg、Cu 12.4 mg、Fe 99.2 mg、Mn 99.2 mg、Zn 93 mg、I 0.50 mg、Se 0.37 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.4饲养管理试验鸡饲养方式为3层全阶梯式笼养，每日8：00和16：00各饲喂1次。试验初期每组每天喂料10 kg，试验末期每组日喂料12 kg。试验鸡均自由采食、自由饮水，鸡舍定期消毒，通风、采光等条件完全一致，日均光照16 h，按正常免疫程序进行常规免疫，其他操作严格按照蛋鸡饲养管理办法进行[9]。1.5测定指标及方法1.5.1生产性能每天记录各试验组产蛋数、产蛋量、鸡只数等，按重复称量鸡蛋重量。每周以重复为单位计算产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比。产蛋率=(产蛋数/鸡只数)×100%(1)平均蛋重=总蛋重/产蛋数量(2)平均日采食量=(喂料量－剩料量)/(鸡数×试验天数)(3)料蛋比=总采食量/总蛋重(4)1.5.2蛋品质分别于试验初期、试验末期，各试验组每重复组随机取20枚蛋形完好、重量接近平均蛋重的鸡蛋（每组共计60枚），进行鸡蛋营养品质测定，全蛋测定水分、粗灰分、粗蛋白、粗脂肪，蛋黄测定卵磷脂、胆固醇。采用105 ℃烘箱直接干燥法（GB 5009.3—2016）测定水分；采用550 ℃马弗炉灼烧法（GB 5009.4—2016）测定粗灰分；采用全自动凯氏定氮仪测定（Kjeltec 8400，FOSS，DK）测定粗蛋白；采用全自动索氏抽提仪测定（Soxtec 2050，FOSS，DK）粗脂肪；卵磷脂、胆固醇指标由谱尼测试集团负责测定。1.5.3抗氧化指标试验结束后，禁食24 h，各试验组每个重复随机选取10只蛋鸡（每组共计30只），翼下静脉采血5 mL于非抗凝管中，冷冻离心机中3 000 r/min离心10 min，分离得血清，-80 ℃冰箱中保存，用于测定过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA），均采用南京建成生物工程研究所有限公司试剂盒检测。1.5.4肝脏指标使用上述血清测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）活性，均采用南京建成生物工程研究所有限公司试剂盒测定。1.6数据统计与分析采用Excel 2019软件对数据进行初步整理，SPSS 23.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA）[9]，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1蒲公英对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，饲粮中添加不同水平蒲公英对蛋鸡的产蛋率、平均蛋重、平均日采食量及料蛋比均未产生显著差异（P0.05）。但饲粮中添加1.0%蒲公英对蛋鸡的生产性能提高幅度较大。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.010.T002表2蒲公英对蛋鸡生产性能的影响组别产蛋率/%平均蛋重/(g/枚)平均日采食量/[g/(只·d)]料蛋比CG组92.96±0.0445.24±3.33104.14±3.781.99±0.100.5%EG组92.46±0.0445.43±2.45104.30±1.192.01±0.091.0%EG组97.12±0.0147.78±1.53104.72±2.031.97±0.08注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4、表5与此同。2.2蒲公英对鸡蛋营养品质的影响（见表3）由表3可知，与试验初期相比，试验末期各组全蛋粗蛋白含量分别增加1.97%、2.22%、2.24%（P0.05）；试验组的灰分含量分别降低1.00%、4.00%（P0.05），脂肪含量分别增加5.93%、2.71%（P0.05）；各组卵磷脂含量分别增加3.16%、4.27%、4.26%（P0.05）；试验组胆固醇含量分别降低0.45%、1.02%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.010.T003表3蒲公英对鸡蛋营养品质的影响组别粗蛋白/(g/100 g)水分/(g/100 g)粗灰分/(g/100 g)脂肪/(g/100 g)卵磷脂/(g/100 g)胆固醇/(mg/100 