随着羊肉需求量增加，阿尔巴斯绒山羊作为典型的绒肉兼用型品种，正在以生产绒毛逐渐向生产山羊肉的方向转变，舍饲和半舍饲是绒山羊主要的饲养模式。Wang等[1]研究表明，自然放牧条件下，育肥羔羊皮下脂肪组织和胸最长肌中多不饱和脂肪酸（PUFA）总含量显著提高。PUFA可降低人体患各种心血管疾病的风险，抑制某些肿瘤细胞的生长，部分n-3 PUFA还对维持神经系统及脑神经细胞的正常功能具有促进作用，但集约化养殖会降低羊肉中的PUFA含量。因此，在舍饲条件下提高生产性能的同时，通过营养干预提高羊肉中PUFA含量，对改善羊肉质量、促进养羊业的健康持续发展具有重要意义。亚麻油富含α-亚麻酸（ALA），属于n-3 PUFA，含量高达40%~60%[2-3]，是组成人体各组织生物膜结构的必需脂肪酸之一。Wang等[4]研究发现，在动物日粮中加入亚麻油可提高肉品中n-3 PUFA含量。Bauman等[5]研究发现，油脂中不饱和脂肪酸含量越高，被瘤胃微生物氢化速度越快。Reiser[6]在盛有瘤胃内容物的培养基中添加亚麻油培养一段时间后发现，ALA含量从30%下降至5%。亚麻油在空气和光照条件下极易被氧化，且ALA易被反刍动物瘤胃微生物氢化，产生一系列氢化产物和饱和脂肪酸。因此，在日粮中添加亚麻油可以增加动物产品中PUFA含量和动物的氧化应激。棕榈油是一种比较稳定的天然的抗氧化剂，富含维生素E，可与氧化过程中产生的自由基结合，具有清除自由基、终止或延迟氧化的作用[7]。Wang等[8]研究发现，棕榈油能够保护绒山羊的ALA免于瘤胃微生物的氢化作用和肌肉氧化，但棕榈油n-3 PUFA含量低；混合饲喂亚麻油和棕榈油能够增加绒山羊肌肉组织中C18∶3n-3、C20∶5n-3、C22∶6n-3和n-3 PUFA的浓度，改善羊肉品质。然而在日粮中添加亚麻油和棕榈油是否影响瘤胃发酵尚不清楚，反刍动物的瘤胃发酵功能是研究反刍动物营养与饲料最重要的一项指标，直接反映绒山羊的机体健康状态和生产性能[9]。本试验采取体外法模拟羊瘤胃的发酵情况，探究亚麻油和棕榈油混合添加对绒山羊体外瘤胃发酵功能的影响，为提高绒山羊生产性能、肉品质以及亚麻油和棕榈油资源在饲料领域的合理开发与应用提供参考。1材料与方法1.1试验动物与材料试验选择3只体况相近的2周岁健康阿尔巴斯绒山羊作为瘤胃液供体羊，试验期晨饲前空腹口腔采集瘤胃液进行体外培养。1.2试验设计试验采用单因素完全随机试验设计，设5个处理组，每组6个重复。分别在底物日粮中添加不同比例混合的亚麻油与棕榈油，对照组（CON组）仅添加2%亚麻油，不添加棕榈油，PMO组仅添加2%棕榈油，不添加亚麻油，其余3个处理组的亚麻油∶棕榈油依次为4∶6（LP1组）、5∶5（LP2组）、6∶4（LP3组）。底物日粮精粗比5∶5，各处理组油脂添加量均为2%。底物日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T001表1底物日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00谷草44.96消化能/(MJ/kg)10.71苜蓿草颗粒2.96粗蛋白/%10.15燕麦草颗粒2.08粗脂肪/%4.46玉米32.92中性洗涤纤维/%42.65大豆粕4.80酸性洗涤纤维/%23.24DDGS3.30钙/%0.55预混料0.50磷/%0.33石粉0.20磷酸氢钙0.20食盐0.30小苏打0.48亚麻仁饼5.30棕榈油/亚麻油2.00注：1.每千克预混料为日粮提供：Fe 8 g、Cu 1.6 g、Zn 10 g、Mn 6 g、I 60 mg、Se 60 mg、Co 50 mg、VA 1 200 000 IU、VD 3 500 000 IU、VE 2 500 IU、VK 3 360 mg、VB1 70 mg、VB2 1 700 mg、VB6 180 mg、烟酸4 400 mg、D-泛酸3 400 mg、VB12 6 mg、生物素28 mg、叶酸300 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3体外发酵培养缓冲液配制方法参考Menke等[10]的方法。准确称取底物日粮0.98 g、各处理组油脂27 μL于各发酵瓶中，39 ℃水浴锅中预热。将瘤胃液与缓冲液以1∶2的比例混合，分装至各发酵瓶中60 mL，该步骤全程通CO2进行，保证厌氧，分装完成，盖好瓶塞转移至39 ℃ 120 r/min气浴摇床中培养3、6、9、12、24 h；培养结束，将发酵瓶置于盛满碎冰的泡沫箱中冰浴，终止发酵，取样测定各项指标。1.4测定指标及方法测定指标包括体外发酵指标、产气量和原虫数量。pH值采用CT-6022型手持便携式pH计测定；氨态氮（NH3-N）浓度参考冯宗慈等[11]报道的比色法测定；菌体蛋白（BCP）浓度采用Bradford考马斯亮蓝法测定[12-13]；挥发性脂肪酸（VFA）浓度采用内标法测定；原虫数量采用冯仰廉[14]方法测定；产气量采用ANKOM RFS产气系统测定；参考张清月等[15]方法计算不同处理的各指标单项组合效应值（SFAEI）之和（MFAEI）。