家禽的集约化、规模化养殖方式使家禽生长过程中面临氧化应激和疾病的威胁，导致家禽生产性能下降[1]。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成部分，是一种促炎物质，已经在家禽的细菌感染试验中应用[2-3]。LPS或其他应激因素会导致家禽机体抗氧化能力降低，诱导炎症反应发生，表现为动物嗜睡、食欲下降、生长缓慢等症状[4-5]。因此，在家禽的生产中提高家禽的生产性能、抗氧化能力和免疫调节能力具有重要意义。目前，中草药添加剂在家禽生产中应用可以提高家禽抗氧化应激能力。桑黄（Phellinus linteus）因寄生在桑树而得名，是珍贵的药用真菌[6]。子实体为黄褐色，味微苦、性寒。桑黄含有多糖类、黄酮类、酚类、生物碱等活性成分[7]，多糖为桑黄的主要生物活性物质[8]。桑黄多糖具有抑菌、抗炎、降血糖、抗氧化、免疫调节等多种药理活性[9-10]。近年来，桑黄多糖已成为潜在的草药衍生添加剂。但桑黄多糖作为脂多糖诱导蛋鸡的天然抗氧化剂和提高免疫力的研究较少。因此，本试验旨在研究日粮添加天然植物提取物桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的生产性能、血清生化、免疫及抗氧化功能的影响，以期为桑黄多糖在畜牧养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1桑黄多糖的制备桑黄菌丝体粉末购自江西南昌康道生物技术有限公司。通过对亚麻假单胞菌菌株（菌株编号KCTC 6190）进行固态培养和液体深层发酵培养，过滤，干燥，压碎，生产亚麻假单胞菌菌丝体粉末。菌丝体粉末与石油醚回流2次，去除脂质和色素。残留物在空气中干燥24 h，使用前塑料袋密封。碱性提取方法生产亚麻假单胞菌多糖，命名为PL-N[9]。经分析测定，得到PL-N产率为9.31%，总碳水化合物、糖醛酸含量分别为83.76%、16.24%。1.2试验设计试验选取500只238日龄蛋鸡，进行7 d适应性饲养。各组间饲养管理无差异性，适应期和试验期间所有喂养条件均相同。试验随机分4组，每组5个重复，每个重复25只鸡。试验期21 d。对照组（CK组）蛋鸡饲喂基础日粮+生理盐水（SPSS）。试验1组、2组、3组蛋鸡饲喂基础日粮分别添加PL-N+SPSS、LPS、PL-N+LPS。试验分组设计见表1。试验第14、16、18、20 d时，2组和3组蛋鸡腹腔注射500 μg/kg LPS溶液，CK组和3组蛋鸡注射等量SPSS。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T001表1试验分组设计组别试验设计CK组基础日粮+500 μg/kg SPSS1组基础日粮+400 mg/kg PL-N+500 μg/kg SPSS2组基础日粮+500 μg/kg LPS3组基础日粮+400 mg/kg PL-N+500 μg/kg LPS试验基础日粮按照1994年NRC营养需求建议制定，基础日粮组成及营养水平见表2。定期对室内环境清洗和消毒，室内通风和照明，所有蛋鸡均三层笼养。光周期为16 h光照和8 h黑暗。每日9：00、14：00测量室内温度和湿度，室内温度保持在（23±2）℃，相对湿度为(55±10)%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T002表2基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米63.80代谢能/(MJ/kg)11.25豆粕21.90粗蛋白质/%16.11玉米蛋白粉1.60赖氨酸/%0.83石粉9.84蛋氨酸/%0.37磷酸氢钙1.11钙/%3.93氯化钠0.30总磷/%0.69麦麸0.25豆油0.20预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD3 2 500 IU、VE 20 IU、VK 0.50 mg、VB12 0.01 mg、生物素0.15 mg、叶酸0.55 mg、烟酸30 mg、泛酸10 mg、吡哆醇3.5 mg、核黄素3.6 mg、硫胺素1.8 mg、Cu 8 mg、I 0.35 mg、Fe 80 mg、Mn 60 mg、Se 0.30 mg、Zn 80 mg。2.营养水平中粗蛋白质、钙均为实测值，其他均为计算值。1.3测定指标及方法1.3.1生产性能每天记录各组蛋鸡的平均采食量、产蛋率、平均蛋重、料蛋比、破蛋率。产蛋率=总产蛋个数/总蛋鸡数×100%(1)平均蛋重=每组总蛋重/每组鸡蛋数(2)料蛋比=日耗料量/日产蛋总重×100%(3)破蛋率=破总数/产蛋总数×100%(4)试验结束，每组随机收集25枚鸡蛋，每个重复5枚鸡蛋，4 ℃保存（24 h）。