饲料资源短缺成为限制畜牧业发展的主要因素[1]。青贮是以新鲜青饲料为原料，压实封闭，使贮存的青饲料与外部空气隔绝，可为发酵创造缺氧环境，利用植物表面天然存在的乳酸菌分解植物体内可溶性碳水化合物产生有机酸，使pH值快速下降，抑制有害微生物的生长繁殖。青贮能够较长时间保存饲料，是一种能够减少营养物质损失，促进动物消化吸收的饲料加工方法[2]，可有效解决春、冬饲料均衡供应问题。青贮饲料能够刺激家畜消化液的分泌和肠胃蠕动[3]，增强家畜的消化功能，更好地利用粗饲料中的营养物质，提高饲料质量[4]。自然发酵中，饲草表面附着的乳酸菌能够影响青贮效果和发酵品质[5]。青贮乳酸菌的开发利用能够提高饲料利用效率[6]。青贮乳酸菌添加剂可以影响饲料发酵品质和有氧稳定性，提高动物生产性能[7]。文章对不同来源乳酸菌在青贮饲料中的应用进行综述，为青贮饲料中添加优良乳酸菌的开发利用提供参考。1乳酸菌作用机理乳酸菌的作用机制是指在密封空间内利用碳水化合物快速繁殖产生乳酸，快速降低pH值，形成酸性无氧环境，抑制有害菌繁殖，减少青贮营养物质损失，使饲料可以长期保存[8]。常用的乳酸菌剂包括乳杆菌属、明珠球菌属、肠球菌属、片球菌属等。乳杆菌属是青贮饲料微生物添加剂的有益菌群，多为同型乳酸菌，脑阔植物乳杆菌、布什乳杆菌、短小乳杆菌、类谷糠乳杆菌等[9]。发酵初期，同型乳酸菌能够提高乳酸产量，迅速降低pH值[10]，抑制丁酸等有害物质产生，利于提高青贮发酵品质。但同型乳酸菌发酵产生的挥发性脂肪酸含量较低，无法有效抑制酵母和霉菌生长，导致青贮饲料出现一定程度腐败[11-14]。明串珠菌属具有发酵潜力的异型乳酸菌菌群[15]，包括柠檬明串珠菌、肠膜明串珠菌等。异型乳酸菌在发酵过程中不仅产生乙酸，还可产生乙醇等。乙酸对提高青贮饲料的有氧稳定性、防止有氧变质起重要作用[16]。乙醇具有杀菌作用，可抑制有害细菌繁殖[10]。异型乳酸菌消耗底物能量较多，但发酵产生大量的乙酸（乙醇）可抑制有害细菌真菌的繁殖，提高青贮饲料的有氧稳定性，防止开窖后二次发酵，弥补发酵过程中造成的营养损失[11,17-19]。肠球菌属因其能够产生抑制致病菌和有害菌的细菌素广泛在食品工业中应用，具有成为饲料添加剂的潜力[20]，优势菌种为粪肠球菌、耐久肠球菌、屎肠球菌、蒙氏肠球菌等。研究发现，青贮中添加肠杆菌可有效降低病原的存活率，提高青贮发酵品质，降低营养成分的损失[21-22]。但肠球菌属不同菌株差异较大，实践应用中应进一步研究[9]，粪肠球菌、蒙氏肠球菌、耐久肠球菌可作为青贮微生物发酵菌株，屎肠球菌的应用潜力有待发掘[21]。片球菌属是兼性异型厌氧菌，具有产酸能力，分布于植物和动物体中，包括戊糖片球菌、乳酸片球菌等。张红梅[23]、江迪等[24]和隋鸿园[25]研究发现，添加戊糖片球菌作为青贮微生物制剂能够提高青贮有氧稳定性，显著提高乳酸菌含量，有效降低有害菌存活率，提高青贮品质。2青贮乳酸菌制剂的不同来源2.1青贮饲料中筛选乳酸菌青贮饲料是筛选乳酸菌的主要来源。不同地域、饲草种类、茬次、刈割时期、储藏温度等条件对青贮饲料均可产生影响。因此，需要根据不同的青贮原料和环境条件，筛选合适的乳酸菌添加剂[26]。