鸡蛋富含营养物质，包括除维生素C以外的所有维生素，被认为是饮食中维生素的主要来源[1]。维生素E存在于蛋黄中，具有降低胆固醇[2]、提高人体免疫力、预防心血管疾病[3-4]、减缓衰老[5-6]等作用。人体缺乏维生素E会引起男性睾丸肿胀萎缩[7]，女性卵巢早衰，还可引起细胞膜结构和功能损伤、机体代谢失衡、免疫力下降[8]。但人体自身无法合成维生素E，需要从食物中摄取[1]。芦花鸡抗病力强、适于散养、产蛋量高、肉质细腻。本研究以芦花蛋鸡为试验对象，在基础日粮中添加不同水平的维生素E乙酸酯，探讨其对鸡蛋中维生素E含量及其蛋品质的影响，为富维生素E功能性鸡蛋研发提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验于2019年7月—8月在金洼农业科技（天津）发展有限公司芦花鸡养殖基地进行。选取180只30周龄体重相近、健康的芦花蛋鸡，随机分为4组，每组3个重复。对照组芦花鸡饲喂基础日粮，试验1组、2组、3组分别在基础日粮中添加120、240、480 mg/kg的维生素E乙酸酯。预试期3 d，正式试验期30 d。蛋鸡室内平地散养，自由采食和饮水。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.009.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米60.0代谢能/(MJ/kg)11.93豆粕20.0粗蛋白/%16.5鱼粉2.5钙/%2.75骨粉2.5磷/%0.51麸皮4.0高粱5.0石粉4.0预混料2.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 6 000 IU、VB1 0.4 mg、VB2 0.8 mg、VB6 0.48 mg、VD 800 IU、VE 56 IU、VK3 8 mg、锌80 mg、铁70 mg、锰60 mg、铜16 mg、碘0.4 mg、硒0.4 mg。2.营养水平中钙、磷为实测值，其余均为计算值。1.2材料与试剂α-生育酚标准品（纯度≥96%，sigma公司）、维生素E乙酸酯标准品（含量：0.953 g/mL，sigma公司）、维生素E乙酸酯（含量50%，浙江新维普添加剂有限公司）、纯净水（娃哈哈集团有限公司）、无水乙醇（分析纯，天津市汇杭化工科技有限公司）、氢氧化钾（天津市风船化学试剂科技有限公司）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT，国药集团化学试剂有限公司）、抗坏血酸（天津祥瑞鑫化学科技有限公司）、石油醚（沸程30~60 ℃，天津市汇杭化工科技有限公司）、甲醇（色谱纯，默克股份两合公司）；150 mL锥形瓶、250 mL梨形分液漏斗、250 mL圆底蒸发瓶、15 mL离心管以及液相色谱进样瓶。1.3仪器设备1260高效液相色谱仪（安捷伦科技公司）、分液漏斗振荡器（上海皓庄仪器有限公司）、FB223分析天平（上海舜宁恒平科学仪器有限公司）、DHG-9246A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）、DF-101S恒温水浴锅（上海智城分析仪器制造有限公司）、IKA HB10旋转蒸发仪（上海予申仪器有限公司）、KQ-500B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、NFN382蛋白高度测定仪（FHK公司）、QCR蛋壳颜色测定仪（TSS公司）、NFN385蛋型指数测定仪（FNK公司）、NFN380蛋壳厚度测定仪（FNK公司）、罗氏比色扇。1.4样品采集试验第10、20、30 d，每组随机收集35枚鸡蛋，其中20枚用于测定维生素E含量，15枚用于测定蛋品质。1.5测定指标及方法1.5.1鸡蛋中维生素E含量样品前处理参照食品安全国家标准（《食品中维生素A、D、E的测定》，GB 5009.82—2016）进行[9]。在鸡蛋蛋黄样品中加入50%氢氧化钾溶液恒温水浴皂化，石油醚萃取，得到的醚层经水洗至中性，旋转蒸发仪40 ℃水浴蒸干，甲醇溶解定容，过有机滤膜。优化的液相检测条件为：流动相为甲醇∶水=99∶1（体积比）；流速为1.0 mL/min；检测波长为294 nm；柱温为20 ℃；进样量为10 μL；色谱柱为C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。1.5.2蛋品质蛋壳颜色测定仪分别测定蛋壳锐端、钝端、中部的蛋壳颜色，求取平均值。称量鸡蛋重、蛋黄重、蛋清重和蛋壳重等指标，蛋黄比率、蛋清比率及蛋壳比率等指标依次为蛋黄重、蛋清重及蛋壳重占鲜蛋重的百分比。蛋型指数测定仪测定鸡蛋的纵径和横径，纵径和横径之比即为蛋型指数。蛋的相对密度采用浮力法进行测定，通过不同浓度的盐水判断鸡蛋密度。相对密度越大，表示鸡蛋越新鲜，蛋壳越厚实。将两层蛋壳膜去掉，蛋壳厚度测定仪分别测量锐端、钝端和中间的壳厚度，求取平均值。罗氏比色扇的15个蛋黄色泽等级进行比色，等级越高，蛋黄颜色越深。蛋白高度仪读取3个蛋白高度值，取平均数，计算相应的哈夫单位。哈夫单位=100 lg(H－1.7W0.37＋7.57)(1)式中：H为浓蛋白高度（mm）；W为蛋重（g）。