通信作何：通信作者:韩雪蕾，博士，副教授。牛磺酸因分离自公牛胆汁而得名[1]，以游离形式存在于机体组织和细胞中，对机体生理机能具有重要影响，如在生殖系统、呼吸系统、体循环系统以及神经系统中均具有重要的功能[2-4]。牛磺酸用途广泛，可食用、入药，也可作为饲料添加剂[5-6]。鲤鱼饵料中动物蛋白主要来自鱼粉。据FAO统计表明，近20年世界鱼粉产量呈下降趋势[7]，鱼粉的可用性受限。因此，研究鲤鱼的低蛋白饵料具有重要意义。本试验探讨低蛋白日粮添加牛磺酸对黄河鲤鱼（Cyprinus carpio）生长性能、鱼体成分及消化酶活性的影响，为黄河鲤鱼低蛋白饵料的开发、利用以及降低饲料成本提供参考。1材料与方法1.1试验设计选取360尾遗传背景一致、体质健康、规格相近、体重110~130 g的黄河鲤鱼，随机分到18个400 L水箱，每组3箱，试验分组情况见表1。放入前以0.5% NaCl浸泡15 min。预试期10 d，正式试验期45 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T001表1试验分组情况组别数量/尾蛋白水平/%牛磺酸/%试验Ⅰ组（对照组）30350试验Ⅱ组30250试验Ⅲ组30250.3试验Ⅳ组30250.6试验Ⅴ组30250.9试验Ⅵ组30251.2准备4个600 L的蓄水水箱，蓄满水后加热至26 ℃，经24 h曝气。每个水箱均安装气泵，24 h工作，蓄水箱状态见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T002表2蓄水水箱状态项目数值温度/℃25pH值7.5溶氧/(mg/L)5.1NH4+/(mg/L)0.02亚硝酸盐/(mg/L)0.11.2试验日粮对照组鲤鱼投喂粗蛋白含量为35%的基础饵料，试验组鲤鱼投喂粗蛋白含量为25%的基础饵料，饵料购自河南大德饲料科技有限公司，其营养水平见表3。试验基础饵料原料粉碎后，按表1的比例添加牛磺酸，混匀制粒烘干，粒径为2.5 mm。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T003表3饵料营养水平项目对照组试验组粗蛋白35.025.0粗纤维7.015.0粗灰分12.012.0钙0.4~3.00.4~3.0总磷0.50.5NaCl0.3~1.00.3~1.0Lay1.91.9水分12.012.0牛磺酸00.0~1.2%1.3饲养管理每日9：00、14：00和18：00投饵，日投饵量占鱼体重的2%~3%，每次投饵时间25~30 min。投饵结束1 h，采用虹吸法将残饵和粪便去除，每周至少对水箱中水体消毒1次，以降低水体污染概率。每日早、晚投饵前检测水温、溶氧和氨氮，若出现异常及时调整，确保水质环境良好。1.4样品采集饲养试验结束次日清晨，记录体长、体重；采集尾静脉血液，静置2 h，2 500 r/min离心，取上清，-20 ℃保存。采血的黄河鲤鱼解剖，取出肝脏和全肠，使用生理盐水对肝脏和肠内容物进行清洗，吸干水，称重，液态氮中速冻，-80 ℃保存。随机取5尾鱼，处死，烘干测定全鱼水分含量，留样保存。1.5测定指标及方法饲养试验结束，对黄河鲤鱼体长和重量进行测量，记录数据。生长性能包括增重率、肝指数、肥满度和饵料系数。增重率=(平均末重-平均初重)/平均初重×100% (1)饵料系数=尾均摄食量/尾均增重(2)肝指数=肝脏重/鱼终末体重×100%(3)肥满度=鱼体重/鱼体长3×100%(4)体成分参照国标方法进行测定：参考GB/T 6435—2006对水分进行测定，采用凯氏定氮法（GB/T 6432—1994）测定粗蛋白含量，采用索式乙醚抽提法（GB/T 6433—2006）进行测定粗脂肪，粗灰分含量测定采用550℃灼烧至恒重法（GB/T 6438—2007）。全肠和肝脏中加入磷酸缓冲液（4 ℃ pH值7.5，0.2 g/L）匀浆，12 000 r/min 4 ℃离心15 min，取上清液-20 ℃保存。消化酶、甘油三酯、超氧化物歧化酶和胆固醇含量按照说明书步骤进行。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 26.0软件进行分析。