赵蕊蕊等[26]从自然发酵的谷草中分离筛选得到1株枯草芽孢杆菌，最适生长温度10 ℃，此菌株乳酸产量高、耐酸性强，谷草发酵过程中能够快速降低pH值，抑制有害微生物生长，对霉菌有显著抑制作用。顾娴等[27]从北方47个青贮玉米样品中分离筛选出若干菌株，检验其防霉发酵的能力，为青贮玉米发酵菌剂提供研究思路。尹雪等[28]从盐穗木青贮发酵液中分离出9株产酸能力较强的乳酸菌，成为青贮添加剂的备用菌株。Ellis等[29]从青贮饲料中分离出的戊糖乳杆菌和植物乳杆菌，可成为反刍动物有利的微生物添加剂，应用于青贮饲料的制作中。关皓等[30]为提高湿热地区青贮饲料品质，从西南高温高湿地区青贮饲料中筛选得到4株耐高温、产酸能力强的优质乳酸菌，结果表明，4株乳酸菌能够显著提高青贮饲料发酵品质。Silva等[31]从热带青贮玉米中分离得到151株乳酸菌，筛选出8株布氏乳杆菌，研究布氏乳杆菌对玉米和甘蔗青贮发酵和有氧稳定性的影响。Xu等[32]采用板载筛选法从青贮玉米秸秆中分离得到4株具有阿魏酸酯酶活性的乳酸菌，结果表明，4种乳酸菌均可水解酪蛋白，释放羟基肉桂酸，对羟肉桂酯的降解效果较好。Zhang等[33]从青贮羊草中分离出100多株乳酸菌，筛选出4株耐酸耐低温的乳酸菌，结果发现，可快速降低羊草青贮pH值。Kim等[34]从发酵黑麦草饲料中分离出180株乳酸菌，筛选出具有较强酸化能力和抗真菌活性的2株乳酸菌。Sifeeldein等[35]从青贮象草中筛选了3株乳酸菌，结果发现，乳酸菌可显著降低丙酸、丁酸的含量，抑制梭菌等微生物生长和蛋白质的水解活性。添加有益乳酸菌菌株能够减弱真菌毒素对青贮饲料的污染，提高纤维、蛋白的溶解活性，改善饲草青贮品质。因此，从青贮饲料中筛选乳酸菌简单、易操作、来源广泛，筛选出的乳酸菌特异性强、生长速度快、产酸能力强，在国内外的研究应用较为广泛。2.2植物叶表面筛选乳酸菌自然界中的植物叶表面或植物枝干上附着天然乳酸菌，经过筛选能够成为青贮发酵菌剂的潜力菌株。陈堞等[36]从抗盐植物大米草中筛选出4株耐盐乳酸菌，结果发现，耐盐乳酸菌能够提高大米草的青贮品质。陈开琼等[37]在枸杞叶上筛选出3株生长快、产酸能力强的乳酸菌以青贮枸杞徒长枝，并设商用菌剂为对照，结果表明，自选乳酸菌能够显著提高枸杞徒长枝青贮饲料的营养品质。王媛等[38]从新鲜刈割的苜蓿中筛选出6株对大肠杆菌、沙门氏菌及李斯特菌均具有良好抑菌活性的乳酸菌，可应用于苜蓿青贮；结果表明，青贮过程能够有效降低青贮pH值，抑制腐败微生物生长，改善苜蓿青贮发酵品质。为探索乳酸菌对柱花草青贮发酵品质的影响，翟海瑞[39]从海南热带地区柱花草中分离出4株乳酸菌并进行16S rDNA鉴定，结果发现，筛选出类植物乳杆菌HN113产酸能力最强、生长速率快，适合作为柱花草青贮饲料微生物发酵剂。Saarisalo等[40]在含有天然微生物区系的草基质中筛选出乳酸菌菌株并对羊茅进行青贮发酵，结果表明，筛选出的菌株能够快速降低青贮pH值。从饲草原料表面筛选乳酸菌具有很强的特异性，对专一饲草的发酵品质促进效果明显。新鲜植物组织附着乳酸菌数量极少，需在实验室条件下进行纯化培养，通过后期青贮发酵试验判断其发酵特性。