和田黑鸡是新疆和田地区传统的优良肉、蛋兼用型地方性品种，该品种鸡体格较小，以放牧散养为主，饲养周期较长，具有耐粗饲、抗逆性强、耐高温、抗严寒等特点[1]。抗生素的不合理使用会导致动物产品药物残留超标，使机体产生耐药性，抑制机体免疫功能，杀灭肠道菌群，污染环境[2]。中草药来源绿色、活性成分多样、安全、成本低、低污染、低毒副作用、不产生抗药性和耐药性，临床常用中草药替代抗生素[3]，具有促进组织器官发育、提高器官指数、增强免疫力、提高血液免疫球蛋白的含量、提升疫苗免疫后的抗体水平等功效[4]。如黄芪、党参可促进机体器官发育，增强免疫力，提高抗体水平[5-7]。白术提取物可提高胸腺、脾脏、法氏囊指数，提高免疫活性，增强机体免疫屏障，提高抗体水平[8-9]。甘草提取物可显著提高新城疫免疫血清抗体水平，促进免疫器官发育[10]。本试验在和田黑鸡基础日粮中添加复方中草药，探究其对和田黑鸡肉鸡的生长性能、免疫器官指数、抗体水平、血清免疫球蛋白的影响，为复方中草药在和田黑鸡的生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料复方中草药制剂购自河南金百合生物科技有限公司，生产日期为2021年1月20日，生产批号为20210101。复方中草药制剂由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、酿酒酵母菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌发酵而成，枯草芽孢杆菌≥1.0×107 CFU/g，水分不超过10%。原生中草药配方由黄芪、党参、甘草、刺五加、白术、茯苓、茵陈、栀子、柴胡中草药组成，组方功能为扶正祛邪、益气健脾、增强解毒、提高免疫力。饲用金霉素预混剂购自驻马店华中正大有限公司，浓缩料购自新疆天山预混料饲料厂。1.2试验设计选取35日龄健康且体重相近的和田黑鸡350只，由新疆昆仑尼雅生态农牧发展有限公司提供，随机分为5组，每组5个重复，每个重复14只鸡（公、母各半）。预试期7 d，正式试验期70 d。试验组分别为：试验Ⅰ组（对照组）鸡饲喂基础日粮，试验Ⅱ组鸡饲喂基础日粮+0.1%金霉素，试验Ⅲ组鸡饲喂基础日粮组+0.1%复方中草药，试验Ⅳ组鸡饲喂基础日粮+0.5%复方中草药；试验Ⅴ组鸡饲喂基础日粮+1.0%复方中草药。饲喂玉米-豆粕型基础饲料（不含抗生素成分），饲料和药物混匀饲喂。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.008.T001表1基础日粮组成及营养水平项目35~77日龄78~112日龄原料组成/%玉米57.8765.99麦麸9.116.66豆油0.152.48浓缩料32.8724.87合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.6513.51粗蛋白/%19.4316.58钙/%0.750.57磷/%0.550.47有效磷/%0.290.24赖氨酸/%0.950.78蛋氨酸/%0.350.29赖氨酸＋胱氨酸/%0.680.59注：营养水平为计算值。1.3饲养管理试验于新疆昆仑尼雅生态农牧发展有限公司和田黑鸡种鸡场开展，试验期各组管理条件一致，立体式4层笼养设备饲喂，乳头式饮水器供水。试验前对鸡舍设备、地面进行全面清洗和消毒。鸡舍内温度和湿度按照要求进行控制，采用自然光照和人工光照相结合，负压机械自动通风。试验鸡群自由采食、饮水，免疫程序按40日龄免疫新支流三联苗，60、90日龄免疫新支二联苗进行免疫。每周定期对鸡舍进行清扫和消毒，每周进行机械清除鸡粪1~3次，保持鸡舍卫生环境清洁。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验期以各重复组为单位，记录每日饲喂量、剩余料量、鸡死亡数，记录和田黑鸡的初始体重；试验结束后进行空腹称重，统计各重复组的末重、采食量、死亡数，计算各重复的平均日采食量、平均日增重、料重比、存活率。