苦瓜，性寒味苦，具有食用价值和药用功能，具有清火明目、滋养益气、增强免疫力[1]、抗肿瘤[2]、抗病毒[3]等功效。苦瓜多糖是苦瓜的主要有效成分，具有降血糖[4]、抗肿瘤[5]、抑菌和提高免疫力[6]等功效。周惠萍等[7]通过建立环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠模型，利用不同浓度苦瓜多糖灌服小鼠，连喂7 d，结果发现，苦瓜多糖能够提高小鼠血液中白细胞数量，增强巨噬细胞吞噬功能，升高溶血素水平，促进脾淋巴细胞增殖，提高脾和胸腺指数，发挥免疫调节作用。杜国丰等[8]通过建立四氧嘧啶致高血糖小鼠模型，利用不同浓度的苦瓜多糖铁络合物灌服小鼠，连喂28 d，结果发现，苦瓜多糖能够降血糖浓度，保护和修复胰岛B细胞。多糖生物活性具有一定的药用价值。研究表明，苦瓜多糖具有天然活性，但许多相关药理机制还不明确[9]，如剂量-效应关系、药理活性结构、作用效应关系等；苦瓜多糖体外药理活性的研究、体内研究和临床应用缺乏数据等。本试验研究苦瓜多糖对蛋鸡免疫功能和血清生化指标的影响，为研究苦瓜的生物学功能、开发苦瓜多糖相关产品在蛋鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物试验蛋鸡30周龄，产蛋高峰期，均为海兰褐商品代，由锦州鸿强牧业有限公司提供。1.1.2试验添加剂苦瓜多糖购自晨光生物技术有限公司，纯度≥90%；盐酸左旋咪唑粉购自四川省飞天动物药业有限公司，批号200901。1.1.3主要试剂鸡白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-10（IL-10）试剂盒购自上海岚派生物科技有限公司；总胆固醇试剂盒购自上海仁捷生物科技有限公司；鸡新城疫病毒血凝抑制试验（HI）抗原购自中国兽医药品监察所；磷酸盐缓冲溶液（PBS）、RPMI-1640培养液、胎牛血清（FBS）、氯化铵（NH4Cl）和三羟甲基氨基甲烷（Tris）购自北京索莱宝科技有限公司；二甲基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮唑盐（MTT）、台盼蓝（Trypan Blue）购自上海展云化工有限公司。1.2试验设计与饲养管理300只周龄海兰褐蛋鸡随机分为5组，每组60只蛋鸡。KOBA组为空白对照组，ZXMZ组为添加0.2 g/kg左旋咪唑对照组，KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组分别为添加1、2和4 g/kg苦瓜多糖组。蛋鸡自由采食和饮水。前2周饲喂基础日粮，第3周添加药物开始正式试验，试验期12 w。基础日粮为大成农技（葫芦岛）有限公司生产的鸡产蛋期配合饲料，配合饲料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.06.014.T001表1配合饲料营养水平项目粗蛋白粗纤维粗灰分钙总磷氯化钠水分赖氨酸蛋氨酸含量≥16.0≤7.0≤13.0≤13.0≥0.50.3~0.8≤14.0≥0.90.42~0.89%1.3测定指标及方法1.3.1NDV抗体效价采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验检测NDV抗体效价，每组随机抽取20只鸡分别检测，参考石蓉[10]的试验方法。1.3.2血清细胞因子含量采用ELISA法检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-10的含量，每组随机抽取5只鸡，翅下静脉无菌采血2 mL，制备血清，混匀。每组3个重复，参考Song等[11]、Wu等[12]试验方法。1.3.3血清中物质代谢指标使用全自动生化分析仪检测血清中总蛋白、甘油三酯、总胆固醇和葡萄糖含量，每组随机抽取5只鸡，翅下静脉无菌采血2 mL，制备血清，混匀。每组3个重复，参考刘海斌等[13]试验方法。1.3.4血清免疫球蛋白含量采用全自动生化分析仪检测血清中免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）含量，每组随机抽取5只鸡，翅下静脉无菌采血2 mL，制备血清，混匀。每组3个重复，参考刁华杰等[14]试验方法。