养殖中大量使用饲用抗生素，导致细菌耐药性增强、环境污染、药物残留等弊端愈发明显。酸化剂作为一种绿色、无污染的功能性饲料添加剂在畜禽生长性能、免疫功能及肠道健康等方面发挥重要作用[1-2]。复合酸化剂是由甲酸、甲酸铵、乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸等几种特定酸复合而成，肉鸡采食后能够降低肉鸡肠道pH值，抑制肠道中大肠杆菌、沙门氏菌等病原微生物繁殖，改善胃肠道结构与菌落生态，增强机体免疫和抗应激能力[3]，提高胃肠道消化酶活性，促进维生素与矿物元素的吸收与利用，参与体内物质代谢并提高营养物质的利用率。在白羽肉鸡日粮中添加复合酸化剂可以提高肉鸡生长性能和日粮养分消化率，降低盲肠大肠杆菌数量，降低鸡舍氨气和硫化氢浓度[4]。饲喂混合型酸化剂的肉鸡，肉鸡盲肠食糜中的微生物菌群结构发生明显变化，其中有益微生物如瘤胃球菌属、琥珀酸单胞菌属获得生长优势[5]。中高剂量的酸化剂能够显著提高白羽肉鸡十二指肠绒毛高度、隐窝深度，增加消化面积，提高消化吸收效率[6]。目前的研究多集中于在日粮中添加，对饮水型酸化剂实际生产中的综合性研究较少。本试验通过研究一种饮水型复合酸化剂对肉鸡生长性能、消化酶活性、免疫功能、肠道形态及肉质的影响，探讨其在肉鸡生产中的应用方案和效果，为酸化剂合理使用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验酸化剂（甲酸型复合酸化剂，含甲酸、甲酸铵、乙酸、丙酸、苯甲酸、乳酸、柠檬酸），由潍坊加易加生物科技股份有限公司提供。1.2试验设计试验肉鸡苗由益生种禽场提供。选用1日龄健康、体重相近的爱拔益加肉鸡600只，随机分为4组（组间个体差异不明显），每组5个重复，每个重复30只鸡。试验组分别在饮水中添加0.05%、0.10%、0.20%的复合酸，对照组不添加复合酸。试验期为42 d。试验于山东畜牧兽医职业学院南校区试验基地进行，基础日粮参照AA商品代肉鸡营养标准配制。基础日粮组成及营养水平见表1。所有试验鸡按鸡场常规程序饲养管理。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目1~21日龄22~42日龄原料组成/%玉米63.6069.78豆粕29.4021.94玉米蛋白粉3.505.20L-赖氨酸0.100.08DL-蛋氨酸0.160.03石粉1.351.30磷酸氢钙1.301.10氯化胆碱0.120.10食盐0.300.30预混料0.170.17合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.1012.43粗蛋白/%20.9819.00钙/%0.890.80有效磷/%0.400.38蛋氨酸/%0.470.35赖氨酸/%1.050.88注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD 1 000 IU、VE 20 IU、VK 0.50 g、VB1 2.00 mg、VB2 8.00 mg、VB6 3.50 mg、VB12 10.00 μg、烟酸35.00 mg、泛酸钙10.00 mg、叶酸0.55 mg、生物素0.18 mg、铁80.00 mg、锰100.00 mg、锌80.00 mg、碘0.70 mg、硒0.30 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能于42 d对试验鸡进行空腹称重，称重前断料8 h，断水2 h，计算平均日增重、料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2肠道形态和内容物消化酶活性试验第42 d，每个重复选取1只体况良好、中等大小的肉鸡（每组5只），颈部放血，打开腹腔，取空肠中端约1 cm，4%福尔马林保存。将各肠段组织脱水，包埋，切为厚约5 μm厚的石蜡切片，HE染色，使用40倍电子显微镜、显微数字成像系统（Olympus BX53）、数字成像及图像分析软件（Cellsens Standard 1.12）测定肠绒毛高度和隐窝深度，计算二者比值（V/C）。各样品选10个典型视野后拍照，每个视野绒毛高度和隐窝深度各测10个值。取空肠内容物放入冻存管，液氮迅速冷冻，-70 ℃保存，测前使用生理盐水10倍稀释匀浆，离心，取上清液，测定淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.3.3免疫指标血液4 000 r/min离心12 min，取血清分装于1.5 mL离心管，-20 ℃保存，检测免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）。各组免疫指标采用酶联免疫吸附试验分析法（鸡专用试剂盒）测定。1.3.4肉品质试验第42 d，肉鸡屠宰后取左侧胸肌和右侧腿肌，分别测定滴水损失、肉色、蒸煮损失、剪切力，置于PE保鲜塑料袋中并封口。使用肌肉颜色测定仪测肉色。在30 min内取25 g左右肉样称重（W1）；细铁丝吊起肉样使肌纤维垂直向下，外套PE保鲜袋，确保两者不接触并留有足够空间收集渗水，悬挂于4 ℃冰箱内24 h，吸干表面水分称重（W2），计算胸肌24 h滴水损失。