近年来，饲料资源短缺问题在西北地区普遍存在，开发新型饲料、充分利用各种饲料资源是解决问题的主要途径[1]。中国宁夏是主要葡萄酒产地[2]，在酿酒过程中会产生大量的葡萄渣。葡萄渣主要由葡萄梗、葡萄皮及葡萄籽等组成，含有多种营养成分，具有一定的饲用价值。干燥后的葡萄渣中干物质含量89.7％~94.0%，粗蛋白质含量6.65%~14.1%，粗脂肪含量7.1%~10.55%，粗纤维含量18.46%~32.40%，单宁含量3.83%~5.90%[3-6]。葡萄渣中还含有多种氨基酸、葡萄籽油（亚油酸、亚麻酸、β-谷甾醇等）以及多酚类物质（单宁、肉桂酸、丁香酸、槲皮素、儿茶素等）[7-8]。葡萄渣中的多酚类物质，如单宁具有一定的抗营养作用，大量采食多酚类物质会降低动物食欲，具有一定的毒性[9]。研究表明，添加适量的葡萄渣可以改善牛、羊的消化代谢[10-11]，提高生产效率和肉乳品质[12-17]，改善胃肠道的微生物结构[18-21]，增强机体的免疫力和抗氧化能力[19,22-23]。本试验研究葡萄渣对滩羊的生长性能、胃肠道形态和消化酶的影响，以期为葡萄渣在滩羊生产实践中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验时间与地点试验于2020年6月—7月进行，试验地点为银川市贺兰县立岗镇通伏村三社祥鑫泰养殖专业合作社。1.2试验设计与饲养管理试验所用葡萄渣购自贺兰山东麓西鸽酒厂，由宁夏大学饲料工程技术研究中心晾晒干燥后的饲料配制。葡萄渣的营养成分为：干物质95.60%、粗蛋白12.21%、粗纤维30.64%、中性洗涤纤维57.49%、酸性洗涤纤维38.71%、粗脂肪8.22%、钙0.44%、磷0.31%、总能21.8 MJ/kg。选取50只体况相近、体重相似（22±1.7）kg、3月龄左右的去势滩羊。采用单因素完全随机试验设计，将羊随机分群分为5组圈养，每组10个重复，每个重复1只羊。参照肉羊饲养标准（NY/T 816—2004）[24]配制不同添加量的葡萄渣全混合饲粮，添加量分别为0（CON组）、1%（GP1组）、2%（GP2组）、4%（GP4组）和8%（GP8组）。饲粮组成及营养水平见表1。每日8：00、18：00饲喂2次，试验羊自由饮水，圈内放置舔砖。试验期46 d，其中预试期10 d，正式试验期36 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.002.T001表1饲粮组成及营养水平项目CON组GP1组GP2组GP4组GP8组原料组成/%玉米39.2638.1036.9134.6129.97DDGS3.003.003.003.003.00葵花饼1.001.001.001.001.00豆粕5.315.315.315.315.31大豆油0.180.360.560.901.62棉粕7.457.437.427.387.30石粉0.900.900.900.900.90苜蓿3.003.003.003.003.00小苏打0.500.500.500.500.50玉米秸秆37.0037.0037.0037.0037.00尿素0.100.100.100.100.10葡萄渣0.001.002.004.008.00食用盐0.300.300.300.300.30预混料2.002.002.002.002.00合计100.00100.00100.00100.00100.00营养水平消化能/(MJ/kg)9.009.009.009.009.00粗蛋白/%13.8713.8713.8713.8713.87钙/%0.670.670.680.680.69磷/%0.400.390.390.390.39酸性洗涤纤维/%20.7821.2421.7022.6224.44中性洗涤纤维/%32.6933.0833.4634.2335.74注：1.每千克预混料为饲粮提供：VA 180 000 IU、VD3 80 000 IU、VB 800 IU、铜100 mg、铁300 mg、锌1.1 g、锰600 mg、碘6 mg、硒2 mg、钴10 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其他均为实测值。1.3胃肠道组织和内容物采集饲喂试验结束后，每组随机选取5只滩羊，颈动脉放血屠宰，打开腹腔取出内脏器官，分离瘤胃、空肠、盲肠和结肠，防止内容物流动用棉线对各肠段首尾结扎。瘤胃背囊处取下2 cm组织块，空肠、盲肠和结肠的中段各剪取一小段（约2 cm），生理盐水冲洗干净，放入4%甲醛溶液固定，24 h更换新的4%甲醛溶液。使用4层医用无菌纱布过滤瘤胃食糜，收集瘤胃液，无菌镊子取空肠、盲肠和结肠中段的内容物于2 mL无菌冻存管，液氮罐保存，带回实验室，于-80 ℃冰箱保存，用于测定相关消化酶活性。