使用鸡蛋质量测试仪测定哈夫单位、形状指数、蛋壳厚度、蛋黄颜色及蛋壳强度指标。1.3.2血清生化和免疫功能指标试验结束，每组随机抽取25只蛋鸡，翅静脉收集血样，3 000 r/min离心10 min，上清液储于离心管，-20 °C保存。采用ELISA方法测定血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。试剂盒购自南京奥青生物有限公司，试剂制备及操作步骤参照试剂盒说明书进行。采用全自动生化分析仪测定葡萄糖（GLU）、胆固醇（CHO）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）含量及谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）活性。1.3.3血清抗氧化指标使用试剂盒（南京建城生物工程研究所）测定总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量及过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，按照说明书进行操作。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2010进行整理，SPSS 20.0软件进行One-way ANOVA差异分析，GraphPad Prism 7.0制图。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的生产性能和蛋品质的影响（见表3、表4）由表3可知，与CK组相比，2组、3组蛋鸡的平均日采食量和产蛋率显著降低（P0.05）；与2组相比，1组、3组蛋鸡的平均日采食量和产蛋率显著提高（P0.05）；1组蛋鸡的平均日采食量和产蛋率最高。与CK组相比，2组蛋鸡的破蛋率显著提高（P0.05），1组蛋鸡的破蛋率显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T003表3桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡生产性能的影响项目平均日采食量/[g/(只·d)]产蛋率/%平均蛋重/(g/枚)料蛋比破蛋率/%P值0.0010.0010.1930.7090.001CK组113.81±2.73a89.50±2.39b59.68±1.162.07±0.113.87±0.42b1组114.10±22.44a92.78±1.10a60.18±0.932.04±0.123.33±0.48c2组104.00±2.02c80.47±2.71d60.64±1.512.14±0.154.97±0.28a3组109.46±4.37b84.51±3.62c59.01±0.612.19±0.204.58±0.29a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。由表4可知，与CK组相比，2组蛋鸡的哈夫单位、蛋壳厚度显著降低（P0.05）。与2组相比，1组和3组蛋鸡的哈夫单位、蛋壳厚度显著提高（P0.05）。1组蛋鸡的蛋黄颜色数值最高，为8.20。蛋鸡的蛋形指数各组间无显著差异（P0.05）。研究表明，日粮中添加PL-N可改善LPS诱导蛋鸡的蛋黄颜色。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T004表4桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡蛋品质的影响项目哈夫单位蛋形指数蛋壳厚度/mm蛋黄颜色蛋壳强度/(kg/cm2)P值0.0410.8230.0010.0230.245CK组74.73±4.22ab1.31±0.030.31±0.01b7.80±0.79ab3.58±0.301组80.46±7.49a1.32±0.040.35±0.01a8.20±0.42a3.37±0.412组71.85±5.48b1.33±0.030.29±0.01c7.00±0.67b3.88±0.363组77.50±4.54ab1.32±0.030.34±0.02a7.60±0.84ab3.49±0.422.2桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的血清生化指标、免疫功能的影响（见表5、表6）由表5可知，2组蛋鸡的CHO含量和AST活性显著高于其他组（P0.05）；1组蛋鸡的AST活性显著低于其他组（P0.05）。