将腿肌沿肌纤维方向切成3 cm×1.5 cm×1 cm肉块，称重（W1），80 ℃水浴加热10 min，当中心温度达70 ℃，取出自然冷却，吸干水分，称重（W2）。使用质构仪测定肌肉剪切力。滴水损失=(W1-W2)/W1×100%(4)腿肌蒸煮损失＝(W1-W2)/W1×100%(5)1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2016软件初步分析，SPSS 20.0统计软件进行方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合酸化剂对白羽肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，日粮中添加不同水平的复合酸化剂，各试验组肉鸡的平均日增重均低于对照组，但差异不显著（P0.05）。Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡的料重比均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.T002表2复合酸化剂对白羽肉鸡生长性能的影响组别初重/g末重/kg平均日采食量/[g/(只·d)]平均日增重/[g/(只·d)]料重比对照组49.88±0.842.55±0.0994.47±1.5959.53±2.131.59±0.04aⅠ组50.02±0.552.59±0.0791.45±3.0060.48±1.651.51±0.03abⅡ组49.78±0.902.72±0.0994.65±4.1563.58±2.031.49±0.05bⅢ组49.36±0.712.64±0.0790.90±1.8261.68±1.681.48±0.02b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2复合酸化剂对白羽肉鸡肠道形态的影响（见图1、表3）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.F001图1不同处理组空肠形态对比由表3可知，与对照组相比，Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡空肠黏膜绒毛长度显著提高（P0.05），Ⅰ组、Ⅱ组隐窝深度显著升高（P0.05），Ⅲ组绒毛长度/隐窝深度显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.T003表3复合酸化剂对白羽肉鸡肠道形态的影响组别绒毛长度/μm隐窝深度/μm绒毛长度/隐窝深度对照组202.59±7.91c64.18±2.91c3.19±0.22bⅠ组241.27±17.47bc70.08±1.42ab3.45±0.27abⅡ组306.12±10.79a77.17±3.04a3.98±0.16abⅢ组268.75±21.77ab66.59±4.19bc4.11±0.46a2.3复合酸化剂对白羽肉鸡空肠内容物消化酶活性的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡空肠中胰蛋白酶活性显著升高（P0.05）。Ⅱ组脂肪酶活性显著高于Ⅰ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.T004表4复合酸化剂对白羽肉鸡空肠内容物消化酶活性的影响组别淀粉酶胰蛋白酶脂肪酶对照组4.81±0.152 879.93±23.65b308.31±7.86abⅠ组4.66±0.342 971.31±50.79ab301.36±7.89bⅡ组4.97±0.253 018.39±33.98a324.58±4.85aⅢ组5.14±0.163 044.58±52.92a320.18±6.04abU/mg2.4复合酸化剂对白羽肉鸡免疫球蛋白含量的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，Ⅲ组肉鸡血清中IgA含量、IgG含量均显著升高（P0.05）；复合酸对IgM含量未产生显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.T005表5复合酸化剂对白羽肉鸡免疫球蛋白含量的影响组别IgAIgGIgM对照组11.04±0.51b708.26±30.41b221.97±11.58Ⅰ组11.21±0.46ab760.94±17.09ab209.08±8.36Ⅱ组12.87±0.96ab721.54±31.04ab229.87±11.17Ⅲ组13.01±0.52a790.15±21.06a216.28±8.78mg/L2.5复合酸化剂对白羽肉鸡肉品质的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡肌肉红度显著提高（P0.05），Ⅲ组肉鸡黄度值显著提高（P0.05），Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡滴水损失显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.05.010.T006表6复合酸化