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能预试期开始前1 d和第10 d，正式试验期开始前1 d和第36 d，晨饲前试验羊空腹称重，计算平均日增重（ADG）。每日饲喂时称量记录饲喂量和剩余饲料量，计算平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。平均日增重=（末重－初重）/试验天数（1）平均日采食量=试验期总采食量/试验天数（2）F/G=ADFI/ADG（3）1.4.2胃肠道组织形态将固定的组织样品参照周瑞[25]方法，依次进行固定、包埋、切片、贴片和烤片制成石蜡切片，使用苏木精-伊红（HE）染色，在显微镜4倍镜下，观察各处理组不同胃肠道部位的组织形态。使用Image-Pro Plus6.0软件测量瘤胃的乳头高度、乳头宽度、肌层厚度、角化层厚；空肠的绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度以及肌层厚度，计算绒毛高度/隐窝深度（V/C）以及盲肠和结肠的黏膜层厚度、肌层厚度。1.4.3消化酶活性使用洁净离心管准确称取未解冻的瘤胃液及肠道中段内容物，以质量（mg）∶缓冲液（mL）=1∶9制成10%的样品匀浆液，4 ℃ 4 000 r/min离心10 min，取匀浆上清，用于测定酶活性。使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶、α-淀粉酶，操作方法参照试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析数据采用SPSS 26进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同添加量葡萄渣饲粮对滩羊生长性能的影响（见表2）由表2可知，GP2组滩羊的末重低于其他各组（P0.05）；与CON组相比，GP1组、GP2组、GP4组滩羊的ADFI均显著降低（P0.05），GP8组滩羊的ADFI显著增加（P0.05），GP1组滩羊的ADG降低4.5%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.002.T002表2不同添加量葡萄渣饲粮对滩羊生长性能的影响项目初重/kg末重/kgADG/[g/(只·d)]ADFI/[g/(只·d)]F/GCON组22.3731.14182.671 526.90b8.38GP1组22.3628.43174.441 305.71c7.68GP2组22.3627.89178.891 208.57e6.95GP4组22.3530.64184.821 279.03d7.37GP8组22.3530.43188.521 580.00a8.79SEM0.240.456.8621.420.31P值1.0000.0750.9750.0100.378注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2不同添加量葡萄渣饲粮对滩羊胃肠道组织形态的影响（见表3）由表3可知，与CON组相比，GP2组角化层厚度降低，GP4组滩羊的瘤胃乳头的高度和宽度、肌层厚度分别降低18.10%、5.00%和17.38%，GP8组滩羊的瘤胃乳头的高度和宽度、肌层厚度分别升高20.98%、11.71%和3.20%。与CON组相比，GP4组滩羊空肠的绒毛高度和隐窝深度分别升高2.00%和5.71%，GP2组滩羊的绒毛宽度降低28.60%，GP8滩羊的肌层厚度、V/C分别降低48.5%和17.4%（P0.05）。随着葡萄渣的增加，盲肠的肌层厚度降低，黏膜层厚度升高，各组间差异不显著（P0.05）。结肠中，各组滩羊的肌层厚度均低于CON组（P0.05），GP1组、GP2组和GP4组黏膜层厚度均高于CON组，GP8组则低于CON组和GP4组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.002.T003表3不同添加量葡萄渣饲粮对滩羊胃肠道形态结构的影响项目CON组GP1组GP2组GP4组GP8组SEMP值瘤胃乳头高度/μm955.09750.791 003.71782.381 