从植物叶表面筛选的材料来源更广泛，试验周期短，易筛选出具有特异性的功能乳酸菌。2.3动物消化道筛选乳酸菌动物胃肠道中存在微生物菌群，乳酸菌作为动物胃肠道中的优势菌群可以用作饲料添加剂[41]。瘤胃是反刍动物的第一胃，是纤维降解能力最强的天然发酵罐[42]。瘤胃微生物包括细菌、产甲烷菌、真菌、原生动物和少数噬菌体。优势菌群包括纤维降解菌、淀粉降解菌、半纤维降解菌、蛋白降解菌、脂肪降解菌、酸利用菌、乳酸菌等。瘤胃具有大量细菌微生物且降解纤维能力较强，故从瘤胃中分离筛选乳酸菌较为简便且具有较好的分解纤维能力。Kuppusamy等[43]从瘤胃液中分离出39株乳酸菌，筛选出2株生长速度快、产酸能力强、能够在低糖环境中快速生长的乳酸菌，结果发现，筛选出的乳酸菌可改善苜蓿青贮品质。Guo等[44]从奶牛瘤胃液和粪便中分离筛选出4株乳杆菌并用于紫花苜蓿青贮，结果表明，筛选出的乳杆菌对pH值、温度和盐具有广泛耐受性，F1菌株对酸度和盐浓度具有较好适应性，能够作为青贮饲料的添加剂。杨龙龙等[45]从牛瘤胃中分离筛选出3株乳酸菌，均具有较强的耐酸性以及一定程度的耐药性和抑菌性。因此，从动物瘤胃液和粪便中分离出的乳酸菌能够提高青贮饲料的发酵品质。原因是瘤胃特殊生态微环境，从中筛选分离出的乳酸菌多具有益菌性和耐受性，为青贮乳酸菌添加剂的开发和应用提供新的途径。2.4其他来源日常生活中常见的发酵食物中也存有乳酸菌，如泡菜、酸奶、酒酿、豆酱、臭豆腐等。但此类乳酸菌应用前，需要进行动物饲喂试验，避免对家畜产生不利影响。胡雪姣[46]从泡菜水中分离筛选出2株优良菌株，结果发现，筛选出的菌株生长速率快、产酸快，可缩短青贮发酵时间，提高青贮品质，具有开发应用的潜力。彭章普等[47]从市售泡菜中分离筛选出5株产酸性能较好的乳酸菌，应用于废弃白菜叶、青笋叶青贮；结果表明，此菌株产酸性能强、发酵品质好，可成为青贮发酵添加剂。赵娜等[48]从发酵豆酱中筛选出2株耐受性强、抑菌性强、降解胆固醇、产蛋白酶的功能性乳酸菌。宿利亚[49]从马奶酒中分离筛选出4株有益生菌潜能的乳酸菌，结果表明，4株菌株对不同原料青贮的发酵品质和有氧稳定性均具有不同程度的影响。Yang等[50]从发酵韭菜泡菜中筛选出魏斯氏菌LK4作为潜在发酵乳酸菌，结果发现，发酵乳酸菌的产酸能力强，可快速进入发酵状态，对自由基清除有显著效果。Srikanjana等[51]从泰国发酵茶中筛选出22株乳杆菌，具有抗菌和清除自由基作用。Jeun等[52]在泡菜中筛选出1株特异性植物乳杆菌，结果发现，筛选出的植物乳杆菌能够降低低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三酯的含量。发酵食物中筛选得到的乳酸菌具有特定的功能性，青贮饲料发酵可具有目的性地改善青贮品质，为特异功能性乳酸菌的筛选与应用提供参考。3乳酸菌发酵饲料在动物中的应用乳酸菌制剂是一类安全高效的可直接应用于动物饲喂的饲料添加剂[53]。乳酸菌具有调节动物肠道微生态环境、抑制有害菌繁殖、降低消化道pH值等优点。饲喂添加乳酸菌的青贮饲料可提高饲料的消化利用率，提高家畜的生长性能，改善肠道菌群组成，提高机体免疫力。乳酸菌制剂饲料对不同动物种类其适应性也不同[54]。