g)CG组试验初期12.17±0.06b74.23±0.061.03±0.069.97±0.218.22±0.49661.67±11.59试验末期12.41±0.02a75.33±1.211.00±0.1010.03±0.218.48±0.04664.67±9.020.5%EG组试验初期12.16±0.06b74.10±0.301.01±0.089.60±0.208.19±0.11661.33±14.29试验末期12.43±0.15a74.97±0.551.00±0.1010.17±0.008.54±0.07658.33±3.791.0%EG组试验初期12.20±0.10b74.07±0.151.00±0.009.93±0.318.21±0.05656.00±8.00试验末期12.50±0.10a74.46±0.830.96±0.0210.20±0.358.56±0.07649.33±11.72注：同列同指标数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.3蒲公英对蛋鸡血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与CG组相比，试验组蛋鸡血清T-AOC分别增强0.48%、13.08%，且1.0%EG组显著高于其他两组（P0.05）。与CG组相比，试验组蛋鸡血清CAT活性分别增强20.84%、24.34%（P0.05）。与CG组相比，试验组蛋鸡血清SOD活性分别增强5.99%、16.80%，且1.0%EG组显著高于其他两组（P0.05）。与CG组相比，试验组蛋鸡血清GSH含量分别增加8.27%、8.78%（P0.05）。与对照组相比，试验组蛋鸡血清MDA含量分别降低25.41%、29.76%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.010.T004表4蒲公英对蛋鸡血清抗氧化能力的影响组别T-AOC/(U/mL)CAT/(U/mL)SOD/(U/mL)GSH/(μmol/L)丙二醛/(μmol//L)CG组8.41±0.05c7.15±0.09b39.23±0.79b3.87±0.127.36±0.12a0.5%EG组8.45±0.08bc8.64±0.13a41.58±1.00b4.19±0.065.49±0.07b1.0%EG组9.51±0.02a8.89±0.10a45.82±0.44a4.21±0.145.17±0.16b2.4蒲公英对蛋鸡肝脏指标的影响（见表5）由表5可知，与CG组相比，试验组蛋鸡肝脏ALT、AST酶活性呈降低趋势，ALT酶活性分别降低5.43%、1.55%（P0.05），AST酶活性分别降低1.12%、6.52%（P0.05）；试验组AKP、LDH活性呈升高趋势，AKP酶活性分别比CG组升高2.97%、4.82%（P0.05），LDH酶活性分别升高1.19%、3.68%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.010.T005表5蒲公英对蛋鸡肝脏指标的影响组别ALTASTAKPLDHCG组2.58±0.42109.40±1.01120.84±3.57338.79±8.200.5%EG组2.44±0.43108.17±0.79124.43±2.82342.83±9.751.0%EG组2.54±0.61102.27±0.56126.67±2.58351.27±9.83U/L3讨论3.1蒲公英对蛋鸡生产性能的影响中草药中富含多种生物活性物质，对动物机体具有双向调节作用，中草药能够增强机体免疫机能[10]，提高动物食欲，促进动物对养分消化吸收，进而提高饲料转化率，提高动物体内新陈代谢，改善蛋鸡生产性能[11]。黄芪多糖可以刺激蛋鸡的生长发育，调节中后期产蛋鸡的气血，提高蛋鸡的抵抗能力，维持蛋鸡正常的内环境平衡，保持旺盛的生殖能力，进而提高蛋鸡的生产性能[12]。中草药具有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素、微量元素等，可提供蛋鸡生长发育所需的营养物质，改善蛋鸡新陈代谢功能，促进各类营养物质在蛋鸡体内的消化吸收，提高饲料利用率，营养物质的消化率，降低料蛋比[13]。本试验结果表明，在海兰褐蛋鸡饲料中添加不同水平蒲公英可以在一定程度上提升蛋鸡的生产性能，且添加1.0%蒲公英比添加量为0.5%的效果好，与上述研究结果相同。原因是本研究所用蒲公英品种中含有大量的活性物质，如黄酮类、多糖类等，可以调节蛋鸡的生产性能和繁殖机能[14]。因此，蒲公英中有效活性物质能够促使消化酶的分泌，提高了蛋鸡对营养物质的消化吸收，提升生产性能。3.2蒲公英对蛋品质的影响鸡蛋中含有人体所需的各种营养物质，含量丰富且比例均衡[15]，在人类膳食结构中占有重要地位[16]。改变产蛋鸡饲粮中营养素的含量、种类等，可使鸡蛋中某种或多种营养成分富集[16]。