抗生素因具有抗菌谱广、生产成本低等特点,能够预防疾病和促进动物生长[1],但大量使用抗生素,生物体耐药性越来越严重。因此,寻找抗生素的替代品是目前畜牧养殖的关键。噬菌体是一种细菌病毒体,具有严格的宿主特异性[2],噬菌体因其特异性和高效性可以作为抗生素替代品在畜牧养殖中应用。沙门氏菌、大肠杆菌和魏氏梭菌是肉兔肠道最常见的致病菌。本文通过给肉兔饲喂噬菌体、益生菌及抗菌肽等产品,测定肉兔的生长性能、盲肠菌群及屠宰性能等指标,旨在为抗生素的替代方案提供参考。1材料与方法1.1试验材料噬菌体购自青岛诺安百特生物技术有限公司,有效成分为沙门氏菌噬菌体+兔大肠杆菌+兔魏氏梭菌,简称NAYK,产品噬菌体总效价为1×109 PFU/g(建议添加量为300~500 g/T);益生菌产品有效成分为枯草芽孢杆菌+植物乳杆菌+丁酸梭菌,简称BL,产品总有益活菌数为5×109 CFU/g(产品建议添加量为300~500 g/T);抗菌肽有效成分为抗革兰氏阴性菌抗菌肽,简称AMP(产品建议添加量为300~500 g/T);试验动物为新西兰肉兔。1.2试验设计试验在四川畜科院眉山养殖基地进行,试验时间为2021年7月至2021年8月。试验期35 d。试验选取体重相近、30日龄断奶、健康的新西兰肉兔350只,随机分为7组,每组5个重复,每个重复10只。对照组肉兔饲喂基础日粮,参考美国NRC(1977)兔营养需要量及当地饲料原料资源设计。试验1组、2组、3组、4组、5组和6组分别添加NAYK(1 000 g/T)、BL(1 000 g/T)、AMP(1 000 g/T)、NAYK(500 g/T)+BL(500 g/T)、NAYK(500 g/T)+AMP(500 g/T)、AMP(500 g/T)+BL(500 g/T)。试验前对兔舍及设施进行消毒处理。试验兔自由采食和饮水,疫苗免疫按正常程序进行。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.027.T001表1基础日粮组成及营养水平(风干基础)原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米26.50消化能/(MJ/kg)10.56豆粕10.50粗蛋白/%16.39麦麸21.50粗纤维/%12.65菜粕3.50总磷/%0.61苜蓿草粉30.00总钙/%0.93玉米胚芽粕5.00磷酸氢钙0.50石粉0.85食盐0.50赖氨酸0.15预混料1.00注:1.预混料为每千克日粮提供:铁70 mg、铜20 mg、锌80 mg、锰60 mg、镁150 mg、VA 4 000 IU、VD3 1 000 IU、VE 50 mg、胆碱1 mg。2.营养水平中消化能为计算值,其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验开始和结束当日早晨,肉兔空腹称重,记录饲料总消耗量、初重、末重,计算平均日增重、平均采食量和料重比、统计腹泻率和死淘率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=(总投料量-总剩料量)/(兔试验数×试验天数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2肠道菌群试验结束,每组随机选10只、平均体重接近、健康的肉兔进行屠宰,采集盲肠食糜,无菌环境下采集1 g盲肠内容物,置于9 mL生理盐水中振荡15 min,逐渐10倍稀释,离心取上清依次102~106倍稀释。采用平板计数法测定盲肠内容物中的乳酸杆菌(MRS培养基)、大肠杆菌(EMB培养基)和沙门氏菌(SS培养基)的数量。1.3.3屠宰性能每组选取10只肉兔,测定全净膛重、半净膛重,计算肉兔全净膛率和半净膛率。肉兔的心、肝、脾、肾称重,计算肉兔脏器指数。全净膛重:屠宰去除皮毛、血液、内脏、头、尾、四肢后的酮体重。半净膛重:屠宰去除皮毛、血液、头、尾、四肢,保留心肝肾后的酮体重。