口蹄疫（foot and mouth disease，FMD）是一种由口蹄疫病毒引起的感染猪、牛、羊、鹿等偶蹄动物的急性、热性和接触性传染病，临床特征表现为口腔黏膜、蹄部及乳房皮肤出现水疱和烂斑，具有传染性强、发病急、传播快等特点[1-2]。世界动物卫生组织（OIE）将口蹄疫列为A类动物疫病，我国将口蹄疫列为一类动物传染病，也是《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》中优先防治和重点防范的动物疫病之一[3-4]。为掌握辽宁省近年猪口蹄疫免疫效果及变化趋势，研究对2018—2021年春、秋两季猪口蹄疫血清O型和A型免疫抗体的监测数据进行整理分析，查找辽宁省口蹄疫防控风险点，以期为辽宁省猪口蹄疫的有效防控提供参考[5]。1材料与方法1.1样品来源2018—2021年，于辽宁省内14个地级市，共采集口蹄疫免疫28 d猪血清6 218份。采样时间集中于4—10月；采样场点兼顾规模化养殖场和散养农户，其中覆盖规模化养殖场168个和散养农户67个。按照预期抗体合格率90%、95%置信水平、10%可接受误差条件下进行全群随机抽样[6]。1.2主要试剂口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒和口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所。1.3试验方法采用液相阻断-酶联免疫吸附试验方法进行血清抗体检测，操作参考《口蹄疫诊断技术》（GB/T 18935—2018）[7]；被检测样本抗体效价大于或等于1∶128，即判为口蹄疫O型抗体阳性；1∶64~1∶128时，判为可疑；小于1∶64，判定为阴性。可疑血清样品可以重测；重测抗体效价大于或等于1∶128，判为阳性，小于1∶128判为阴性[8]。2结果与分析2.1辽宁省不同年份口蹄疫抗体监测情况（见表1、表2）由表1、表2可知，2018—2021年对全省共235个养殖场点进行口蹄疫抗体监测（包括规模化养殖场168个和散养农户67个），共采集样品6 218份，由于样品析出血清效果差异（部分样品血清析出量较少），部分样本仅开展一项抗体检测。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.02.016.T001表1辽宁省2018—2021年口蹄疫O型抗体监测情况Tab.1Surveillance of FMD O-type antibody in Liaoning Province from 2018 to 2021项目阳性场点数/个监测场点数/个场群合格率/%阳性个体数/个监测个体数/个个体合格率/%2018年455589.091 0991 22090.082019年354087.5081393586.952020年718484.521 8572 16385.852021年445678.571 3271 68078.99合计199235—5 0965 998—平均值——84.68——84.96XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.02.016.T002表2辽宁省2018—2021年口蹄疫A型抗体监测情况Tab.2Surveillance of FMD A-type antibody in Liaoning Province from 2018 to 2021项目阳性场点数/个监测场点数/个场群合格率/%阳性个体数/个监测个体数/个个体合格率/%2018年305356.606691 13059.202019年394684.7878097580.002020年598073.751 6542 03781.202021年455680.361 3601 68080.95合计173235—4 4635 822—平均值——73.62——76.66口蹄疫O型抗体个体免疫合格率和场群免疫合格率分别为84.96%、84.68%；口蹄疫A型抗体个体免疫合格率和群体免疫合格率分别为76.66%、73.62%，均达到农业部不低于70%的要求。O型抗体合格率呈逐年小幅度下降趋势，2018年A型抗体合格率明显低于其他年份，2018年后逐年上升。2.2辽宁省不同地级市口蹄疫抗体监测情况（见表3、表4）由表3、表4可知，2018—2020年共监测了14个地级市的179个养殖场点的口蹄疫免疫抗体水平（2021年监测场点未计入统计）。各市O型抗体个体免疫合格率为71.19%~95.16%，场群合格率为72.72%~100.00%，均达到农业农村部的要求；各市A型抗体个体免疫合格率为58.33%~91.67%，场群合格率为52.16%~93.90%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.02.016.T003表3辽宁省2018—2021年部分地级市口蹄疫O型抗体监测情况Tab.3Surveillance of FMD O-type antibody in some prefecture-level cities in Liaoning Province from 2018 to 2021城市阳性场点数/个监测场点数/个场群合格率/%阳性个体数/个监测个体数/个个体合格率/%地市A121578.5722731572.06地市B111291.6728531091.93地市C1313100.0031333094.85地市D81172.7221727578.91地市E1717100.0045149092.04地市F111291.6727530590.16地市G111384.6230033390.09地市H121485.7131536087.50地市J91090.0023926091.92地市K111384.6228533585.07地市M91275.0022631571.75地市L1212100.0027129093.45地市N121392.3128531291.35地市P1212100.0027830890.26XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.02.016.T004表4辽宁省2018—2021年部分地级市口蹄疫A型抗体监测情况Tab.4Surveillance