存活率=(总存栏数－死亡数)/总存栏数×100%(1)平均日采食量=总采食量/(试验鸡数×天数)×100%(2)平均日增重=(末重－初重)/(试验鸡数×天数)×100%(3)料重比=平均日采食量/平均日增重(4)1.4.2免疫器官指数试验结束以每个重复组为单位，随机挑选体重、健康相近的2只和田黑鸡停饲12 h，称重，颈部放血处死，摘取肝脏、法氏囊、脾脏、胸腺，剥结缔组织和筋膜等，擦干水，称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重量/活重(5)1.4.3抗体效价每个重复组随机挑选2只鸡，每只翅静脉采血5 mL，室温析出血清，-20 ℃保存。新城疫（ND）抗体采用血凝抑制试验测定，鸡传染性支气管炎（IB）抗体采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定，操作方法按照试剂盒说明书进行。1.4.4血清免疫球蛋白测定血清采集及保存方法同上，血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）采用免疫酶联吸附法（ELISA），操作方法按照试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2016软件进行前期整理，SPSS 19软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA）。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1复方中草药对和田黑鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，各组和田黑鸡的平均日采食量、平均日增重、料重比、存活率差异均不显著（P0.05）。但试验Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组的料重比比试验Ⅰ组分别降低了1.73%、3.70%、4.69%，比试验Ⅱ组分别降低了0.75%、2.74%、3.74%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.008.T002表2复方中草药对和田黑鸡生长性能的影响组别平均日采食量/[g/(只·d)]平均日增重/[g/(只·d)]料重比存活率/%试验Ⅰ组93.32±6.9923.24±3.034.05±0.4096.00±5.48试验Ⅱ组90.95±5.5823.34±2.294.01±0.4498.00±4.72试验Ⅲ组91.41±7.7223.33±3.083.98±0.2498.00±4.72试验Ⅳ组88.47±4.9921.91±1.563.90±0.36100.00±0.00试验Ⅴ组92.28±8.2624.37±1.413.86±0.1298.00±4.72注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2复方中草药对和田黑鸡免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，与试验Ⅰ组相比，试验Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组和田黑鸡的脾脏指数均显著升高（P0.05），分别提高了20.69%、23.45%、20.69%；试验Ⅳ组、Ⅴ组的胸腺指数均显著升高（P0.05），分别提高了34.91%、35.52%；试验Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组的法氏囊指数均显著升高（P0.05），分别提高了35.16%、32.81%、35.16%、37.50%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.008.T003表3复方中草药对和田黑鸡免疫器官指数的影响组别脾脏胸腺法氏囊试验Ⅰ组1.45±0.19b4.87±1.60b1.28±0.34b试验Ⅱ组1.67±0.33ab6.22±1.80ab1.73±0.42a试验Ⅲ组1.75±0.23a6.21±1.08ab1.70±0.41a试验Ⅳ组1.79±0.17a6.60±1.53a1.73±0.48a试验Ⅴ组1.75±0.27a6.57±1.60a1.76±0.45ag/kg2.3复方中草药对和田黑鸡抗体水平的影响（见表4）由表4可知，与试验Ⅰ组相比，试验Ⅳ组和田黑鸡新城疫ND抗体滴度极显著升高，提高19.62%（P0.01），试验Ⅲ、Ⅴ组显著升高，分别提高15.60%、18.68%（P0.05）。