桑黄多糖对其他血清生化指标未产生显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T005表5桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡血清生化指标的影响项目GLU/(mmol/L)CHO/(mmol/L)TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)AST/(U/L)ALT/(U/L)P值0.9670.0010.3060.2380.4740.0010.502CK组15.23±1.606.64±0.45b51.85±2.3626.15±2.4225.70±1.58196.32±13.58c11.31±1.201组15.09±1.115.78±0.29c49.97±2.3325.02±2.1624.95±0.44146.72±6.49d12.11±1.232组15.52±1.567.51±0.37a49.03±1.4923.40±0.7125.63±1.46247.05±13.09a12.08±1.033组15.44±1.365.70±0.53c50.68±2.4324.31±2.0826.37±1.41210.60±10.25b11.29±0.75由表6可知，与CK组相比，2组蛋鸡的血清IgG、IgA、IL-6、TNF-α含量均显著高于其他组（P0.05）。与2组相比，1组蛋鸡血清的IgG、IgA、IL-6、TNF-α含量均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T006表6桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡血清免疫功能的影响项目IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)IL-6/(ng/L)TNF-α/(ng/L)P值0.0010.0010.4760.0010.001CK组7.35±0.35c3.13±0.45d1.42±0.2612.52±0.34d18.59±0.56b1组6.47±0.31d4.40±0.40c1.70±0.3613.78±0.47c18.62±0.74b2组9.52±0.41a6.55±0.41a1.51±0.4617.67±0.22a22.13±0.84a3组8.55±0.36b5.58±0.31b1.74±0.2915.25±0.67b19.47±0.80b2.3桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的抗氧化指标的影响（见表7）由表7可知，与CK组相比，2组蛋鸡血清T-AOC、CAT、SOD、GSH-Px活性均显著低于其他组（P0.05）；1组和3组蛋鸡血清的MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.010.T007表7桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡抗氧化功能的影响组别T-AOC/(U/mL)MDA/(μmol/L)CAT/(U/mL)SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)P值0.0010.0010.0010.0020.001CK组2.80±0.25b4.21±0.41b17.57±0.28b96.89±14.01b32.12±1.71a1组3.27±0.25a3.66±0.27c20.50±0.32a115.39±11.99a34.00±2.54a2组1.91±0.14d4.75±0.30a12.56±0.31d81.84±9.20b22.59±2.07b3组2.33±0.32c3.15±0.20d16.21±0.36c88.78±7.99b30.90±2.86a3讨论3.1桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的生产性能和蛋品质的影响研究表明，天然植物提取物、中草药多糖能够提高畜禽抗病能力，促进肠道的消化吸收，提高饲料转化率，提高畜禽的生产性能和免疫功能[11]。本研究表明，添加PL-N可以显著提高LPS诱导蛋鸡的平均日采食量和产蛋率，降低LPS诱导蛋鸡的破蛋率。闻治国等[12]研究表明，与对照组相比，脂多糖组蛋鸡产蛋率、总产蛋量和平均日采食量降低，日粮中添加橡胶籽油可以显著提高脂多糖诱导蛋鸡的产蛋率和平均日采食量，能够减缓蛋鸡LPS诱导的产蛋性能下降。李昆[13]研究表明，黑沙蒿水提物能够缓解由LPS引起的肉仔鸡采食量和生长速度的下降。王琳等[14]研究发现，通过饲喂育成期蛋鸡白术多糖能够显著提高蛋鸡的平均日增重和采食量。日粮中添加桑黄多糖能够显著提高蛋鸡采食量和平均日增重，提高机体的生长性能[15]。