of FMD A-type antibody in some prefecture-level cities in Liaoning Province from 2018 to 2021城市阳性场点数/个监测场点数/个场群合格率/%阳性个体数/个监测个体数/个个体合格率/%地市A101566.6728535580.25地市B101283.3325731082.90地市C91275.0015027554.54地市D71163.6413325552.16地市E131776.4742650584.36地市F71258.3320527474.81地市G81361.5423830378.55地市H91464.2813524056.25地市J71070.0016121076.67地市K111478.5731135388.10地市M71258.3318329562.33地市L71258.3319228567.36地市N101376.9229539774.31地市P81266.6720127074.442.3辽宁省不同规模养殖场口蹄疫抗体监测情况（见表5、表6）由表5、表6可知，2018—2021年共监测场点179个（2021年部分监测场点未计入统计），其中，规模场112个，散养户67个。规模场和散养户的O型抗体个体免疫合格率分别为88.08%、85.27%，场群免疫合格率分别为90.18%、88.06%。规模场和散养户的A型抗体个体免疫合格率分别为78.11%、57.64%，场群免疫合格率分别为75.89%、56.72%。个体免疫合格率和场群免疫合格率规模场均显著高于散养户（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.02.016.T005表5辽宁省2018—2021年不同规模养殖场口蹄疫O型抗体监测情况Tab.5Surveillance of FMD O-type antibody in different scales farms of in Liaoning Province from 2018 to 2021项目阳性场点数/个监测场点数/个场群合格率/%阳性个体数/个监测个体数/个个体合格率/%规模场10111290.183 0583 47288.08散养户596788.069091 06685.27XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.02.016.T006表6辽宁省2018—2021年不同规模养殖场口蹄疫A型抗体监测数据Tab.6Surveillance of FMD A-type antibody in different scales farms of in Liaoning Province from 2018 to 2021项目阳性场点数/个监测场点数/个场群合格率/%阳性个体数/个监测个体数/个个体合格率/%规模场8511275.89a2 5873 31278.11a散养户386756.72b5851 01557.64b3讨论3.1不同年份口蹄疫抗体监测情况采集样品时间覆盖2018—2021年，4年中口蹄疫O型免疫效果均保持较高水平，但呈逐年小幅下降，原因可能是养殖场户均较为重视猪口蹄疫O型的免疫，积极性较高。自2018年非洲猪瘟暴发，各养殖场户生物安全意识显著增强，饲养场区严格封闭管控，非本场人员不得进入场区，强制免疫方式也随之改变。但部分场户采用自主领取疫苗、自主免疫的方式，疫苗的冷链运输保存和免疫注射技术难以得到有效保障，一定程度上影响了免疫效果。2018年口蹄疫A型免疫效果较差（未达到70%），随后3年明显提高且均维持较高水平，其原因可能是2018年之前，猪口蹄疫A型不是主要流行毒株血清型，未列入国家强制免疫范围，养殖场户免疫积极性较低，通常采用口蹄疫O型单价疫苗免疫；猪口蹄疫A型免疫列入国家强制免疫范围后，口蹄疫O/A双价疫苗推出，猪口蹄疫A型免疫密度逐年升高，免疫效果也随之逐年提高[9]。3.2不同规模养殖场口蹄疫抗体监测情况由不同规模养殖场口蹄疫抗体监测情况分析可知，规模场的个体免疫合格率和场群免疫合格率均明显高于散养农户。规模场一般配备专职兽医，执行适合本场的免疫程序，在疫苗保存、免疫次数、免疫密度、防疫水平、免疫抑制类疫病控制方面均优于散养农户。因此，规模场免疫效果高于明显散养农户[10-11]。3.3不同血清型口蹄疫抗体监测情况综合检测结果可知，口蹄疫O型免疫效果明显优于口蹄疫A型免疫效果。从免疫密度角度考虑，2018年之前，O型口蹄疫为猪口蹄疫主要流行血清型，口蹄疫O型单价疫苗使用广泛，免疫基础好，养殖场户较为重视，口蹄疫O型免疫密度远高于A型。从疫苗免疫效果角度分析，2018年口蹄疫O/A双价疫苗广泛使用后仍存在免疫效果差异现象。有部分学者认为，O/A双价疫苗中两种毒株的病毒含量不同，导致两种抗体效价存在差异[12]。从检测方法角度分析，目前检测口蹄疫免疫抗体一般采用酶联免疫吸附试验方法（ELISA）；检测不同血清型抗体所选择的包被抗原不同，导致ELISA试验过程中，抗原抗体结合能力存在差异（O型检测方法包被抗原的抗原性优于A型检测方法）。虽然采用同种原理试验方法，但敏感性和特异性也存在差异[13-15]。3.4局限性本监测数据自2018年起至2021年结束，覆盖辽宁省14个地级市，采样场点包括规模场和散养户。因无法做到概率抽样，个别年份、地区、场点采样数量较少，可能存在系统误差；且采样仅区分规模化养殖场和散养农户，养殖场饲养规模未做区分。因此，本试验仅初步了解辽宁省2018—2021年口蹄疫免疫效果，后续可开展深入系统的免疫效果分析，以期为辽宁省口蹄疫防控提供全面科学的数据支持[6]。4结论监测结果分析表明，2018—2021年辽宁省猪场口蹄疫免疫效果总体较好，平均个体免疫合格率和场群免疫合格率均在70%以上，但个别地区散养农户的口蹄疫A型免疫效果不佳。因此，需持续加强散养户的口蹄疫A型的免疫和监测，降低口蹄疫发生风险。