与试验Ⅰ组相比，试验Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组传染性支气管炎IB抗体滴度显著升高，分别提高11.73%、12.52%、11.45%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.008.T004表4复方中草药对和田黑鸡抗体水平的影响组别新城疫ND抗体滴度/log2传染性支气管炎IB抗体滴度/log10试验Ⅰ组7.44±1.81Bb146.51±13.56b试验Ⅱ组8.50±1.35ab152.79±13.54ab试验Ⅲ组8.60±0.52a163.70±14.62a试验Ⅳ组8.90±0.74Aa164.85±11.87a试验Ⅴ组8.83±0.75a163.29±12.44a2.4复方中草药对和田黑鸡血清球蛋白的影响（见表5）由表5可知，试验Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组和田黑鸡血清免疫球蛋白IgA含量极显著高于试验Ⅰ组、Ⅱ组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.008.T005表5复方中草药对和田黑鸡血清免疫球蛋白的影响组别IgAIgGIgM试验Ⅰ组142.36±23.52B1 002.24±290.37Dd342.41±78.83Dd试验Ⅱ组165.94±32.92B1 270.02±266.38BCbc419.19±74.27CDc试验Ⅲ组199.92±26.78A1 335.59±308.88ABb466.81±49.98BCbc试验Ⅳ组219.81±26.39A1 469.81±272.16Aab510.10±49.86ABb试验Ⅴ组221.53±22.04A1 592.53±224.74Aa582.08±68.22Aamg/L试验Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组中和田黑鸡血液血清免疫球蛋白IgG含量均极显著高于试验Ⅰ组（P0.01），分别提高了33.26%、46.65%、58.90%。试验Ⅴ组显著高于试验Ⅱ组、Ⅲ组（P0.05），分别提高了25.39%、19.24%；但与试验Ⅳ组差异不显著（P0.05），仅提高了8.35%；试验Ⅳ组与试验Ⅱ组、Ⅲ组差异均不显著（P0.05），分别提高了15.73%、10.05%。试验Ⅲ组比试验Ⅱ组提高了5.16%，差异不显著（P0.05）。试验Ⅴ组和田黑鸡血清免疫球蛋白IgM含量极显著高于试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组（P0.01），分别提高了70.00%、38.86%、24.69%；显著高于试验Ⅳ组（P0.05），提高了14.11%；试验Ⅳ组极显著高于试验Ⅰ、Ⅱ组（P0.01），分别提高了48.97%、21.69%，但与试验Ⅲ组差异不显著（P0.05），仅提高了9.27%。试验Ⅲ组极显著高于试验Ⅰ组（P0.01），提高了36.33%，与试验Ⅱ组差异不显著（P0.05），但提高了11.36%。3讨论3.1复方中草药对和田黑鸡生长性能的影响生长性能指标可衡量养殖生产的经济收益。中草药自身含有多种营养物质（如蛋白质、矿物质、微量元素等）和生物活性成分（如生物碱、甙类、挥发油、多糖等），可促进机体消化吸收、提高饲料利用率、降低养殖成本[11-12]。于佳楠等[13]研究发现，复方中草药可提高芦花鸡平均日增重，改善饲料利用率。苏记良等[14]研究发现，复方中草药可提高黄羽肉鸡的平均日增重，降低料重比，促进消化吸收、物质转化。王趁芳等[15]研究发现，添加0.5%中药复方制剂能够显著增加1~42日龄AA肉鸡的平均日增重，降低料重比和死淘率。Nguyen等[16]研究发现，纳米复方中草药可显著提高越南肉鸡的生长性能，提高饲料的利用率。