保育猪指断奶至10周龄的仔猪[1]，是整个生猪生长发育中尤为重要的一个阶段。保育阶段如何降低断奶应激、有效防控腹泻、增强自身免疫力、提高存活率和生长速度等是仔猪养殖中的主要问题。在饲用抗生素的全面禁用及氧化锌的限量使用背景下，寻找绿色、健康、安全的植物提取物替代抗生素的使用是目前养殖业的必然趋势[2]。五倍子是一味传统的中药[3]。五倍子主要含有单宁酸、没食子酸等活性成分，具有良好的收敛抗腹泻[4]、抑菌[3]、抗氧化[5]、抗病毒[6]等作用。五倍子作为饲料添加剂可有效降低动物腹泻率，提高动物抗病能力及生长性能。因此，本试验研究五倍子对保育猪生长性能、肠道菌群及其免疫功能的影响，探讨中草药的最适添加量，为中草药在仔猪生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验使用的包被五倍子提取物（单宁酸≥81%）购自西安瑞尔丽生物工程有限公司；食品级氧化锌（Zn≥76.3%）购自湖南普乐美饲料有限公司；免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、补体3（C3）、补体4（C4）、白细胞介素2（IL-2）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、血糖（GLU）、谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）等试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。1.2试验设计选取150头健康（7.31±0.12）kg的（24±1）日龄“杜×长×大”三元杂交仔猪。随机分成5组，每组3个重复，每个重复10头猪。按单因素试验设计分组，对照组仔猪饲喂基础日粮；氧化锌组仔猪饲喂基础日粮+1 000 mg/kg氧化锌；中草药1组仔猪饲喂基础日粮+250 mg/kg五倍子提取物；中草药2组仔猪饲喂基础日粮+500 mg/kg五倍子提取物；中草药3组仔猪饲喂基础日粮+1 000 mg/kg五倍子提取物。试验在云南百顺三元仔猪场进行，试验期28 d。1.3基础日粮基础日粮参照NRC（2012）断奶仔猪营养需求设计与配制，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.006.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米57.0消化能/(MJ/kg)14.17膨化大豆10.0粗蛋白/%18.91豆粕12.0粗脂肪/%6.09高蛋白豆粕5.0钙/%0.85进口鱼粉3.0总磷/%0.56乳清粉2.6赖氨酸/%1.33葡萄糖2.0苏氨酸/%0.77磷酸二氢钠0.7胱氨酸+蛋氨酸/%0.64石粉0.7色氨酸/%0.20豆油3.0预混料4.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VB1 1.0 mg、VB2 0.8 mg、VB12 0.02 mg、Fe 110 mg、Mn 22 mg、Zn 85 mg、Cu 3.0 mg、I 0.15 mg、Se 0.2 mg、Ca 7.12 mg、叶酸0.4 mg、烟酸26 mg、泛酸20 mg、胆碱400 mg。2.营养水平均为实测值。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始前与试验最后1 d，清晨对仔猪空腹称重，记录初重、末重、每个重复组的耗料量，记录各组仔猪粪便情况。计算平均日增重、平均日采食量、腹泻率及料重比。试验期内每周从各组中连续取3 d粪样，混合，测定各组猪粪中水分含量[7]。平均日增重=(末重－初重)/试验天数(1)平均日采食量=耗料量/(试验天数×试验头数)(2)料重比=饲料消耗量/增重(3)腹泻率=腹泻头数/(仔猪总头数×试验天数)×100%(4)1.4.2肠道菌群试验结束时，每个重复选择体重相近仔猪1头，取盲肠中部结扎长5 cm，取出肠段用硫酸纸包被后置于液氮中保存。参考文献[8]，采用平板菌落计数法，以对数（lg CFU/g）表示。1.4.3免疫指标试验结束断料12 h，从各试验组随机选取5头试验仔猪，前腔静脉采集血液10 mL，分离血清。采用ELISA法测定各项免疫指标。1.4.4血液生化指标试验第28 d，空腹称重，各试验组随机选取5头试验仔猪，前腔静脉采血10 mL，分离血清。采用试剂盒测定血清各项指标及免疫指标含量。1.5数据统计与分析数据采用SPSS 21.0软件统计分析，Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1中草药饲料添加剂对保育猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，氧化锌组、中草药3组仔猪的平均日增重较比对照组分别提高了21.19%、19.94%，试验组仔猪的平均日增重均显著高于对照组（P0.05）；氧化锌组与中草药3组仔猪的平均日采食量比对照组分别显著提高了15.95%、15.49%（P0.05）；氧化锌组与中草药2组、3组仔猪的料重比比对照组分别降低了4.32%、1.85%、3.70%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.006.T002表2中草药饲料添加剂对保育猪生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比对