上述结果均与本研究结果一致，说明桑黄多糖可有效缓解脂多糖诱导对蛋鸡生产性能的影响。品种和日龄是影响蛋品质的关键因素[16]，环境因素和疾病也是影响蛋品质的主要因素。评定蛋鸡蛋品质的主要指标有哈夫单位、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋黄颜色、蛋壳强度等[17]。本研究结果表明，LPS诱导显著降低蛋鸡的哈夫单位和蛋壳厚度，添加PL-N可以显著提高LPS诱导蛋鸡的哈夫单位和蛋壳厚度，说明桑黄多糖对脂多糖改善蛋壳质量有明显效果。添加桑黄多糖可以有效缓解PL-N诱导蛋鸡的蛋黄颜色。本试验中，与对照组相比，桑黄多糖组、桑黄多糖+脂多糖组、脂多糖诱导组蛋鸡的蛋形指数和蛋壳强度均无显著性影响。张海燕等[18]研究表明，日粮添加枸杞多糖组蛋鸡的平均蛋重和蛋壳厚度显著高于对照组。龙彬[19]研究发现，日粮中添加金银花提取物、蓝莓提取物、葡萄籽提取物能够显著提高鸡蛋的哈夫单位。研究表明，蛋鸡日粮中添加中草药添加剂均可改善蛋壳厚度、蛋壳强度及蛋黄颜色，但对蛋形指数无显著影响[20]，与本试验研究结果相似。3.2桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的血清生化指标、免疫功能的影响血清生化指标是反映机体代谢、营养状况和疾病的敏感指标。血液中ALT和AST是反映肝脏功能的重要指标。研究表明，日粮中添加植物提取物，血清中TP、GLU含量和血清ALP活性均略有提高[21]。黄芪多糖能够显著降低产蛋后期蛋鸡血清中TG含量及AST和ALT活性，具有一定的降血脂功能[22]。日粮中添加山黄粉可降低血清ALT和AST活性[16]。本试验中，试验组蛋鸡血清GLU、TP、ALB、GLB含量及ALT活性均无显著影响，LPS诱导使蛋鸡血清CHO含量和AST活性升高，添加PL-N可显著降低LPS诱导蛋鸡血清CHO含量和AST活性，与上述研究结果一致研究表明，LPS刺激动物机体，可使促炎细胞因子过量释放，诱导机体的免疫应答[23-24]。免疫球蛋白是机体免疫系统的重要组成之一，在细胞免疫中起重要作用，能够增加机体免疫力[25]。IL-6是一种功能广泛的多效性细胞因子，IL-6可以调节多种细胞的生长与分化，具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能，在机体的抗感染免疫反应中起重要作用[26]。桑黄多糖能够显著降低LSP诱导细胞炎症反应，其机制主要是通过降低促炎细胞因子（TNF-α、IL-6等）含量和mRNA表达水平，增加抗炎细胞因子（IL-4、IL-10）含量和mRNA表达水平[27]。在对桑黄中提取的蛋白多聚糖研究时发现，100 mg/kg的蛋白多聚糖能够相对增加脾脏和胸腺重量，可使血浆中的免疫球蛋白及其受体上升[28]。因此，桑黄多糖具有一定的免疫调节功能。研究表明，日粮添加桑黄多糖能够显著提高育成期蛋鸡IgA、IgM和IgG含量[15]。闻治国等[12]研究表明，与LPS组相比，橡胶籽油+脂多糖组蛋鸡血液IgA、IL-6和TNF-α含量降低。本研究中，LPS诱导蛋鸡使血清中免疫球蛋白（IgA和IgG）、IL-6、TNF-α含量显著升高，表明LPS诱导蛋鸡产生免疫应答。日粮中添加桑黄多糖显著降低蛋鸡血清中免疫球蛋白（IgA、IgG）、IL-6和TNF-α含量，与上述研究结果一致。研究表明，桑黄多糖可以降低LPS对蛋鸡的免疫应激，提高蛋鸡的免疫功能。3.3桑黄多糖对脂多糖诱导蛋鸡的血清抗氧化性能的影响研究表明，LPS能够诱导动物机体会产生大量的活性氧自由基（ROS），如超氧阴离子自由基、羟基自由基、过氧化氢等[29]。ROS的大量产生破坏机体过氧化和抗氧化之间的平衡，引起抗氧化能力的下降[30]。本研究中，LPS诱导降低蛋鸡的抗氧化能力，蛋鸡血清中的T-AOC及CAT、SOD和GSH-Px活性显著降低，MDA含量显著升高，与Linke等[31]在LPS对肉鸡抗氧化性能影响的研究结果一致。日粮中添加桑黄多糖能够降低LPS对蛋鸡的氧化应激。本试验中，与LPS组相比，桑黄多糖组蛋鸡血清中T-AOC及CAT、SOD和GSH-Px活性显著提高，MDA含量显著降低。Luo等[32]研究桑黄菌丝体多糖（PBMP）的理化性质和体内抗氧化活性，结果发现，灌胃PBMP能够明显且呈剂量依赖增加D-半乳糖诱导衰老小鼠的体内抗氧化酶活性，降低血清和肝脏中MDA含量，说明桑黄多糖可以提高机体的抗氧化能力，也为本研究蛋鸡日粮中添加桑黄多糖缓解LPS引起蛋鸡的氧化损伤提供参考。因此，桑黄多糖可通过增强免疫应激蛋鸡的抗氧化能力，减少ROS和过氧化物的产生，从而缓解氧化应激对机体的损伤。4结论日粮中添加桑黄多糖能够提高脂多糖诱导蛋鸡的生产性能，改善蛋品质，增强机体免疫力和抗氧化活性，对血清生化指标具有一定的改善作用。