本试验研究发现，各试验组和田黑鸡的平均日采食量、平均日增重、料重比、存活率差异不显著，与上述研究结果的显著作用不同。原因可能与复方中草药的配方组成、比例、饲喂时长等有关，具体原因还有待进一步研究。3.2复方中草药对和田黑鸡免疫器官指数的影响家禽免疫器官主要为脾脏、法氏囊、胸腺等。其中胸腺是家禽非常重要的淋巴器官，主要参与机体的细胞免疫；法氏囊是禽类独有的中枢免疫器官，参与机体的体液免疫；脾脏是禽类的外周免疫器官，是机体体液免疫和细胞免疫反应的免疫应答场所；三者的生长发育状况直接影响动物机体的免疫功能和健康状态[17-19]。免疫器官的正常发育是机体各项免疫功能发挥的基础，器官的重量和指数通常可衡量其发育状况和健康程度以及免疫机能情况[20]。研究表明，添加中草药可促进免疫器官发育，提高免疫器官的指数，调节免疫反应，增强机体免疫力[21]。李金凤等[22]研究发现，复方中草药（黄芪、党参、甘草、淫羊藿）可促进脾脏发育，提高脾脏指数。李姣清等[23]研究发现，添加不同剂量的复方中草药可显著提高脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数。王洪贺等[24]研究发现，复方中草药添加剂对黑羽乌鸡免疫器官指数具有促进作用。本试验表明，和田黑鸡的日粮中添加不同剂量的复方中草药可提高法氏囊指数、脾脏指数、胸腺指数。3.3复方中草药对和田黑鸡抗体水平的影响疫苗免疫是预防动物疾病、保障机体健康的重要手段，畜禽在接种疫苗后可刺激机体产生特异性免疫，提高自身的抗体水平，提高免疫力。新城疫和鸡传染性支气管炎病是家禽生产中常见的呼吸道疾病，病死率高、传播快，严重危害禽类健康。目前，免疫疫苗是防控该病的有效手段，通过接种新城疫疫苗、鸡传染性支气管炎疫苗可以促鸡产生抗体，提高对新城疫与鸡传染性支气管炎病的抵抗力，疫苗免疫后抗体水平可直接反映机体免疫水平[25-26]。由佳等[27]研究发现，中草药饲喂肉鸡可以显著地提高新城疫抗体水平和免疫器官指数。周凌博等[28]研究发现，复方中草药制剂可显著提高土鸡的免疫功能和新城疫疫苗免疫效果。王申丰[29]研究发现，中草药免疫增强剂可显著提高鸡新城疫、鸡传染性支气管炎的抗体水平。郭兵[30]研究发现，中草药对鸡新城疫-传染性支气管炎二联苗的免疫增强作用。任艳[31]研究发现复方中草药可提高鸡传染新支气管炎HI抗体效价。本试验结果表明，在和田黑鸡日粮中添加复方中草药可以提高新城疫和鸡传染新支气管炎抗体水平，增强免疫效果。3.4复方中草药对和田黑鸡血清免疫球蛋白的影响血清免疫球蛋白是在抗原刺激下机体所产生的能与抗原发生特异性结合的具有抗体活性的球蛋白，主要包括IgA、IgG、IgM等，可参与机体抗病毒、抗菌、抗外毒素、溶菌等免疫防御[32-33]。IgA具有抗菌、抗病毒的作用，参与机体的局部黏膜免疫。IgG是机体自然感染或人工主动免疫后，机体主动免疫产生的抗体，可在体液免疫中有效地保护机体不受感染，具有抗菌、抗病毒、抗毒素等免疫学活性。IgM可以与补体结合，能够溶解病原体，保护机体不受入侵。IgA、IgG、IgM通常可检测血清免疫球蛋白的水平，反映机体免疫力。任荣清等[34]研究发现，中草药免疫增强剂可以极显著提高罗曼蛋鸡血清免球蛋白IgA、IgG、IgM含量。顾艳丽等[35]研究发现，复方中草药可以显著提升AA肉鸡的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM含量。贾玉刚等[36]研究发现，中草药可以显著提高藏鸡血清中IgG、IgM含量。本试验结果表明，在和田黑鸡日粮中添加复方中草药可以极显著地提高血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM含量，增强和田黑鸡的免疫力。4结论在和田黑鸡基础日粮中添加0.1%、0.5%、1.0%的复方中草药可提高和田黑鸡的胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数，提高血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG含量，提升新城疫ND抗体水平和鸡传染性支气管炎抗体水平，且以添加0.5%复方中草药效果最适宜。