中药饲料添加剂替代抗生素可提高猪的生产性能，促进生长发育，改善猪肉品质和肠道菌群结构等[1-4]。王立斌等[5]研究表明，在育肥猪日粮中添加中草药配伍制备的中草药复方制剂能够显著提高育肥猪的免疫功能、生长性能和屠宰性能。清热类中草药金银花、黄芩、黄连、板蓝根、贯众、穿心莲等[6]对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌等革兰氏阴性和阳性菌均具有杀灭和抑制作用[7]，能够预防病毒、钩端螺旋体、致病性真菌和原虫感染[8]。于梦影等[9]研究发现，在蛋鸡日粮中加入硫黄负离子矿物质添加剂可提高鸡蛋蛋重、蛋壳质量，改善鸡蛋营养品质，延长保鲜时间，降低蛋黄的胆固醇和甘油三酯含量[10]。于明等[11]研究表明，在日粮中添加1.5%的中草药复方制剂能够显著提高仔猪平均日增重和饲料利用率，改善仔猪肠道中大肠杆菌和乳酸杆菌的数量。因此，中草药添加剂可在一定程度上替代抗生素[12]。本试验主要研究中药负离子添加剂对育肥猪肠道结构及菌群的影响，为中药负离子在育肥猪实际生产中的营养提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验所采用的中药包括红枣、陈皮、黄芪、红曲等；负离子指脱毒的硫黄负离子[13]。负离子中药硒锗组合制剂由54%中药添加剂和46%负离子添加剂混合制成。1.2试验设计试验选取健康的“杜×长×大”三元杂交生长育肥猪32头，体重（39.99±2.16）kg。随机分为对照组、试验组，每组4个重复，每个重复4头。对照组育肥猪饲喂基础日粮，试验组猪饲喂基础日粮+0.25%负离子中药组合制剂。基础日粮组成及营养水平见表1。预试期10 d，正式试验期80 d，试验时间为2020年8月至11月。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100玉米67消化能/(MJ/kg)13.99豆粕22粗蛋白质/%19.35麸皮7钙/%1.01预混料4总磷/%1.90赖氨酸/%0.56蛋氨酸/%0.17苏氨酸/%0.14注：1.每千克预混料为日粮提供：VA 158 990 IU、VD3 50 100 IU、VE 1 100 IU、VK3 55 mg、VB1 58 mg、VB2 170 mg、VB6 78 mg、VB12 0.8 mg、D-生物素5 mg、D-泛酸600 mg、叶酸35.0 mg、烟酰胺650 mg、氯化胆碱6 300 mg、铁210 mg、铜560 mg、锰1 100 mg、锌1 975 mg、碘11.5 mg、硒8.9 mg、铬4.88 mg、L-赖氨酸33 170 mg、植酸酶54 000 FYT、β-木聚糖酶5 641 FXU。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验地点在吉林省延边州图们市富岩有机猪肉养殖有限公司。试验开始前1 w对猪舍内进行清扫，甲醛-高锰酸钾熏蒸消毒。每天7：00、15：00饲喂，猪自由饮水，及时调整舍内通风量，关注猪的健康状态，8月猪舍温度22 ℃，空气湿度65%。1.4样本采集参照文献[14]中血样的采集和血清的制备方法，采集血清。试验第24、48、70和90 d，每个重复随机选取1头猪，无菌直肠采集粪样，灭菌低温保存。1.5测定指标及方法1.5.1肠道形态宰杀后取十二指肠、空肠和回肠，4%多聚甲醛固定，制作石蜡切片，显微镜观察分析，测定肠绒毛高度和隐窝深度，计算绒隐比。1.5.2粪样菌群计数MRS培养基和麦康凯琼脂培养基分别涂板计数粪样中的总菌、乳酸菌和大肠杆菌和地衣芽孢杆菌，细菌数采用lgCFU/g表示。1.5.3血清生化指标参照文献[15]测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）含量。谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶（CK）活性；血清激素、血清抗氧化指标由北京华英生物技术研究所检测。1.5.4血液生理指标参考文献[16]方法检测包括白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、淋巴细胞百分数（LY%）、血红蛋白（HGB）、红细胞比容（HCT）、血小板（PLT）。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行整理，SPSS软件进行方差分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1中药负离子对猪肠道结构的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验组猪的十二指肠、空肠、回肠绒毛高度均显著提高（P0.05），两组间隐窝深度和隐绒比差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T002表2中药负离子对猪肠道结构的影响组别十二指肠空肠回肠绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