长期使用常规化学性饲料添加剂会使细菌产生耐药造成免疫抑制。在动物体内残留的化学性饲料添加剂可对动物机体产生不同程度的毒副作用，从而影响食品安全。中药饲料添加剂具有毒副作用小、无残留的优点。本课题组前期试验表明，大枣多糖能够提高AA肉仔鸡的免疫功能、生长性能、屠宰性能和肉品质[1-2]。研究表明，大枣多糖能够提高150日龄黄羽肉鸡的免疫功能和产蛋性能[3]。本试验研究大枣多糖对118日龄乌鸡免疫功能的影响，为大枣多糖在饲料添加剂中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物118日龄乌鸡购自锦州鸿强牧业有限公司。1.1.2配合饲料组成及营养水平蛋鸡产蛋期的配合饲料（产品标准编号O/DHNJ）购自大成农技（葫芦岛）有限公司，配合饲料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T001表1配合饲料营养水平营养水平含量/%粗蛋白≥16.00粗纤维≤7.00粗灰分≤13.00钙3.00~4.20总磷≥0.50氯化钠0.30~0.80水分≤14.00赖氨酸≥0.90蛋氨酸0.42~0.891.1.3药品及主要试剂大枣多糖购自晨光生物技术有限公司生产（纯度≥90%）。鸡的干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）的试剂盒以及RPMI-1640培养液、胎牛血清、四甲基偶氮唑盐（MTT）、盐酸左旋咪唑均购自北京索莱宝科技有限公司。鸡的新城疫抗体活疫苗（La Sota）和新城疫病毒抗原购自辽宁益康生物股份有限公司。1.2试验设计选用150只、118日龄的母鸡，随机分为5组，每组3个重复，每个重复10只鸡。产蛋期间，KOBA组乌鸡饲喂不添加药物的配合饲料，ZXMZ组乌鸡饲喂添加0.2 g/kg盐酸左旋咪唑的配合饲料，DZDT1组、DZDT2组和DZDT3组乌鸡饲喂分别添加1、2和4 g/kg大枣多糖的配合饲料。乌鸡于7日龄、21日龄和118日龄接种La Sota，笼养，自由采食。试验期80 d。1.3测定指标及方法1.3.1血清免疫指标1.3.1.1NDV抗体效价198日龄时，每组选取20只鸡，每只鸡分别静脉采血1 mL，分离血清，采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验，检测NDV抗体效价，参考宋依等[4]、石蓉[5]、鲁卫红[6]试验方法。1.3.1.2血清中IFN-γ和IL-2的含量198日龄时，各组20只鸡中随机抽取5只，每组3个重复。每只鸡分别静脉采血1 mL，分离血清。使用ELISA检测试剂盒测定鸡血清中IFN-γ和IL-2含量，酶标仪测定570 nm处OD值，参考李贤等[7]试验方法。1.3.1.3血清中IgA、IgG和IgM含量198日龄时，各组20只鸡中随机抽取5只，每组3个重复。每只鸡分别静脉采血1 mL，分离血清，混匀。使用ELISA检测试剂盒测定鸡血清中IgA、IgG和IgM含量，酶标仪测定570 nm处OD值。1.3.2脾免疫指标1.3.2.1脾指数198日龄时，各组20只鸡中随机抽取5只，参照李美莹等[8]、郝璐等[9]试验方法测定脾指数。1.3.2.2脾淋巴细胞悬液制备198日龄时，各组20只鸡中随机抽取5只，制备脾淋巴细胞悬液用于脾淋巴细胞的增殖和细胞因子分泌的检测，参考Yu等[10]、仇真毓等[11]试验方法。1.3.2.3脾淋巴细胞的增殖各组分别设5个重复，使用96孔细胞培养板，参考Yu等[10]、郑小香等[12]试验方法，采用MTT法测定脾淋巴细胞的增殖。1.3.2.4脾淋巴细胞TNF-α和IL-4分泌量各组分别设3个重复，使用ELISA检测试剂盒测定脾淋巴细胞坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL-4）含量，参考Wu等[13]、Song等[14]试验方法。1.4数据统计与分析数据采用SPSS 17.0统计软件进行一维方差分析。