1.6数据统计与分析数据采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，LSD法进行组间多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对蛋中维生素E含量的影响（见表2）由表2可知，试验第10、20、30 d时，各试验组鸡蛋中维生素E含量均显著高于对照组（P0.05），且随着日粮添加维生素E乙酸酯浓度的增加，蛋中维生素E含量也随之增加。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.009.T002表2日粮中添加不同浓度维生素E乙酸酯对鸡蛋中维生素E含量的影响组别第10 d第20 d第30 d对照组65.64±2.75c66.95±2.79d67.84±3.77d试验1组130.98±7.53b156.50±11.58c144.21±9.18c试验2组210.86±22.08a204.35±16.07b239.90±13.40b试验3组254.44±25.00a306.77±20.12a323.64±18.61a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。mg/kg2.2日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对第10 d蛋品质的影响（见表3）由表3可知，试验第10 d时，试验3组蛋重和蛋清重显著高于试验1组（P0.05）；试验2组相对密度显著高于对照组（P0.05）；试验1组蛋形指数显著高于其他各组（P0.05），蛋黄颜色和蛋黄比率显著高于对照组和试验3组（P0.05）；各组间蛋黄重、哈夫单位、蛋清比率、蛋壳重、蛋壳厚度、蛋壳颜色、蛋壳比率差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.009.T003表3日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对第10 d蛋品质的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组蛋重/g45.351±0.953ab43.902±1.218b46.665±0.712ab46.932±3.238a相对密度/(g/mL)1.086±0.002b1.088±0.002ab1.091±0.002a1.090±0.002ab蛋型指数1.367±0.018b1.422±0.017a1.336±0.015b1.363±0.020b蛋黄重/g12.979±0.27913.348±0.26913.695±0.18613.413±0.281蛋黄颜色5.733±0.396b7.267±0.358a6.467±0.350ab5.600±0.486b蛋黄比率/%28.611±0.495b30.615±0.743a29.466±0.347ab28.642±0.728b蛋清重/g25.345±0.615ab24.207±0.920b26.022±0.538ab26.473±0.613a哈夫单位90.189±2.41489.516±1.64786.389±1.60484.273±3.213蛋清比率/%55.894±1.15654.960±0.76355.886±0.51156.312±0.611蛋壳重/g5.533±0.1595.627±0.2296.145±0.1926.027±0.201蛋壳厚度/mm0.381±0.0060.323±0.0080.401±0.0060.395±0.007蛋壳颜色50.884±2.57653.273±1.70049.9560±1.90853.847±1.278蛋壳比率/%12.434±0.36112.802±0.34113.178±0.39612.832±0.341注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4、表5与此同。2.3日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对第20 d蛋品质的影响（见表4）由表4可知，第20 d时，试验1组蛋形指数显著高于其他各组（P0.05）；试验2组蛋黄重显著高于对照组和试验1组（P0.05），蛋黄比率显著高于对照组（P0.05），蛋壳厚度显著高于试验1组（P0.05）。各组蛋重、相对密度、蛋黄颜色、蛋清重、哈夫单位、蛋清比率、蛋壳重、蛋壳颜色以及蛋壳比率差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.009.T004表4日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对第20 d蛋品质的影响组别对照组试验1组试验2组试验3组蛋重/g46.068±0.89944.120±0.93644.988±0.61546.038±1.030相对密度/(g/mL)1.084±0.0021.082±0.0021.085±0.0021.083±0.002蛋形指数1.358±0.001b1.420±0.018a1.357±0.018b1.321±0.012b蛋黄重/g13.330±0.276b13.553±0.270b14.563±0.311a13.908±0.377ab蛋黄颜色7.730±0.3006.600±0.6086.670±0.4656.930±0.597蛋黄比率/%29.329±0.889b30.854±0.731ab32.255±0.635a30.422±0.468ab蛋清重/g26.162±0.79624.405±0.73724.263±0.49225.345