照组7.29±1.0517.72±1.43c372.50±17.56c603.45±23.18c1.62±0.41氧化锌组7.38±1.2120.02±1.38a451.43±26.17a699.72±18.67a1.55±0.52中草药1组7.25±0.9218.18±1.09c390.36±23.37b636.29±25.82b1.63±0.75中草药2组7.33±1.2218.38±1.45b394.46±15.26b627.19±35.71b1.59±0.22中草药3组7.37±0.8719.88±1.26a446.76±30.78a696.95±12.78a1.56±0.83注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2中草药饲料添加剂对保育猪腹泻及粪便中水分含量的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，氧化锌组及中草药2组、3组腹泻率和便中含水量均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.006.T003表3中草药饲料添加剂对保育猪腹泻及粪便中水分含量的影响组别腹泻率粪便含水量对照组1.55±0.54ab77.18±3.62a氧化锌组0.48±0.07c73.98±2.51c中草药1组1.78±0.11a76.98±1.18a中草药2组0.83±0.15b75.18±2.93b中草药3组0.48±0.04c74.27±1.86c%2.3中草药饲料添加剂对保育猪肠道菌群的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，氧化锌组与中草药2组、3组仔猪肠道大肠杆菌、沙门菌数量均显著降低（P0.05）。氧化锌组与中草药2组、3组仔猪肠道乳酸杆菌、芽孢杆菌数量均显著提高（P0.05），中草药3组仔猪肠道芽孢杆菌数量显著高于氧化锌组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.006.T004表4中草药饲料添加剂对保育猪肠道菌群的影响组别大肠杆菌沙门菌双歧杆菌乳酸杆菌芽孢杆菌对照组6.62±0.31a4.68±0.11a6.37±0.228.63±0.01c5.31±0.01b氧化锌组5.28±0.27c3.23±0.14b6.48±0.3410.31±0.02a5.71±0.01ab中草药1组6.53±0.38a3.37±0.07b6.31±0.459.37±0.02b5.03±0.01c中草药2组6.09±0.62b2.41±0.16c6.64±0.179.89±0.03ab5.75±0.01ab中草药3组5.33±0.55c2.45±0.25c6.85±0.3310.29±0.01a6.36±0.01alg CFU/g2.4中草药饲料添加剂对保育猪免疫机能的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验组仔猪血清IgG含量显著提高（P0.05）；中药草2组、3组及氧化锌组仔猪血清IgM含量显著提高（P0.05）；中草药1组、2组、3组血清IgA含量显著提高（P0.05）；中草药2组、3组的仔猪血清C3、C4含量显著提高（P0.05）；中草药2组、3组及氧化锌组仔猪血清IL-2含量显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.006.T005表5中草药饲料添加剂对保育猪免疫机能的影响组别IgG/(g/L)IgM/(g/L)IgA/(g/L)C3/(g/L)C4/(g/L)IL-2/(μg/L)对照组1.26±0.31c0.79±0.11c2.05±0.22c0.38±0.01c0.03±0.01c12.88±2.01b氧化锌组1.81±0.27ab1.05±0.14b2.08±0.34c0.40±0.02b0.04±0.01c14.48±2.15a中草药1组2.01±0.38b0.86±0.07c2.51±0.45b0.43±0.02b0.03±0.01c13.27±1.33b中草药2组2.29±0.62a1.04±0.16b2.73±0.17ab0.49±0.03a0.05±0.01b14.61±1.17a中草药3组2.34±0.55a1.13±0.25a2.82±0.33a0.55±0.01a0.06±0.01a14.54±1.21a2.5中草药饲料添加剂对保育猪血清生化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，中草药2组、3组仔猪血清TP、GLB含量均显著提高（P0.05）；试验组仔猪血清BUN含量均显著降低（P0.05）；中草药2组、3组仔猪血清ALT活性显著降低（P0.05）；中草药1组、2组、3组仔猪血清AST活性随添加量上升有下降趋势（P0.05）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.03.006.T006表6中草药饲料添加剂对保育猪血清生化指标的影响组别TP/(g/L)GLB/(g/L)BUN/(mmol/L)TC/(mmol/L)TG/(mmol/L)GLU/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)对照组46.11±1.21b24.28±1.11c4.32±0.32a2.63±0.130.51±0.035.58±0.33