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1大枣多糖对血清免疫指标检测结果2.1.1大枣多糖对NDV抗体效价检测结果（见表2）由表2可知，与KOBA组相比，其余各组的NDV抗体效价均极显著增加（P0.01）。与ZXMZ组相比，DZDT1组、DZDT2组和DZDT3组的NDV抗体效价均极显著增加（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T002表2大枣多糖对NDV抗体效价检测结果组别NDV抗体效价KOBA组7.15±0.76CcZXMZ组8.20±0.70BbDZDT1组9.10±0.64AaDZDT2组9.15±0.81AaDZDT3组9.05±0.69Aa注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。log2研究表明，添加大枣多糖能够提高NDV抗体效价，以DZDT2组效果相对最佳。。2.1.2大枣多糖对血清中IFN-γ和IL-2的含量检测结果（见表3）由表3可知，与KOBA组相比，ZXMZ组和DZDT2组的乌鸡血清中IFN-γ含量均极显著升高（P0.01），DZDT1组和DZDT3组乌鸡血清中IFN-γ含量均显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T003表3大枣多糖对血清中IFN-γ和IL-2的含量检测结果组别IFN-γIL-2KOBA组11.36±2.43Bb32.94±3.22BcZXMZ组17.85±2.03Aa48.45±2.40ABabDZDT1组15.93±1.82ABa43.00±5.58ABbDZDT2组18.69±2.00Aa50.36±2.69AaDZDT3组15.86±1.63ABa41.31±1.97Bbng/L与KOBA组相比，DZDT2组乌鸡血清中IL-2含量极显著升高（P0.01），其余各组的血清中IL-2含量均显著升高（P0.05）。研究表明，添加大枣多糖能够提高血清中IFN-γ、IL-2的含量，DZDT2组含量相对最高。2.1.3大枣多糖对血清中IgA、IgG和IgM含量检测结果（见表4）由表4可知，与KOBA组相比，DZDT2组乌鸡血清中IgA含量极显著增加（P0.01），ZXMZ组、DZDT1组和DZDT3组乌鸡血清中IgA含量均显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T004表4大枣多糖对血清中IgA、IgG和IgM含量检测结果组别IgAIgGIgMKOBA组1 952.47±269.02Bb2 225.89±307.29Bc598.64±47.50CcZXMZ组2 638.13±255.06ABa3 592.28±238.41Aab881.83±71.03ABabDZDT1组2 552.30±180.25ABa3 178.95±383.89ABb810.16±31.74ABbDZDT2组2 848.97±215.14Aa4 073.94±464.59Aa919.00±57.99AaDZDT3组2 449.63±387.45ABa3 013.53±567.07ABb752.41±64.08Bbng/L与KOBA组相比，ZXMZ组、DZDT2组乌鸡血清中IgG含量极显著升高（P0.01），DZDT1组和DZDT3组乌鸡血清中IgG含量显著升高（P0.05）。与KOBA组相比，其余各组乌鸡血清中IgM含量均极显著升高（P0.01）。研究表明，添加大枣多糖能够提高乌鸡血清中IgA、IgG、IgM的含量，以DZDT2组含量相对最高。2.2大枣多糖对脾免疫指标检测结果2.2.1大枣多糖对乌鸡脾指数的影响（见表5）由表5可知，与KOBA组相比，试验各组乌鸡的脾指数均极显著升高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T005表5大枣多糖对乌鸡脾指数的影响组别脾指数KOBA组1.79±0.17BcZXMZ组2.44±0.20AbDZDT1组2.67±0.22AabDZDT2组2.77±0.32AaDZDT3组2.60±0.13Aab研究表明，添加大枣多糖能够提高脾指数，以DZDT2组脾指数相对最高。