比对照组348.96±17.70b138.61±8.632.52±0.16394.69±13.17b133.61±3.082.96±0.15269.00±14.06b133.00±5.732.03±0.19试验组383.34±16.82a141.20±5.522.72±0.07418.56±16.43a137.25±5.623.05±0.14290.12±14.96a132.58±5.222.19±0.04注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2中药负离子对猪肠道菌群的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验组猪直肠中双歧杆菌、乳酸杆菌数量均显著提高（P0.05），大肠杆菌数量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T003表3中药负离子对猪肠道菌群的影响组别直肠双歧杆菌直肠乳酸杆菌直肠大肠杆菌对照组8.66±0.32b8.38±0.32b6.03±0.23a试验组9.76±0.35a9.30±0.38a5.47±0.17bCFU/g2.3中药负离子对猪血清蛋白代谢的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组猪血清中TP含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T004表4中药负离子对猪血清蛋白代谢的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)BUN/(mmol/L)对照组64.34±2.12b22.94±2.6241.73±3.9241.73±3.92试验组70.94±2.75a24.94±2.1945.71±3.7346.81±0.332.4中药负离子对猪血清代谢酶活性的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验组猪血清中ALP、AST活性均有所升高；ALT、CK活性分别降低了0.47%和1.25%，但差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T005表5中药负离子对猪血清代谢酶活性的影响组别ALPASTALTCK对照组92.889±4.07042.760±1.28045.837±1.7291 180.524±227.410试验组93.544±3.40045.300±2.32045.621±2.4651 165.825±186.294U/L2.5中药负离子对猪血清激素指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，试验组猪的生长激素、生长抑素、胰岛素生长因子的活性以及三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸的含量均显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T006表6中药负离子对猪血清激素指标的影响组别总胆红素/(μmol/L)生长激素/(μg/L)生长抑素/(ng/L)皮质醇/(μg/L)胰岛素生长因子/(μg/L)三碘甲腺原氨酸/(μg/L)四碘甲腺原氨酸/(μg/L)对照组1.17±0.053.41±0.07b23.32±2.18a64.13±3.1644.87±3.34b0.41±0.02b41.45±1.46b试验组1.20±0.063.61±0.05a19.72±1.26b68.43±4.0557.30±4.05a0.47±0.03a44.92±1.75a2.6中药负离子对猪血清抗氧化指标的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，试验组猪血清过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性及总抗氧化能力均有所升高，丙二醛含量有所降低（P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T007表7中药负离子对猪血清抗氧化指标的影响组别过氧化氢酶/(U/mL)超氧化物歧化酶/(U/mL)谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)丙二醛/(μmol/L)总抗氧化能力/(U/mL)对照组33.57±1.3385.89±1.79582.45.