心脏指数=心脏重/屠宰前活重×100%(4)肝脏指数=肝脏重/屠宰前活重×100%(5)肾脏指数=肾脏重/屠宰前活重×100%(6)脾脏指数=脾脏重/屠宰前活重×100%(7)1.4数据统计与分析数据采用Excel 2013初步整理,SPSS 17.0软件统计分析,Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示,P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同添加剂对肉兔生长性能和腹泻率的影响(见表2)由表2可知,与对照组相比,试验组肉兔的平均日增重均有提高,试验4组、5组肉兔的平均日增重分别显著提高了12.09%和13.67%(P0.05);试验组肉兔的平均日采食量均有提高,试验4组、5组肉兔的平均日采食量分别显著提高了7.90%、8.71%(P0.05);试验1组、2组、3组、4组、5组和6组肉兔的料重比分别比对照组显著降低3.11%、2.17%、2.17%、3.73%、4.35%和2.80%(P0.05)。试验1组、2组、3组、4组、5组和6组肉兔的腹泻率分别比对照组显著降低60.47%、56.20%、59.16%、62.05%、65.66%和60.80%(P0.05);试验1组、2组、3组、4组、5组和6组肉兔的死淘率显著低于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.027.T002表2不同添加剂对肉兔生长性能和腹泻率的影响组别初重/g末重/g平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比腹泻率/%死淘率/%对照组685.13±65.121 770.83±89.31c31.02±1.25b99.89±5.43b3.22±0.11a15.23±1.77a7.76±0.22a试验1组690.56±37.331 875.66±95.27ab33.86±1.31ab105.65±4.11ab3.12±0.08b6.02±0.78b3.25±0.19b试验2组688.50±47.451 836.51±90.53b32.80±2.08ab103.32±2.27ab3.15±0.05b6.67±0.69b4.11±0.16b试验3组673.13±55.511 827.78±75.17b32.99±0.97ab103.93±3.65ab3.15±0.07b6.22±0.97b3.77±0.23b试验4组686.37±51.871 903.32±86.91a34.77±1.23a107.78±5.56a3.10±0.10b5.78±0.65b3.17±0.21b试验5组677.65±39.251 911.75±83.59a35.26±1.52a108.59±4.77a3.08±0.08b5.23±0.53b2.78±0.25b试验6组679.17±57.781 854.47±77.28ab33.58±1.66ab105.12±3.28ab3.13±0.09b5.97±0.55b3.21±0.29b注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P0.05),相同字母或无字母表示差异不显著(P0.05);下表同。2.2不同添加剂对肉兔肠道菌群的影响(见表3)由表3可知,与对照组相比,试验组肉兔肠道的乳酸杆菌数量均显著提高(P0.05);试验1组、2组、4组、5组和6组肉兔肠的乳酸杆菌均显著高于试验3组(P0.05)。试验组肉兔肠道的大肠杆菌数量均显著低于对照组(P0.05);试验1组、5组肉兔的大肠杆菌数量均显著低于试验2组、3组和6组显著降低(P0.05)。试验组肉兔肠道的沙门氏菌数量均显著低于对照组(P0.05);试验4组、5组肉兔的大肠杆菌数量均显著低于试验2组、3组和6组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.027.T003表3不同添加剂对肉兔肠道菌群的影响组别乳酸杆菌大肠杆菌沙门氏菌对照组6.56±0.35c7.21±0.39a5.13±0.29a试验1组7.58±0.27a6.25±0.55c4.09±0.19bc试验2组7.52±0.33a6.85±0.21b4.57±0.23b试验3组7.01±0.51b6.67±0.38b4.37±0.45b试验4组8.19±0.58a6.39±0.30bc3.75±0.27c试验5组8.06±0.25a6.16±0.23c3.66±0.22c试验6组7.76±0.47a6.78±0.57b4.17±0.58blgCFU/g2.3不同添加剂对肉兔屠宰性能的影响(见表4)由表5可知,与对照组相比,试验组肉兔的全净膛率和半净膛率均有提高,试验1组、4组和5组肉兔的全净膛率均显著提高(P0.05)。