±0.753哈夫单位85.571±2.41985.652±2.19680.373±2.22586.241±2.174蛋清比率/%57.139±0.93655.260±0.94153.661±0.61855.360±0.657蛋壳重/g5.702±0.1395.549±0.1645.636±0.1355.642±0.171蛋壳厚度/mm0.375±0.006ab0.359±0.009b0.388±0.006a0.377±0.008ab蛋壳颜色49.662±2.51153.067±1.67151.998±1.54753.062±1.149蛋壳比率/%12.404±0.28712.588±0.29312.552±0.32512.250±0.2232.4日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对第30 d蛋品质的影响（见表5）由表5可知，第30 d时，试验1组蛋重、蛋清重和蛋清比率显著低于对照组（P0.05），蛋形指数显著高于试验3组（P0.05）；试验1组和试验2组蛋黄比率显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.009.T005表5日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对第30 d蛋品质的影响组别对照组试验1组试验2组试验3组蛋重/g48.979±1.033a45.844±0.854b47.197±1.055ab46.640±1.008ab相对密度/(g/mL)1.087±0.0011.090±0.0011.089±0.0011.089±0.001蛋形指数1.353±0.020ab1.396±0.016a1.377±0.013ab1.341±0.011b蛋黄重/g14.279±0.39614.145±0.28914.662±0.23114.611±0.235蛋黄颜色7.800±0.3417.270±0.6657.730±0.4087.600±0.496蛋黄比率/%29.178±0.584b30.867±0.370a31.205±0.617a30.167±0.609ab蛋清重/g28.430±0.687a25.546±0.530b27.020±0.829ab26.347±0.793ab哈夫单位82.691±1.66386.722±2.36287.366±1.62987.030±1.327蛋清比率/%58.009±0.506a55.719±0.493b57.116±0.694ab56.371±0.677ab蛋壳重/g5.925±0.1375.963±0.2085.827±0.1756.019±0.221蛋壳厚度/mm0.409±0.0070.404±0.0070.411±0.0060.413±1.241蛋壳颜色48.542±2.24648.818±2.00346.587±1.79249.022±1.241蛋壳比率/%12.127±0.26112.982±0.29812.344±0.23012.893±0.365各组相对密度、蛋黄重、蛋黄颜色、哈夫单位、蛋壳重、蛋壳厚度、蛋壳颜色、蛋壳比率差异不显著（P0.05）。3讨论3.1日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对蛋中维生素E含量的影响日粮中添加维生素E可防止家禽营养不良，提高蛋制品的氧化稳定性，能够为广大消费者提供维生素E来源[1]。Mohiti-Asli等[10]研究表明，日粮中添加α-生育酚可使蛋黄中维生素E升高，且日粮添加水平和蛋中维生素E含量呈线性关系。Grobas等[11]研究发现，α-生育酚补充量与蛋黄中维生素E浓度存在直接关系，当α-生育酚补充量高时，蛋黄中维生素E含量也随之增加。林厦菁等[12]研究表明，提高日粮维生素E添加水平可提高蛋中维生素E的含量。本试验结果同上述研究结果一致，即日粮中添加一定浓度的维生素E乙酸酯可以达到蛋中富集维生素E的目的，进而为富维生素E功能性鸡蛋研发提供参考。3.2日粮添加不同浓度维生素E乙酸酯对蛋品质的影响评价蛋黄品质的主要指标有蛋黄重、蛋黄颜色和蛋黄比率等，蛋黄颜色越深，蛋黄比率越大，说明蛋黄品质越好[13-14]。林厦菁等[12]、刘士杰等[15]、Zhao等[16]研究表明，日粮添加不同水平维生素E对鸡蛋的蛋黄颜色、蛋黄重均无显著影响。本试验结果显示，除第30 d时，试验1组的蛋黄重略低于对照组外，其他所有时间点的各试验组蛋黄重均高于对照组，且试验期内各试验组的蛋黄比率均高于对照组，说明日粮添加维生素E能够增加蛋黄重和蛋黄比率，原因可能为试验在炎热的7—8月进行，蛋鸡日粮中添加一定量的维生素E能够降低蛋鸡的热应激反应，增加蛋鸡的抗氧化功能，进而增加蛋黄中脂质的稳定性，利于蛋黄形成，增加蛋黄重和蛋黄比率。哈夫单位是评价蛋清品质的主要指标，哈夫单位越高，表明鸡蛋越新鲜，蛋清品质越好。研究表明，日粮中添加不同水平维生素E（0、50、100、150 IU/kg）对京红1号蛋鸡哈夫单位无显著影响[15]；日粮添加不同水平维生素E（0、10、250 IU/kg)对40~56周龄蛋鸡的蛋白高度和哈夫单位亦无显著影响[17]；日粮中添加维生素E（0、250、500 mg/kg）对蛋鸡蛋清的哈夫单位也无显著影响[18]。本试验结果与上述结果一致，即日粮添加维生素E对哈夫单位无明显影响。4结论日粮添加维生素E乙酸酯能够增加蛋黄中维生素E含量；日粮添加维生素E乙酸酯具有增加蛋黄重和蛋黄比率的趋势。