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2019软件进行整理，SAS 9.2软件进行单因素方差分析。结果以平均值和总标准误（SEM）表示。P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵pH值与NH3-N浓度的影响（见表2）由表2可知，9 h时，LP1组、LP2组和LP3组瘤胃发酵的NH3-N浓度显著低于CON组、PMO组（P0.05）；12 h时，LP3组瘤胃发酵的NH3-N浓度显著低于CON组、PMO组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T002表2亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵pH值与NH3-N浓度的影响项目CON组PMO组LP1组LP2组LP3组SEMP值pH值3 h6.716.646.686.676.690.020.4916 h6.536.626.646.666.680.060.6159 h6.126.156.146.206.100.040.61512 h6.286.306.316.266.180.040.58824 h6.216.226.206.236.160.010.281NH3-N浓度/(mg/100 mL)3 h16.3916.3116.6216.5516.590.130.4266 h17.7617.5017.8817.7517.720.320.9579 h16.26a15.83a14.98b14.99b14.90b0.140.00712 h18.22a17.71ab16.65abc16.28bc16.02c0.370.04524 h19.6719.9617.9518.2417.900.610.205注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵BCP浓度、原虫数量及产气量的影响（见表3）由表3可知，9 h时，LP1组、LP2组和LP3组瘤胃发酵的BCP浓度显著高于PMO组（P0.05），以LP3组较高；12 h时，LP1组、LP3组瘤胃发酵BCP浓度显著高于PMO组、CON组（P0.05）；24 h时，LP3组瘤胃发酵BCP浓度显著高于PMO组、CON组（P0.05）。9 h时，PMO组瘤胃发酵的原虫数量显著高于LP2组、LP3组（P0.05）；12、24 h时，PMO组瘤胃发酵的原虫数量均显著高于LP1组、LP2组和LP3组（P0.05）。整个体外发酵过程中，各处理组产气量逐渐增加。9、12 h时，LP3组产气量显著低于PMO组、LP2组（P0.05）；24 h时，产气量以PMO组、CON组较高，且显著高于LP1组、LP3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T003表3亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵BCP浓度、原虫数量及产气量的影响项目CON组PMO组LP1组LP2组LP3组SEMP值BCP/(mg/100 mL)3 h26.7627.7626.5226.2326.050.340.6886 h17.2417.5017.2516.6017.200.270.2949 h32.06ab28.34b33.31a33.13a33.51a0.890.04612 h30.50b31.22b32.95a31.77ab33.07a0.300.00524 h31.11c31.79bc33.28ab32.94abc34.26a0.410.047原虫数量/(×104/mL)3 h4.015.204.355.455.260.750.7386 h4.854.554.163.984.290.350.7909 h13.20ab14.42a12.01ab11.48b10.89b0.520.04812 h17.23ab21.29a14.26b13.95b13.86b0.750.00524 h12.06a12.42a10.05b10.19b9.73b0.290.004产气量/mL3 h19.0823.5121.5120.3819.751.140.2996 h42.4245.9245.3846.2443.031.200.4739 h77.58ab79.46a76.52ab79.81a73.98b0.890.03312 h93.57ab95.76a92.28ab95.45a90.59b0.830.04924 h118.26a117.55a114.42b115.51ab113.19b0.500.0192.3亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵VFA浓度的影响2.3.1亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵乙酸、丙酸和丁酸浓度的影响（见表4）由表4可知，9 h时，LP3组瘤胃发酵的乙酸浓度显著高于PMO组和LP1组（P0.05）；12 h时，LP3组瘤胃发酵的乙酸浓度显著高于LP1组和CON组（P0.05）；24 h时，LP3组瘤胃发酵的乙酸浓度显著高于PMO组和LP2组（P0.05）。