2.2.2大枣多糖对乌鸡脾淋巴细胞增殖的影响（见表6）由表6可知，与KOBA组相比，各组乌鸡的淋巴细胞刺激指数均极显著升高（P0.01）。研究表明，添加大枣多糖能够促进脾淋巴细胞增殖，DZDT2组效果相对最佳。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T006表6大枣多糖对乌鸡脾淋巴细胞增殖的影响组别淋巴细胞刺激指数KOBA组1.00±0.00CcZXMZ组1.66±0.20BbDZDT1组1.81±0.23BbDZDT2组2.20±0.17AaDZDT3组1.66±0.11Bb2.2.3大枣多糖对乌鸡脾淋巴细胞TNF-α和IL-4分泌的影响（见表7）由表7可知，与KOBA组相比，各组乌鸡的脾淋巴细胞TNF-α分泌极显著升高（P0.01）。研究表明，添加大枣多糖能够促进乌鸡脾淋巴细胞TNF-α分泌，以DZDT2组效果相对最佳。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.009.T007表7大枣多糖对乌鸡脾淋巴细胞TNF-α和IL-4分泌的影响组别TNF-αIL-4KOBA组203.84±21.63Bc25.95±2.93CdZXMZ组324.83±31.77Aab41.73±5.13BbDZDT1组290.88±17.60Ab33.26±2.34BCcDZDT2组345.81±31.49Aa53.23±3.90AaDZDT3组279.77±20.48Ab32.26±2.18Ccng/L与KOBA组相比，ZXMZ组和DZDT2组的脾淋巴细胞IL-4分泌均极显著上升（P0.01），DZDT1组和DZDT3组乌鸡的脾淋巴细胞IL-4分泌均显著上升（P0.05）。研究表明，添加大枣多糖能够促进脾淋巴细胞IL-4分泌，以DZDT2组效果相对最佳。3讨论脾组织结构包括白髓和红髓。白髓包括动脉周围淋巴鞘、脾小结和边缘区，动脉周围淋巴鞘主要由密集T细胞构成，脾小结主要由B细胞构成，边缘区含有B细胞和T细胞。红髓包括脾索和脾窦，脾索的淋巴细胞主要是B细胞。血清中淋巴细胞包括B细胞和T细胞，通过边缘区转移至动脉周围淋巴鞘、脾小结和红髓[15]。Zou等[16]研究表明，大枣多糖中的酸性多糖能够提高小鼠免疫器官指数，增强巨噬细胞的吞噬功能。李凤娇等[17]研究显示，大枣多糖能够促进脾淋巴细胞增殖，促进细胞因子分泌及mRNA表达。苗明三等[18]研究发现，大枣多糖能够抑制胸腺和脾的萎缩。王中华等[19]、赵光耀等[20]、王留等[21]在肉仔鸡基础日粮中添加0.5、1.0和1.5 g/kg大枣多糖，结果表明，大枣多糖能够提高肉仔鸡的免疫器官指数和血清中免疫球蛋白含量。本试验在118日龄乌鸡基础日粮中添加1、2和4 g/kg大枣多糖，结果发现，大枣多糖能够提高NDV抗体效价，提高血清中细胞因子含量，促进IgA、IgG和IgM抗体的产生，提高脾指数、脾淋巴细胞刺激指数和细胞因子分泌。大枣多糖可通过激活脾动脉周围淋巴鞘的T细胞，使T细胞增殖，动脉周围淋巴鞘增厚；可以通过激活脾小结的B细胞，使B细胞增殖，脾小结增生，促进脾淋巴细胞增殖，提高脾重量，以达到提高脾指数的效果。大枣多糖可以激活血清中的B细胞，促进NDV抗体和IgA、IgG和IgM抗体的产生，实现机体的体液免疫。大枣多糖可以激活血清中的淋巴细胞和脾淋巴细胞，激活的淋巴细胞分泌TNF-α和IL-4，IFN-γ和IL-2细胞因子，调节机体的细胞免疫和体液免疫。4结论大枣多糖能够促进血清中NDV抗体、IgA、IgG和IgM的产生，IFN-γ和IL-2的分泌，提高脾指数、脾淋巴细胞刺激指数、促进脾淋巴细胞TNF-α和IL-4的分泌，从而提高机体的免疫功能。本试验条件下，大枣多糖添加量为2 g/kg时效果最佳。