1.4数据统计与分析数据采用统计软件SPSS 17.0进行一维方差分析组间差异。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1苦瓜多糖对蛋鸡NDV抗体效价的影响（见表2）由表2可知，ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组蛋鸡NDV抗体效价均极显著高于KOBA组（P0.01）；KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组蛋鸡NDV抗体效价与ZXMZ组差异均不显著（P0.05）；KGDT2组极显著高于KGDT1组（P0.01），显著高于KGDT4组（P0.05）。研究表明，苦瓜多糖能够提高NDV抗体效价，KGDT2组效果最佳。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.06.014.T002表2苦瓜多糖对蛋鸡NDV抗体效价的影响项目KOBA组ZXMZ组KGDT1组KGDT2组KGDT4组NDV抗体效价7.15±0.75Cc8.55±0.76ABab8.05±0.69Bb8.95±0.83Aa8.45±0.69ABb注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。lg22.2苦瓜多糖对蛋鸡血清细胞因子含量的影响（见表3）由表3可知，ZXMZ组、KGDT1组和KGDT2组蛋鸡血清IL-2含量均极显著高于KOBA组（P0.01），KGDT4组显著高于KOBA组（P0.05）；KGDT2组显著高于KGDT1组和KGDT4组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.06.014.T003表3苦瓜多糖对蛋鸡血清细胞因子含量的影响项目KOBA组ZXMZ组KGDT1组KGDT2组KGDT4组IL-247.19±4.51Bc78.65±3.65Aab66.38±13.11ABb86.62±9.71Aa69.98±7.79AbIL-432.13±3.03Cd48.83±5.31Bb39.03±2.25Cc60.73±4.03Aa40.06±2.42BCcIFN-γ14.61±1.85Cc36.34±2.00ABa30.93±1.46Bb59.58±1.88Aa32.13±2.21BbIL-1042.27±3.02Bb56.69±5.48Aa52.40±7.71ABa57.21±4.01Aa54.06±4.65ABang/LZXMZ组和KGDT2组蛋鸡血清IL-4含量均极显著高于KOBA组（P0.01）；KGDT1组和KGDT4组均显著高于KOBA组（P0.05）；KGDT4组极显著高于ZXMZ组（P0.01）；KGDT2组极显著高于KGDT1组和KGDT4组（P0.01）。ZXMZ组、KGDT1组和KGDT2组蛋鸡血清IFN-γ含量均极显著高于KOBA组（P0.01），KGDT4组显著高于KOBA组（P0.05）；KGDT2组极显著高于KGDT1组和KGDT4组（P0.01）。ZXMZ组和KGDT2组蛋鸡血清IL-10含量极显著高于KOBA组（P0.01），KGDT1组和KGDT4组显著高于KOBA组（P0.05）。研究表明，苦瓜多糖能够改善蛋鸡血清细胞因子，KGDT2组效果最佳。2.3苦瓜多糖对蛋鸡血清脂代谢指标的影响（见表4）由表4可知，KGDT1组、KGDT2组、KGDT4组蛋鸡血清中总蛋白含量极显著高于KOBA组（P0.01），ZXMZ组显著高于KOBA组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.06.014.T004表4苦瓜多糖对蛋鸡血清脂代谢指标的影响项目KOBA组ZXMZ组KGDT1组KGDT2组KGDT4组总蛋白/(g/L)35.21±0.49Bb39.87±2.15ABa41.80±0.88Aa41.47±2.33Aa41.56±2.61Aa甘油三酯/(mmol/L)5.16±0.625.12±0.635.06±0.735.09±0.575.13±0.28总胆固醇/(mmol/L)1.92±0.631.85±0.601.69±0.491.79±0.461.80±0.46葡萄糖/(mmol/L)10.78±1.3111.77±1.1112.51±0.8111.53±1.3612.55±0.47ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组、KGDT4组蛋鸡血清甘油三酯和总胆固醇含量低于KOBA组，但各组差异均不显著（P0.05）。ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组蛋鸡血清葡萄糖含量高于KOBA组，但各组差异均不显著（P0.05）。2.4苦瓜多糖对蛋鸡血清免疫球蛋白含量的影响（见表5）由表5可知，ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组、KGDT4组蛋鸡血清IgG含量均极显著高于KOBA组（P0.01）；KGDT2组极显著高于KGDT1组（P0.01），显著高于KGDT4组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.06.014.T005表5苦瓜多糖对蛋鸡血清免疫球蛋白含量的影响项目KOBA组ZXMZ组KGDT1组KGDT2组KGDT4组IgG2.11±0.13Cc3.19±0.15ABab2.77±0.10Bb3.57±0.46Aa3.08±0.23ABbIgA0.22±0.040.26±0.070.24±0.040.28±0.030.25±0.05IgM1.23±0.04Bb1.45±0.12Aa1.41±0.08ABa1.49±0.07Aa1.43±0.07ABag/LZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组、KGDT4组蛋鸡血清IgA含量均高于KOBA组，但各组差异均不显著（P0.05）。ZXMZ组和KGDT2组蛋鸡血清IgM含量均极显著高于KOBA组（P0.01），KGDT1组和KGDT4组均显著高于KOBA组（P0.05）。3讨论3.1苦瓜多糖对蛋鸡血清NDV抗体效价、细胞因子和免疫球蛋白含量的影响NDV抗体效价能够反映家禽新城疫免疫的效果，显示特异性体液免疫功能[15]。本试验中，ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组蛋鸡血清NDV抗体效价均极显著高于KOBA组，表明日粮中添加苦瓜多糖可以提高蛋鸡特异性体液免疫功能。细胞因子间接反映动物细胞免疫功能，产蛋期蛋鸡外周血中细胞因子含量的高低能够反映该时期蛋鸡的免疫力[16]。本试验中，ZXMZ组、KGDT1组和KGDT2组外周血的IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-10含量显著或极显著高于KOBA组，表明日粮中添加苦瓜多糖可提高蛋鸡细胞免疫功能。产蛋期蛋鸡血清中免疫球蛋白含量能够反映该时期的免疫力，免疫球蛋白可以间接反映动物机体的体液免疫功能[17]。本试验中，血清中IgA、IgM、IgG含量呈上升的趋势，且ZXMZ组、KGDT1组和KGDT2组IgG、IgM含量显著或极显著高于KOBA组，表明日粮中添加苦瓜多糖可提高蛋鸡的体液免疫功能。3.2苦瓜多糖对蛋鸡血清脂代谢的影响血清中总蛋白指标反映机体内蛋白质合成与代谢的状况，含量越高，机体的免疫功能越高。血清中甘油三酯、总胆固醇含量代表机体脂肪代谢状况，日粮中添加苦瓜多糖可以提高机体脂肪代谢水平[18]。本试验中，KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组血清中总蛋白含量均极显著高于KOBA组，ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组血清中甘油三酯和总胆固醇含量均低于KOBA组，ZXMZ组、KGDT1组、KGDT2组和KGDT4组血清中葡萄糖含量均高于KOBA组，但差异不显著，表明苦瓜多糖能够提高蛋鸡蛋白质、脂肪和糖的代谢水平。4结论本试验通过蛋鸡血清中NDV抗体效价、细胞因子分泌、物质代谢指标和免疫球蛋白含量的检测，表明苦瓜多糖能够提高蛋鸡免疫功能和血液生化指标，苦瓜多糖添加2 g/kg时效果最佳。试验结果将为苦瓜多糖作为饲料添加剂的研究提供准确、详细的试验依据，为苦瓜多糖在畜牧业生产实践的应用提供参考。