12 h时，LP3组瘤胃发酵的丙酸浓度最高，显著高于PMO组、LP1组和CON组（P0.05）；24 h时，PMO组瘤胃发酵的丙酸浓度显著低于LP1组和LP3组（P0.05）。12 h，LP3组瘤胃发酵的丁酸浓度显著高于LP1组和CON组（P0.05），且在所有处理组中浓度最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T004表4亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵乙酸、丙酸和丁酸浓度的影响项目CON组PMO组LP1组LP2组LP3组SEMP值乙酸浓度3 h12.0412.0311.7911.5811.970.220.6776 h15.7915.4516.4415.7315.410.400.5769 h23.99ab18.52b18.04b23.30ab25.81a1.200.04712 h19.95b22.65ab21.68b22.91ab25.24a0.760.04624 h27.73ab26.29c28.04ab27.10bc28.96a0.300.015丙酸浓度3 h3.493.553.453.403.690.150.7596 h5.435.385.415.395.630.130.6999 h11.6910.3310.5611.9212.550.570.19712 h9.52b10.19b10.15b10.79ab11.69a0.310.04924 h15.49ab15.22b15.77a15.45ab15.79a0.100.028丁酸浓度3 h1.271.311.271.261.380.050.5506 h1.681.651.671.641.770.040.4649 h3.353.143.203.433.730.150.15312 h3.68bc3.85ab3.38c3.83ab4.16a0.070.02024 h5.315.255.295.265.460.040.208mmol/L2.3.2亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵异丁酸、戊酸与异戊酸浓度的影响（见表5）由表5可知，各时间点，各组瘤胃发酵的异丁酸、异戊酸的浓度差异均不显著（P0.05）；12 h，LP1组瘤胃发酵的戊酸浓度显著高于CON组、LP2组、LP3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T005表5亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵异丁酸、戊酸与异戊酸浓度的影响项目CON组PMO组LP1组LP2组LP3组SEMP值异丁酸3 h0.210.230.220.190.200.010.2506 h0.200.230.240.220.180.030.7049 h0.380.420.440.400.390.030.62212 h0.400.430.420.440.370.030.54224 h0.400.440.430.410.460.030.538戊酸3 h0.140.170.160.140.150.010.1496 h0.160.160.180.170.150.010.3839 h0.370.310.320.350.340.020.20212 h0.40b0.41ab0.43a0.39b0.41b0.010.01024 h0.570.530.560.550.540.010.470异戊酸3 h0.210.210.190.220.200.010.3516 h0.240.200.210.220.230.010.0839 h0.480.430.450.440.460.010.27112 h0.550.540.610.570.560.030.52124 h0.510.500.550.520.530.020.446mmol/L6 h时，与CON组相比，LP1、LP2和LP3组瘤胃发酵的异戊酸浓度存在一定的降低趋势，但差异不显著（P=0.083）。2.3.3亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵TVFA浓度与乙酸/丙酸的影响（见表6）由表6可知，随发酵时间的持续，各组瘤胃发酵的TVFA浓度逐渐增加，12 h时，LP2组和LP3组显著高于PMO组和CON组（P0.05）；24 h时，PMO组和CON组瘤胃发酵的TVFA含量显著低于LP1组和LP3组（P0.05），且在所有处理组中LP3组TVFA含量较高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T006表6亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵TVFA与乙酸/丙酸的影响项目CON组PMO组LP1组LP2组LP3组SEMP值TVFA/(mmol/L)3 h16.6917.3917.6317.4417.660.700.8786 