本文以添加乳酸菌青贮饲料在反刍动物（羊和牛）中的应用为例进行综述。3.1乳酸菌发酵饲料在羊生产中的应用乳酸菌直接作为微生物饲料添加剂，通过提高青贮饲料品质，可以提高动物机体对饲料的利用率，促进动物生长，防治疾病和提高生产性能等[55]。唐梦琪[56]采用乳酸菌发酵花生秧饲喂肉羊，结果表明，饲喂发酵饲料可以显著降低肉羊血清中甘油三酯和尿素氮的含量，提高机体脂肪、蛋白质的利用率。王小平等[57]研究发现，以青贮饲料中筛选出的乳酸菌发酵玉米饲喂滩羊能够显著提高滩羊的平均日采食量，提高粗蛋白、粗脂肪等表观消化率和生长性能。Rodriguez等[58]在热带环境下添加乳酸菌发酵玉米饲喂公羊，研究表明，添加乳酸菌可促进热带玉米发酵，提高公羊CP消化率，NDF摄入量。Yanyi等[59]在全日混合日粮中添加乳酸菌发酵液，研究发现，饲喂母羊发酵日粮可以提高CP消化率，降低瘤胃NH3-N含量。Bureenok等[60]采用乳酸菌发酵液发酵饲料饲喂山羊，结果表明，饲喂发酵日粮可显著提高CP、NDF、ADF消化率，大大提高动物产量。顾拥建等[61]添加乳酸菌发酵稻秸秆饲喂山羊，结果发现，乳酸菌发酵稻秸秆能够提高饲料利用率，降低总胆固醇含量，提高山羊生产性能。黄志鹏[62]研究表明，添加植物乳杆菌和布氏乳杆菌发酵全株玉米饲喂羔羊可以提高羔羊的采食量，调节羔羊肠道菌群维持瘤胃菌群稳态。3.2乳酸菌发酵饲料在牛生产中的应用Ellis等[63]采用乳酸菌的青贮发酵饲料饲喂奶牛，结果表明，奶牛产奶量显著增加，代谢体重提高。梁敏[64]在安格斯牛基础日粮中添加益生菌剂发酵的棉粕，结果表明，添加发酵棉粕能够显著提升肉牛平均日增重和胸围，提高表观消化率，提高安格斯肉牛的免疫能力。陈光吉等[65]接种乳酸菌发酵玉米黄浆液、木薯等食品工业副产物，配合精料饲喂肉牛，结果表明，瘤胃有益微生物的数量显著增加。赵雅丽等[66]添加植物乳杆菌发酵甘蔗尾叶饲喂水牛，结果发现，饲喂杂交水牛能够显著提高水牛平均日增重，降低料重比，对瘤胃环境和血清生化指标无有害影响。陈跃鹏等[67]添加乳酸菌发酵全株玉米饲喂肉牛，结果发现，肉牛的平均日增重和生长性能显著提高，料重比显著降低，从而改善经济效益。黄峰[68]研究表明，在甘蔗尾叶中添加乳酸片球菌和植物乳杆菌等发酵饲喂肉牛能够增加瘤胃细菌丰富度，提高肉牛生长性能。王璐等[69]在青贮饲料中添加乳酸菌发酵饲喂奶牛，结果表明，饲喂发酵饲料能够显著提高奶牛的采食量、泌乳量、牛乳品质及机体免疫功能。高雪峰[70]研究发现，乳酸菌青贮饲料饲喂奶牛，能够增加肠道菌群数量，提高奶牛的生产性能。因此，饲喂乳酸菌发酵饲料能够显著提高反刍动物的生长性能，增加肠道有益微生物数量，提高饲料利用率，降低养殖成本。4结论有研究从青贮饲料、动物消化道、植物叶表面等分离筛选出优良青贮乳酸菌，且在实际应用中取得很好的效果。乳酸菌来源较少，且青贮过程中干物质及能量损失、微生物群落组成动态变化以及代谢产物的转化机理研究尚不深入。今后可加强宏基因组、代谢组等微观新技术的应用，为筛选研发出低损耗、高效益、高安全的青贮乳酸菌制剂打下坚实基础，青贮乳酸菌的筛选与应用对畜牧业的发展具有重要意义。