155.4467.340.321乳头宽度/μm250.24264.76244.60237.85279.559.830.739肌层厚度/μm561.34642.48840.24463.78579.3465.790.545角化层厚度/μm38.1030.9224.3329.6631.531.700.098空肠绒毛高度/μm330.35317.31238.17336.90263.8420.460.501绒毛宽度/μm72.1065.3551.4656.1652.013.120.125隐窝深度/μm169.51178.70165.11179.20158.768.800.966肌层厚度/μm155.00104.8797.32122.0779.8610.220.199V/C2.011.781.471.871.660.090.447盲肠肌层厚度/μm288.30254.74273.88228.31184.0990.290.741黏膜层厚度/μm420.99472.32425.14462.26324.10106.760.562结肠肌层厚度/μm222.61167.28192.85190.57146.1440.580.203黏膜层厚度/μm402.92422.57430.37537.13356.2288.130.117注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3不同添加量葡萄渣饲粮对滩羊消化酶活性的影响（见表4）由表4可知，滩羊瘤胃液样品中，各组的纤维素酶和α-淀粉酶活性间差异不显著（P0.05）；添加葡萄渣后胃蛋白酶的活性均升高，GP8组胃蛋白酶活性显著高于其他组（P0.05）；GP2组和GP4组脂肪酶的活性显著低于其他组（P0.05）。空肠内容物中，GP4组的胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和α-淀粉酶的活性均为最高，GP4组中糜蛋白酶活性显著高于GP1组和GP8组（P0.05）。盲肠内容物中，GP4组脂肪酶的活性均显著高于其他各组（P0.05），GP8组的脂肪酶显著高于GP1组和GP2组（P0.05）；GP4组中纤维素酶和α-淀粉酶的活性均最高，比CON组分别提高17.9%和40.0%，但各组间的差异均不显著（P0.05）。结肠内容物中，各组间纤维素酶、脂肪酶和α-淀粉酶的活性差异不显著（P0.05），纤维素酶活性随着葡萄渣添加均升高，GP8组较CON组提高34.2%；GP1组、GP2组和GP4组的α-淀粉酶活性均高于CON组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.002.T004表4不同添加量葡萄渣饲粮对滩羊消化酶活性的影响项目CON组GP1组GP2组GP4组GP8组SEMP值瘤胃胃蛋白酶14.44b21.63b14.85b21.68b48.84a2.970.010纤维素酶109.31135.6998.6891.49114.756.420.233脂肪酶0.03a0.02a0.01b0.01b0.02a0.000.010α-淀粉酶1.491.590.781.640.680.170.198空肠胰蛋白酶8 282.565 364.236 575.7310 175.527 251.05594.870.111糜蛋白酶5.32ab4.32b5.65ab6.37a4.10b0.270.026脂肪酶0.20ab0.14ab0.12b0.25a0.22ab0.020.010α-淀粉酶8.726.736.699.945.350.760.354盲肠纤维素酶106.2083.62100.73125.17124.996.230.169脂肪酶0.12bc0.10c0.07d0.20a0.14b0.010.010α-淀粉酶0.71c0.72c0.50c1.26a1.01b0.070.010结肠纤维素酶79.4276.1883.1092.10106.614.560.218脂肪酶0.120.130.100.150.150.010.134α-淀粉酶0.901.241.221.450.660.120.283U/mg prot3讨论3.1不同添加量的葡萄渣饲粮对滩羊生长性能的影响家畜的增重速度和饲料成本直接影响生产效益。本试验中，饲粮中葡萄渣添加量增加后，玉米使用量减少，需要增加大豆油平衡能氮水平；滩羊饲喂葡萄渣饲粮后，GP1组、GP2组的ADFI均显著降低，但ADG和FCR与CON组无显著差异。研究发现，低添加量的葡萄渣饲粮不会影响动物生长性能[26]，而本试验得出低添加量组的采食量均降低。GP8组滩羊的ADFI显著高于CON组，ADG也较高。李会菊等[27]研究表明，滩羊饲喂葡萄渣的适宜量为8%。卢珍珍[13]使用葡萄渣添加量为8%和16%时饲喂杜寒杂交羔羊，发现羔羊的ADFI、ADG和FCR显著提高。Dohne美利奴绵羊的饲粮中添加9.6%~12.2%葡萄渣时，有利于绵羊生长[12]。研究结果不同可能与试验羊的品种、年龄、葡萄渣的组成以及饲养环境等多方面因素有关。目前尚无低添加量葡萄渣饲粮降低动物采食量的相关报道。家畜采食量受食欲的调节，而食欲调节是神经系统、肠道菌群、心理因素和主观选择之间相互作用的结果[28]。本试验中，GP1组、GP2组滩羊采食量降低可能是饲料中配制后适口性不同引起的。