剂对白羽肉鸡肉品质的影响组别红度黄度亮度滴水损失%蒸煮损失%剪切力/N对照组2.51±0.14c13.68±0.35n53.66±0.924.11±0.10a24.18±0.4233.52±1.52Ⅰ组2.56±0.16bc13.68±0.51b53.51±1.103.96±0.18ab24.25±1.1632.44±1.42Ⅱ组3.02±0.11a14.52±0.45ab54.28±1.573.51±0.15c23.91±0.7831.65±0.87Ⅲ组3.11±0.15a14.97±0.14a54.12±1.603.76±0.11bc24.06±0.9131.46±0.863讨论3.1复合酸化剂对白羽肉鸡生长性能的影响日粮、饮水中添加复合酸化剂能够有效酸化水质、降低水硬度，抑制大肠杆菌繁殖，提高肉鸡矿物质吸收和饲料利用率，增强消化腺作用，促进蛋白酶水解，提高蛋白和氨基酸消化率[7-8]。研究表明，在肉鸡日粮中添加0.1%二甲酸钾、0.05%月桂酸可明显改善肉鸡生长性能和血脂代谢，增加平均日增重和采食量，提高腿肌率[9]。添加苯甲酸对1~21日龄肉鸡的平均增重有提高趋势，0.7%的添加量显著提高了1~21日龄阶段的平均日采食量[10]。本试验中，添加0.10%和0.20%的复合酸能够显著提高肉鸡的饲料效率，增加肉鸡的平均日增重。结合后续对空肠内容物及空肠形态的测定，本试验中复合酸提高饲料转化率的效果可能与肠道蛋白酶活性和脂肪酶活性、小肠吸收效率提高有关。3.2复合酸化剂对白羽肉鸡空肠内容物消化酶活性的影响家禽主要通过内源酶对底物的分解进行消化，其肠道中淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性直接影响底物分解程度，进而影响饲料利用效率。蛋白酶最适pH值为酸性，添加复合酸能够通过肠道内环境而影响其活性[11]。有机酸能够加强消化道蠕动、食糜推进及消化液分泌，使底物与酶完全充分接触，提高消化率[12]。本试验中，消化酶活性高的试验组饲料效率也相应提高，证明了上述观点。复合酸能够抑制肠道病原菌并保护肠上皮细胞，促进益生菌定植生长[13]。酸化剂可刺激肠道消化腺分泌更多内源酶，相关代谢物能够促进肠上皮细胞生长、细胞分裂速率加快[14]，提高营养物质消化和沉积效率。3.3复合酸化剂对白羽肉鸡肠道形态的影响消化道形态能够直接影响肉鸡吸收能力。原因是肠绒毛较长代表其与营养物质接触面大，能吸收养分的上皮细胞总量多，吸收效率高。隐窝深度代表肠细胞生成速度和成熟率，常以绒毛长度/隐窝深度（V/C）作为一项综合指标反映肠道黏膜状态和吸收能力[15-16]。研究发现，酸化剂能够显著提高肉鸡空肠绒毛长及V/C值[17]。添加乳酸型复合酸化剂能够显著提高白羽肉鸡十二指肠、空肠和回肠绒毛长度，降低隐窝深度，增加绒腺比[4]。复合酸化剂在其他动物的应用中也有类似效果。复合有机酸可以显著提高断奶仔猪空肠和回肠的绒毛长度和绒腺比[18]，说明酸化剂在不同动物肠道中的作用机制类似，能够增加绒毛长度进而提高吸收效率。本试验结果显示，饮水中添加复合酸化剂可显著提高肉鸡小肠绒毛长度和绒腺比，使肠绒毛排列紧密有序，与上述研究结果基本一致，表明饮水中添加复合酸化剂对白羽肉鸡肠道形态、发育有一定促进作用。3.4复合酸化剂对白羽肉鸡免疫球蛋白含量的影响免疫球蛋白在动物体液免疫中发挥重要功能，可对外来抗原做出免疫应答，其活性能够在一定程度上反映免疫功能。研究发现，添加益生菌及有机酸复合制剂能够增强青脚麻鸡免疫功能[19]。肉鸡饲料中添加酸化剂和微生态制剂后，血清中白蛋白、IgA、IgG和IgM均显著提高[20]。复合酸化剂与抗菌肽和寡糖联合使用后，除血清免疫免疫指标外，盲肠微生物多样性及菌群丰度均得到提升[21]。单独在蛋鸡饮水中添加复合酸化剂能够降低23和32周龄蛋鸡血清炎症因子水平，提高免疫力，提升血液和肝脏抗氧化能力，缓解肝脏损伤和产蛋前期肾脏损伤[22]。本试验中，与未添加复合酸的对照组相比，添加0.10%和0.20%复合酸的肉鸡血清IgA含量均显著升高，添加0.20%复合酸试验组的血清IgG显著增加，与上述研究结果相似，推测复合酸化剂能够改善肉鸡血清免疫指标。3.5复合酸化剂对白羽肉鸡肉品质的影响肉色是鸡肉感官评定的重要指标，肌肉的吸水力与肌肉脂肪含量、抗氧化能力、肌肉细胞膜的完整性和pH值存在密切关系，滴水损失和烹饪损失与肌肉的多汁性、嫩度和贮藏期相关。本试验中，复合酸添加剂能够显著提高肌肉的红度和黄度，滴水损失率显著降低。研究发现，酸化剂能够显著降低三黄鸡胸肌和腿肌的滴水损失，增加肌内脂肪和风味物质含量[23]，改善肌肉纤维和肉品质[24]。另一项肉鸡肉质的研究发现，添加量为0.2 g/kg的酸化剂可显著降低胸肌的剪切力和肌纤维直径[25]。结合本试验结果，推测饮水中添加复合酸化剂可提高肌肉持水性，改善肉品质。饮水添加复合酸化剂可改善肉鸡生长性能、肉质色泽及口感，增强肠道营养吸收效率和免疫水平，优化消化内环境，减少抗生素使用，在肉鸡养殖及饲料生产中具有广阔的应用前景。饮水中添加0.10%和0.20%复合酸肉鸡的生长性能、肠道形态、免疫指标和肌肉品质优势较为明显。4结论饮水中添加复合酸化剂可以提高白羽肉鸡生长性能，促进肠道发育，增强消化酶活性及免疫功能，改善肉品质。饮水中复合酸化剂适宜添加水平为0.10%~0.20%。