±12.606.60±0.148.14±0.19试验组34.50±1.0093.25±1.05629.60±3.376.28±0.138.53±0.172.7中药负离子对猪血液生理指标的影响（见表8）由表8可知，与对照组相比，试验组猪血液WBC、RBC、LY、HGB、HCT、PLT含量均有所升高，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.005.T008表8中药负离子对猪血液生理指标的影响组别WBC/(×109/L)RBC/(×1012/L)LY/%HGB/(g/L)HCT/%PLT/(×109/L)对照组13.92±1.873.33±1.2465.14±4.32118.95±7.8623.66±3.39206.59±25.54试验组14.57±3.153.71±0.9866.01±2.26120.17±9.8924.82±3.82222.21±16.573讨论3.1中药负离子对育肥猪肠道结构的影响研究表明，日粮中添加中草药添加剂对畜禽生长、繁殖、泌乳和抗病等各方面均具有明显促进作用，可提高饲料利用率，降低饲料成本[17]。小肠是单胃动物消化吸收的主要器官，小肠绒毛越长，隐窝越浅，吸收能力越强[18]。Hanczakowska等[19]研究表明，中草药提取物能够通过改善仔猪小肠道形态对仔猪生产性能产生积极影响，与王鹏等[20]试验结果一致。于天月等[21]研究发现，在日粮中添加中草药饲料添加剂可使猪的十二指肠绒毛高度增加11.6%，绒毛高度与隐窝深度比值也显著提高。本试验中，试验组猪的十二指肠、空肠、回肠绒毛高度均有所提高，与上述研究结果相近。中药负离子添加剂在一定程度上能够改善育肥猪肠道结构，强健消化机能，促进营养物质的吸收，提高育肥猪生长速度。3.2中药负离子对育肥猪肠道菌群的影响肠道微生物菌群结构直接影响动物机体健康，正常肠道菌群紊乱时，胆汁酸的代谢将受到一定程度的影响，进而对机体产生不利影响。研究表明，中草药制剂对改善肠道微生物菌群结构具有显著作用[22-23]。地衣芽孢杆菌属革兰氏阳性耗氧菌，能够促进有益厌氧菌（如乳酸菌）的生长繁殖[24]。地衣芽孢杆菌在肠道内大量繁殖成为优势菌群，能够抑制致病菌生长繁殖，改善动物肠道菌群健康，提高动物生产性能。因此，地衣芽孢杆菌适用于水产养殖业和饲料添加剂行业。许培文[25]研究表明，地衣芽孢杆菌菌落稳定且易保存，在肉鸡日粮中添加地衣芽孢杆菌及其代谢产物可提高肉鸡生产性能和肉鸡屠宰性能。在断奶仔猪常规饲料中添加1.0%中草药添加剂的玉米-豆粕型日粮，试验组断奶仔猪肠道中的乳酸杆菌、双歧杆菌数量均高于对照组[26]。陈晓明等[27]在28日龄断奶仔猪基础日粮中添加1.0%的中草药渣，结果发现，与对照组相比，试验组肠道内乳酸杆菌、双歧杆菌数分别增加47.33%和83.95%，大肠杆菌、梭菌数分别下降41.35%和29.93%。本试验中，与对照组相比，添加中药负离子添加剂的试验组猪直肠中双歧杆菌、乳酸杆菌数量显著提高，大肠杆菌数量显著降低，可见中药负离子添加剂对优化猪肠道菌群结构具有重要作用。3.3中药负离子对育肥猪血清抗氧化及血液生理指标的影响党永芝[28]通过在断奶仔猪日粮中添加中草药混合制剂发现，试验进行至第7 d，4组仔猪血清中的总蛋白、白蛋白含量均极显著高于1组、2组、3组，球蛋白含量显著高于1组、2组。本试验中，试验组猪血清总蛋白含量比照组显著提高。东彦新等[29]选用麦芽、山药、胡麻子等制成添加剂饲喂肉鸡，结果表明，添加剂能够有效提高肉鸡的生长速度，降低料重比，提高饲料转化率。血清酶活性与生产性能相关，肌酸激酶等酶的活性与应激有关。较高的血清碱性磷酸酶活性与骨骼更新活跃有关[30]。黄一帆等[31]研究表明，断奶后1 d仔猪血清中肌酸激酶活性中药组肌酸激酶显著升高随后下降，说明断奶应激逐渐减弱。本试验中，碱性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酸激酶活性虽无明显变化，但中草药添加剂可通过影响代谢酶的活性，减少应激并增强成骨细胞活动。朱南山等[32]采用提取的中药复方多糖饲喂断奶仔猪，结果发现，与抗生素组相比，中药多糖组猪血清中的生长激素水平、三碘甲腺原氨酸水平、四碘甲腺原氨酸水平、胰岛素水平均呈显著或极显著提高。本试验中，与对照组相比，试验组中的生长激素、生长抑素、胰岛素生长因子、三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸水平均显著提高，与上述试验结果一致。抗氧化性能指标以及白细胞、红细胞、淋巴细胞、血红蛋白、红细胞比容、血小板含量虽无显著变化，但中草药制剂对抗氧化性能以及血液生理指标存在一定影响。何维敏等[33]采用发酵中药微生态制剂饲喂断奶仔猪，结果发现，与对照组和抗生素组相比，试验Ⅰ组、Ⅱ组血清总超氧化物歧化酶活性分别提高了17.75%、22.29%和32.25%、37.76%；血清谷胱甘肽过氧化物酶活性均极显著提高。张佳等[34]研究发现，复方中药清增康可对断奶仔猪血液生化指标产生一定影响，仔猪白细胞数、淋巴细胞百分比均有所提高。骆雪等[35]研究发现，在断奶仔猪饲粮中添加杜仲、黄芪、山楂、甘草配伍的中草药添加剂，对仔猪有明显的促生长、降低腹泻率的作用，可显著增强机体免疫力及抗氧化能力。上述结论与本试验结果一致，说明在育肥猪日粮中添加中药负离子添加剂对其生长发育具有积极作用。4结论本试验条件下，中药负离子制剂具有改善肠道菌群及结构的作用，能够显著提高机体免疫及抗氧化性能，对促进动物生长发育具有重要意义。