试验组肉兔的心脏指数和肝脏指数与对照组相比差异均不显著(P0.05);试验4组、5组肾脏指数显著低于对照组(P0.05);试验1组、5组肉兔的脾脏指数显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.04.027.T004表4不同添加剂对肉兔屠宰性能的影响组别全净膛率半净膛率心脏指数肝脏指数肾脏指数脾脏指数对照组41.26±0.53b47.65±5.08b0.409±0.0613.52±0.220.753±0.031a0.078±0.018b试验1组46.55±0.33a51.33±4.45a0.425±0.0833.60±0.350.737±0.022a0.095±0.013a试验2组42.76±0.29b48.35±3.78b0.409±0.0783.63±0.190.740±0.025a0.076±0.009b试验3组43.19±0.45b49.26±3.97b0.417±0.0533.57±0.170.728±0.033a0.077±0.012b试验4组47.76±0.68a52.25±5.69a0.429±0.0253.61±0.280.669±0.031b0.081±0.025b试验5组48.37±0.37a52.33±3.76a0.437±0.0393.59±0.120.675±0.038b0.097±0.021a试验6组44.62±0.59ab50.05±4.73b0.416±0.0473.56±0.170.708±0.019a0.079±0.008b%3讨论3.1不同添加剂对肉兔生长性能的影响噬菌体、益生菌和抗菌肽均能够改善肉兔的肠道健康,提高肉兔的生长性能[3-7],随肠道健康的改善,腹泻率、死淘率会降低[8-10]。本试验结果表明,肉兔基础日粮中添加单一的噬菌体、益生菌和抗菌肽或是复合搭配,均能够显著降低肉兔的料重比、腹泻率和死淘率,且试验5组(500 g/T噬菌体+500 g/T抗菌肽)的复配效果较好。3.2不同添加剂对肉兔肠道菌群的影响肠道是动物重要的消化吸收场所及免疫器官,健康机体的肠道微生物菌群处在一个动态平衡的状态,有害菌过量繁殖会引起动物发生疾病。一般乳酸杆菌多为有益菌群,沙门氏菌、大肠杆菌多为致病菌或条件致病菌,多黏附于肠道后段,尤其是盲肠和直肠内[11]。本试验所用噬菌体、益生菌和抗菌肽及两者复合组合均能够显著降低肉兔盲肠中大肠杆菌和沙门氏菌数量,提高乳酸杆菌的数量,与张灿等[3]、卢国民等[4]和孙焕林等[12]在鸡的研究结果相似,Adami等[13]和周映华等[14]在猪上也得出类似的结果。单一产品和复合产品相比,试验5组(500 g/T噬菌体+500 g/T抗菌肽)无论是在提高乳酸菌数量,还是在降低大肠杆菌和沙门氏菌数量方面均表现最好。3.3不同添加剂对肉兔屠宰性能的影响屠宰性能指标反映营养物质在机体不同部位的沉积和分布情况。全净膛率和半净膛率是衡量畜禽屠宰性能的重要指标[15]。脏器指数是反映器官相对生长的指标[16]。心脏指数的升高,有助于血液循环和营养物质的新陈代谢;肾脏指数升高,增加肾肿概率;脾脏指数提高,机体免疫功能增强。本试验中,试验组肉兔的全净膛率和半净膛率均得到提高,说明噬菌体、益生菌和抗菌肽对提高肉兔的屠宰性能和养殖效益有积极作用,与王延卓等[17]研究结果相似,也与孙波等[18]、郭王勇等[19]、刁蓝宇等[20]在肉鸡上的研究相似。4结论肉兔基础日粮中添加噬菌体、益生菌和抗菌肽均能够提高肉兔平均日增重,降低料重比、腹泻率和死淘率。噬菌体、益生菌和抗菌肽两两复合使用,均够达到较好的效果,且试验5组(500 g/T噬菌体+500 g/T抗菌肽)能够明显改善肉兔各项性能指标。
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