在鸡蛋主要营养成分中，蛋白质对机体生长、新陈代谢等具有重要作用。胆固醇参与体内糖类、脂肪、蛋白质代谢过程，过高的胆固醇会引发高脂血症、冠心病等心血管疾病。卵磷脂在软化血管、提高记忆力、促进儿童脑部发育、降低血压等方面具有显著功效[17]。马国红等[18]研究表明，复合中草药制剂可在一定程度上提高鲤鱼肌肉中粗蛋白含量。马玲巧等[19]在施氏鲟饲粮中添加0.5%复合中草药，结果发现，施氏鲟肌肉中粗蛋白含量显著增加，说明中草药具有提高机体粗蛋白含量作用，且与中草药种类与添加量有关系。张琳等[20]报道，黄酮类化合物可调控血清中雌二醇等物质含量，提升肝脏脂肪代谢的能力，进而促进鸡蛋中粗脂肪含量的沉积。本试验所添加的蒲公英中富含大量黄酮类活性物质，饲喂后可显著增加全蛋中粗蛋白含量，脂肪含量也随之增加，随着蒲公英饲喂时间的延长及添加水平的增加，鸡蛋中胆固醇含量有明显下降趋势，说明蒲公英产生作用需要一定的时间。刘银兰等[21]报道，饲粮中添加红豆杉叶可降低鸡蛋蛋黄中胆固醇的含量，因此，推测红豆杉叶所含的黄酮类、生物碱类活性物质可以与胆固醇部分结合，减少蛋黄中胆固醇含量的沉积。黄酮类化合物能增强磷脂的抗氧化作用，抑制卵磷脂氧化[22]，通过影响二氢鞘氨醇、植物鞘氨醇等代谢物质含量的变化，能够显著影响机体内卵磷脂、磷脂的代谢[23]，并证实黄酮类化合物可以提高鸡蛋中磷脂含量[20]。本试验卵磷脂的变化规律与上述研究结果一致。3.3蒲公英对蛋鸡血清抗氧化能力的影响血清中各项指标可以反映机体内环境变化[24]。蛋鸡产蛋高峰期时，伴随着能量大量被消耗，超氧自由基（·O2-）会在体内大量积累，引起脂质过氧化反应，产生丙二醛等物质，进一步加速细胞功能的衰减及损伤。T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶是细胞内清除自由基的主要内源酶，对清除·O2-、MDA具有重要作用[25]。研究表明，植物黄酮类化合物可以显著提高氧化应激鸡血清中T-AOC的含量，且提高SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化酶的活性，对体内超氧自由基及过氧化产物具有较强的清除能力[26]。王留等[6]指出，蒲公英水提物质可显著改善肉仔鸡血清中T-AOC、SOD等抗氧化酶活性，增强机体抗氧化能力，清除脂质过氧化所产生的MDA，起抗衰老作用。本试验结果显示，当饲粮中添加蒲公英，随着饲喂时间的延长及添加水平的增加，各试验组中T-AOC、CAT、SOD等活性显著高于对照组，各试验组中过氧化产物MDA含量呈现显著性下降，该试验结果与上述研究结果相同。因此，蒲公英中所富含的黄酮类化合物、酚酸类化合物等均具有较强的抗氧化能力，能够抑制体内·O2-的活性，阻止其对正常细胞的侵蚀，进而改善产蛋高峰期蛋鸡机体的抗氧化能力。3.4蒲公英对蛋鸡肝脏指标的影响血清中相关酶浓度的变化可以反映机体新陈代谢能力，酶浓度是组织细胞膜完整性的标志[27]。健康机体细胞内酶极少量被释放到血浆中，只有当组织细胞膜发生病变，改变膜透性时，细胞内酶才会被大量释放到血浆中，进而会引起血清中酶浓度明显升高[28]。ALT、AST是动物细胞内重要的转氨酶，其中尤以肝细胞中含量最多；LDH是一种糖酵解酶，广泛分布在肾脏细胞中[29]。肝脏、肾脏作为体内最主要的解毒、排毒器官，其代谢功能的正常直接影响着机体的健康。中草药的代谢主要发生在肝脏中。近年来，中草药引起的药物性肝损伤比例高达20%[30]，因此，血清中ALT、AST、LDH酶活性是检测动物机体肝功、肾功的重要指标。当动物肝脏细胞、肾脏细胞发生病变时，其细胞膜透性随之变大，细胞内ALT、AST、LDH等酶便会渗透进入血液中，使血清中酶活性大幅升高[29,31]。本试验结果表明，当饲喂复蒲公英后，蛋鸡血清中ALT、AST、LDH等酶活性均未异常升高，说明蒲公英不会对蛋鸡的肝脏、肾脏造成损伤，ALT、AST酶活性较对照组却有降低趋势，添加适量蒲公英对转氨酶有一定的降低诱导效果，在保护肝脏免受损伤方面发挥着积极作用。AKP作为机体溶酶体的重要组成部分，是一种非特异性磷酸单酯酶，促进磷酸基团代谢与转运过程，加快体内物质运输，提升机体免疫能力与抗应激能力[32]。齐茜等[32]和刘红柏等[33]研究表明，在饲喂中草药条件下，试验动物的新陈代谢能力和免疫能力均得到提高。本试验中，蛋鸡饲养正值高温气候，试验组蛋鸡血清中AKP活性表现出升高趋势，表明蛋鸡可能通过提高自身代谢系统来调节因高温引起的酸碱失衡等集体不适状况，从而减缓机体的热应激效应。4结论饲粮中添加蒲公英可以降低蛋中胆固醇含量，提高卵磷脂含量，改善鸡蛋的营养品质，增强机体的抗氧化能力，同时保护蛋鸡肝脏，减缓热应激效应。本试验条件下，蒲公英最适添加水平为1.0%。