葡萄渣中单宁具有一定的抗营养作用，过量使用会降低动物的生长性能[29]，但本试验滩羊的ADG在高添加量组无显著变化。3.2不同添加量的葡萄渣饲粮对滩羊胃肠道组织形态的影响瘤胃是反刍动物重要的消化器官，可以对植物纤维、淀粉、脂肪、蛋白质等多种养分进行消化，产生大量的挥发性脂肪酸，为机体提供能量。本试验中，各处理组的瘤胃乳头高度和宽度、肌层厚度间均无显著差异，GP2组滩羊的角化层厚度略低于对照组。瘤胃的发育受动物年龄、饲粮营养水平、瘤胃代谢物和神经内分泌等多种因素的影响[30]。杨宏波[31]研究发现，饲粮精粗比为6∶4的犊牛瘤胃背囊乳头长度和瘤胃背囊胃壁厚度最大。张德印等[32]研究发现，湖羊的采食量和ADG与瘤胃乳头高度、肌层厚度间存在显著的正相关。本试验结果显示，GP8组滩羊的ADFI显著高于GP4组，各组的ADG间无显著差异，可能是采食量的增加促使GP8组的瘤胃乳头高度、乳头宽度、肌层厚度高于对照组，GP4组的各项指标降低可能与个体差异有关。添加葡萄皮渣可以降低绵羊的瘤胃角质层厚度，添加量20%的瘤胃乳头长度略低于其他组[11]。与本研究中角化层的结果相似，但8%的添加量未降低瘤胃形态指标。小肠结构的正常可以保证机体对营养物质的消化吸收。小肠绒毛长度、隐窝深度、V/C是衡量小肠消化吸收功能和健康状况的重要指标。小肠V/C比下降，表示消化吸收紊乱伴随腹泻，V/C比值上升说明肠内膜面积较大，消化吸收能力较强[33]。隐窝的深度反映细胞生成率，隐窝变浅表明细胞成熟率上升，分泌功能增强。GP4组滩羊空肠绒毛高度和隐窝深度较高，V/C仅低于对照组。说明GP4组的试验羊较健康消化吸收能力较强。不同添加量的葡萄籽原花青素均有利于断奶仔猪小肠绒毛的生长[34]。本试验中，葡萄渣饲粮中所含单宁及酚类物质较低，未能明显提高小肠的健康状况。葡萄渣添加后，GP2组滩羊空肠的绒毛宽度、GP8组的肌层厚度均降低。盲肠和结肠可以消化小肠未消化的养分，主要降解纤维素、多糖等生成VFA，吸收水分和少量营养物质，消化功能与微生物分泌的消化酶有关，组织形态结构则主要影响物质的吸收。羊的大肠无绒毛、固有层内有直而密集的大肠腺，肠腺由单层柱状细胞和杯状细胞组成，形态学指标包括肌层和黏膜层的厚度[35]。本试验中，各处理组的盲肠肌层和黏膜层厚度无显著差异，GP4组滩羊的结肠黏膜层厚度最高，GP8组的结肠肌层和黏膜层厚度低于其他组。盲肠的肌层厚度均高于结肠。与GP4组相比，GP8组的滩羊采食量较高而日增重较低，可能结肠形态改变导致物质吸收减少，特别是水分吸收减少导致腹泻等不良症状，影响动物的生长。3.3不同添加量的葡萄渣饲粮对滩羊消化酶活性的影响动物对饲粮中营养物质的消化吸收依赖消化道中微生物分泌的相关消化酶的作用，饲粮类型及成分组成是影响反刍动物的胃肠道不同部位消化酶分泌和活性的重要因素[36]。本试验中，各处理组的营养水平接近，饲粮的原料组成中用葡萄渣减少部分玉米用量，当葡萄渣添加量为4%和8%时，瘤胃、空肠、盲肠和结肠中大多数消化酶的活性均提升，说明4%~8%的葡萄渣促进滩羊对饲粮中营养物质的消化吸收，进而促进动物的生长发育。添加量为1%和2%对不同部位的部分消化酶活性有降低趋势，GP2组滩羊的瘤胃和盲肠脂肪酶活性显著降低，原因是采食量较低引起的，可能与饲粮的适口性或个体差异有关。葡萄渣中的单宁可以与蛋白质结合，降低瘤胃中的蛋白质降解速率[37]。本试验中，添加葡萄渣后瘤胃胃蛋白酶的活性未降低，GP8组显著提高。研究发现，添加一定量的葡萄籽可以提高瘤胃液中蛋白酶的活性，与本试验结果相似[38]。金亚倩等[11]研究发现，淀粉酶、蛋白酶及各纤维素酶活性均随葡萄皮渣添加水平升高而显著降低。空肠通常是绵羊小肠中消化酶活性最高的部位[39]。GP4组滩羊的空肠中胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和α-淀粉酶活性均最高，GP8组则降低，与王宝维等[40]研究结果一致，GP4组滩羊的消化酶活性显著升高，可能是单宁降低小肠的蠕动，减缓食糜的通过速率，从而提高饲粮的消化率[41]。而GP8组的酶活性降低，可能由于添加量为8%的葡萄渣中单宁抑制蛋白酶和淀粉酶活性[42-43]。盲肠是反刍动物发酵的第二大部位，盲肠和结肠都可以进行纤维素的降解以及营养物质的吸收，脂肪酶和α-淀粉酶活性较空肠降低，纤维素酶和脂肪酶随着葡萄渣的添加活性升高。可能是葡萄渣饲粮改变大肠中纤维分解菌的组成结构，促进纤维素酶的分泌。脂肪酶的活性升高可能与葡萄渣饲粮中大豆油的含量增加有关。4结论葡萄渣饲粮不影响滩羊的生长性能，4%的葡萄渣饲粮有利于提高空肠绒毛高度、结肠黏膜层和肠道消化酶活性，8%的葡萄渣饲粮可以提高瘤胃乳头的高度、宽度、肌层厚度以及瘤胃和大肠相关消化酶的活性。因此，葡萄渣具有一定的饲用价值，4%和8%的葡萄渣饲粮对滩羊的胃肠道功能均有积极作用。