115.18±10.09a65.23±5.05b氧化锌组47.37±1.52b25.35±1.54b3.08±0.21b2.11±0.170.50±0.115.41±0.18101.43±15.11b67.58±4.31a中草药1组46.36±1.98b24.87±1.08c3.36±0.35b2.37±0.480.53±0.015.56±0.24119.08±17.02a65.10±1.11b中草药2组48.62±1.37a25.17±1.36b3.54±0.11b2.49±0.230.49±0.126.10±0.31102.81±11.06b64.39±2.82b中草药3组48.53±1.05a26.40±1.24a2.95±0.92c2.29±0.150.48±0.016.12±0.6399.67±16.07c63.75±6.37b3讨论3.1中草药饲料添加对保育猪生长性能的影响研究表明，水解单宁酸可清除自由基，抑制脂质过氧化物产物生成，具有抗氧化作用，对多种细菌、真菌、病毒等有明显抑制作用[9]，且与抗生素及氧化锌相比，更为绿色安全、无毒副作用、无残留[10]，可广泛应用于动物养殖中。由于仔猪早期容易出现仔猪早期断奶综合征，导致仔猪发育受阻、腹泻、易感疾病，甚至死亡，进而影响经济效益。胡成等[11]研究发现，在保育猪基础日粮中添加1 000 mg/kg水解单宁酸，70日龄转群体重增加了7.46 kg，平均日采食量增加了183 g，腹泻率及死淘率分别均显著降低了4.67%、6.49%。曹沛文[12]研究发现，在乳仔猪饲料中添加0.15%包被单宁酸，仔猪的平均日增重显著提高22.2%；腹泻率显著降低51.3%；料重比降低10.3%。代珍青等[13]研究发现，添加1 kg/t水解单宁酸可显著降低仔猪腹泻率，提高日增重，降低料重比。本试验中，中草药3组与氧化锌组仔猪的平均日采食量均显著提高；中草药2组、3组仔猪的料重比显著降低；中草药3组与氧化锌组在降低仔猪腹泻率与粪便含水量方面效果相当。因此，水解单宁酸可有效改善保育猪肠道健康，减缓肠道蠕动，降低炎性渗出物，从而降低仔猪腹泻率及粪便中含水量，提高仔猪生长性能，并在实际生产中可替代部分氧化锌的使用。3.2中草药饲料添加剂对保育猪肠道菌群的影响猪霍乱沙门菌与金黄色葡萄球菌感染是引起仔猪死亡率高，引发仔猪并发感染其他疾病的重要原因之一。王双双等[14]研究表明，金黄色葡萄球菌对五味子提取物中度敏感。李东等[15]研究表明，五倍子提取物对猪霍乱沙门菌有较好的抑菌效果，最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）均为31.25×103 mg/L。王婧等[16]研究发现，对产ESBLS大肠埃希菌的2株菌株的MIC分别为32、64 μg/mL，效果均优于阿莫西林（256 μg/mL）与氟苯尼考（512 μg/mL）等抗生素。沈水宝等[17]研究表明，使用包被的五味子提取物替代氧化锌可提高仔猪盲肠中粪杆菌属浓度，优势菌门中厚壁菌门丰度高达73.89%，但拟杆菌门丰度有所降低。本研究结果表明，添加五倍子提取物可降低仔猪盲肠中致病菌大肠杆菌与沙门菌数量，提高有益菌乳酸杆菌与芽孢杆菌数量，效果与添加量呈正相关，且效果与氧化锌相当，但本次试验并未发现对双歧杆菌具有明显效果。五倍子提取物对仔猪其余肠段内菌群的作用，仍需更进一步研究。3.3中草药饲料添加剂对保育猪免疫功能的影响由于保育猪断奶应激及仔猪自身免疫还未健全，导致此阶段仔猪极易感染疾病，严重影响日后仔猪的生长发育[18]。免疫球蛋白水平是反映体液免疫能力常见指标之一，球蛋白含量升高可反映机体免疫力提高；IL-2能够反映机体细胞免疫水平；补体C3、C4是机体重要的免疫效应系统之一。胡爱国[19]研究表明，添加100~400 mg/kg单宁酸可提高肠道黏膜分泌型免疫球蛋白含量，促进猪十二指肠中IL-2表达水平，抑制IL-6的表达。解湧芳[20]研究表明，添加2%或4%的单宁酸均能够显著提高绵羊血液IgA、IgG及IgM含量，显著降低肿瘤坏死因子和IL-1β含量。蓝林诚等[21]研究发现，保育猪日粮中添加500 g/t的单宁酸与添加1.5 kg/t的氧化锌，在IgG和IgA含量上无显著差异，而IgM含量单宁酸组比氧化锌组高100%。本试验中，中草药2组、3组仔猪血清IgG、IgA、IgM、IL-2及补体C3、C4含量比对照组均显著提高，且中草药3组效果优于氧化锌组。因此，五倍子提取物可在一定程度上改善保育猪免疫应答水平，提高仔猪免疫能力，且部分效果优于氧化锌。3.4中草药饲料添加剂对保育猪血清生化指标的影响血清中各项指标可反映机体综合代谢及健康状况，TP可反映机体对饲料中蛋白质的吸收情况，GLB可反映机体免疫力情况，CHO可反映机体对胆固醇合成与代谢情况，AST、ALT、BUN则反映机体肾功能代谢及健康情况[22]。本试验结果表明，在保育猪基础日粮中添加五倍子提取物可显著提高血清TP、GLB含量，降低BUN含量、ALT活性，AST活性随添加量增加呈下降趋势，并对CHO、GLU、TG含量无不利影响。宋妍妍等[23]研究表明，在饲料中添加0.2%~2.0%的单宁酸可提高仔猪血液中白蛋白浓度，降低尿素氮浓度。因此，添加五倍子提取物对保育猪机体免疫与代谢有一定的促进作用，五倍子提取物对动物机体肝脏无损害作用，对机体其他血清指标也无负面影响。4结论保育猪基础日粮中添加五倍子提取物，可改善保育猪生长性能、血清生化指标等，调节肠道菌群，改善机体自身免疫力，抑制腹泻。五倍子提取物可替代部分氧化锌的使用，以添加1 000 mg/kg包被五味子提取物为宜。