h23.6823.9424.2523.9724.010.560.9809 h34.7331.8931.1636.5437.101.400.18712 h38.77b38.76b39.61ab40.80a41.39a0.430.01324 h49.73bc48.89c50.96a50.74ab51.46a0.310.001乙酸/丙酸3 h3.223.153.163.183.200.020.4306 h2.892.772.822.862.810.050.4829 h2.082.052.002.102.090.040.42612 h2.092.052.092.132.060.030.66824 h2.102.192.122.082.030.030.3982.4亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵MFAEI的影响（见表7）由表7可知，日粮中添加亚麻油和棕榈油后，混合油组的MFAEI均高于单一油组，且LP3组最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.001.T007表7亚麻油与棕榈油对体外瘤胃发酵MFAEI的影响项目CON组PMO组LP1组LP2组LP3组BCP0-0.0080.0390.0210.102TVFA0-0.0170.0000.0350.047产气量00.031-0.0020.018-0.030MFAEI00.0060.0370.0740.1193讨论瘤胃pH值是反映瘤胃发酵综合水平的主要内环境指标，一般在5.5~7.5之间。研究表明，合成BCP的最适pH值在6.0~7.0之间[16]。反刍动物饲喂植物油会导致瘤胃pH值发生变化，因为瘤胃中会产生大量不饱和脂肪酸，导致瘤胃发酵模式发生变化[17]。本研究中，日粮中添加亚麻油与棕榈油后，瘤胃pH值虽有降低的趋势，但所有处理组均无明显差异，并且在合成BCP的最适pH值范围内，表明亚麻油和棕榈油可能不会对瘤胃微生物产生负面影响。瘤胃液中的BCP能够满足瘤胃微生物对蛋白质的需求，是反刍动物主要的氮供应源，BCP浓度能够直接反映瘤胃微生物合成蛋白质的效率，NH3-N作为合成BCP的主要氮源[18]。Loor等[19]研究表明，6.3~27.5 mg/100 mL为适宜瘤胃NH3-N浓度。本试验中，各处理组NH3-N浓度均在范围内，说明在日粮中添加亚麻油和棕榈油能够满足微生物正常生长发育及生物合成。仅有蛋白质和能量无法合成BCP，同步数量与速度的能氮释放对于微生物蛋白的顺利、高效合成同样重要[20]。本试验中，在9、12 h时，混合油组NH3-N浓度均比单一油组呈不同程度的降低，尤其是LP3组显著降低，且NH3-N浓度与BCP的结果正好相反，说明混合油组，尤其是LP3组，瘤胃微生物合成蛋白的效率显著高于单一油组。原虫数量越多，氮在瘤胃内的周转时间越长。因此，去原虫能够提高反刍动物的氮利用效率[21]。本研究中，3个混合油组（LP1组、LP2组、LP3组）对原虫均具有显著的抑制效果，尤以LP3组的原虫数量最低，说明亚麻油与棕榈油的混合添加能够提高反刍动物对氮的利用效率，以6∶4比例更好。甲烷是反刍动物产气量的主要成分。反刍动物日粮中约2%~15%的能量以甲烷的形式损失，甲烷排放不仅浪费饲料，还会加重温室效应。研究表明，植物精油在调节瘤胃微生物活动方面具有很大潜力，添加300 µL/L的植物精油可使甲烷产量降低约80%[22]。本研究结果表明，随着体外发酵的进行产气量呈上升趋势，说明在日粮中添加亚麻油和棕榈油能够显著促进体外瘤胃发酵及其营养物质代谢。但在同一发酵时间点LP3组的产气量最低，表明在各处理组均促进体外瘤胃发酵的前提下，LP3组的日粮能量损失最少，利用率最高。VFA作为反刍动物主要的能量来源，是反映反刍动物瘤胃发酵水平的重要指标之一，为反刍动物的正常生命活动提供能源。当饲料的能量含量或脂肪含量增加时，有机物发酵增加引起瘤胃环境的变化，导致丙酸量也增加；而乙酸和丁酸的量同时减少，导致乙丙比下降[23]。本试验中，混油组的乙酸、丙酸浓度高于单一油组，乙酸、丙酸和丁酸在9~24 h内浓度显著升高，均以LP3组增加效果最为显著，其他组VFA也有一定程度增加，但浓度较低。随体外培养时间延长TVFA含量逐渐增加，LP3组在所有处理中浓度最高。混油组VFA浓度的显著升高，表明亚麻油和棕榈油对体外瘤胃发酵的促进效果；乙酸/丙酸虽各处理组间差异不显著，但总体呈下降趋势，LP3组降低最为明显，说明在日粮中添加亚麻油和棕榈油能够优化VFA组成，提高饲料利用效率。MFAEI能够综合反映混合饲料中不同成分的互作作用，MFAEI数值越大，互作产生的正效应越强，表明对应的添加比例、添加剂量或饲料组合越利于瘤胃发酵和某些营养组分的利用[15]。因此，可依据MFAEI判断日粮中亚麻油和棕榈油的适宜添加比例。本试验计算各处理组的SFAEI和MFAEI，LP3组的MFAEI值最大，表明当日粮中亚麻油和棕榈油的混合添加比例为6∶4时，对绒山羊体外瘤胃发酵功能的促进效果较好。4结论日粮中添加亚麻油和棕榈油能够促进绒山羊的体外瘤胃发酵功能，且亚麻油和棕榈油以6∶4的比例混合添加时效果较好。