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼生长性能的影响（见表4）由表4可知，对照组和试验Ⅴ组鲤鱼的增重率显著高于其他各组（P0.05），且试验组增重率随添加量的增加呈先增后减的趋势；其中试验Ⅳ组显著高于试验Ⅱ组、试验Ⅲ组与试验Ⅵ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T004表4低蛋白日粮添加牛磺酸对黄河鲤鱼生长性能的影响组别增重率/%饵料系数肝指数/%肥满度/(g/m3)试验Ⅰ组（对照组）83.00±0.02a1.71±0.01c1.50±0.091.85±0.22试验Ⅱ组64.00±0.03c2.25±0.01a1.19±0.311.49±0.37试验Ⅲ组68.00±0.01c1.94±0.01ab1.25±0.111.64±0.07试验Ⅳ组77.00±0.04b1.89±0.01ab1.36±0.111.68±0.02试验Ⅴ组80.00±0.03a1.85±0.02b1.30±0.091.74±0.12试验Ⅵ组64.00±0.08c1.93±0.02ab1.33±0.081.72±0.06注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。各试验组鲤鱼的饵料系数均显著高于对照组（P0.05），且试验Ⅴ组显著低于试验Ⅱ组（P0.05），显著高于对照组（P0.05）。对照组鲤鱼的肝指数指标最高，随着牛磺酸添加量的增大，各试验组鲤鱼的肝指数逐渐上升，且均低于对照组，但各组差异均不显著（P0.05）。对照组鲤鱼的肥满度最大，试验Ⅱ组最小，各试验组鲤鱼的肥满度随着牛磺酸添加量增大逐渐上升，但各组间差异均不显著（P0.05）。2.2低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼体成分的影响（见表5）由表5可知，试验Ⅱ组、Ⅲ组鲤鱼的粗蛋白含量均显著低于对照组（P0.05），试验Ⅳ组显著高于试验Ⅱ组和试验Ⅲ组（P0.05）。试验Ⅱ组鲤鱼体内粗脂肪含量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T005表5低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼体成分的影响组别水分粗蛋白粗脂肪粗灰分试验Ⅰ组（对照组）77.36±5.4918.52±0.50a1.56±0.21b1.22±0.04试验Ⅱ组77.12±3.7616.44±0.38b1.95±0.21a1.24±0.01试验Ⅲ组76.60±3.4316.60±0.23b1.62±0.02ab1.24±0.03试验Ⅳ组76.92±5.1918.02±0.43a1.39±0.06b1.23±0.04试验Ⅴ组76.56±4.5417.30±0.50ab1.68±0.05ab1.24±0.22试验Ⅵ组77.10±5.8817.34±0.84ab1.65±0.01ab1.22±0.31%2.3低蛋白饵粮添加牛磺酸对黄河鲤鱼胆固醇、甘油三酯的含量和超氧化物歧化酶活性的影响（见表6）由表6可知，各试验组鲤鱼的肝胆固醇含量随牛磺酸添加量的增加，呈先降后升的趋势。试验Ⅳ组、试验Ⅴ组、试验Ⅵ组的鲤鱼胆固醇含量均显著低于对照组（P0.05）。各试验组鲤鱼的血清胆固醇含量随牛磺酸添加量的增加，呈现先降低后增加的趋势，试验Ⅴ组显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T006表6低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼胆固醇、甘油三酯的含量及超氧化物歧化酶活性的影响组别肝胆固醇/(mmol/g prot)血清胆固醇/(mmol/L)肝甘油三酯/(mmol/g prot)血清甘油三酯/(mmol/L)肝超氧化物歧化酶活性/(U/mg prot)血清超氧化物歧化酶活性/(U/mL)试验Ⅰ组（对照组）1.96±0.02a4.11±0.13a1.46±0.02a1.35±0.24151.55±6.89a201.76±13.86a试验Ⅱ组1.77±0.14a4.47±0.24a1.12±0.27ab1.44±0.1585.32±5.04c113.87± 11.34c试验Ⅲ组1.36±0.05ab3.31±0.12ab1.03±0.03bc1.59±0.20114.04±3.03b135.36±9.51bc试验Ⅳ组1.13±0.04bc2.99±0.23b0.49±0.05c1.42±0.45150.14±4.30a181.63±10.21ab试验Ⅴ组0.90±0.02c2.71±0.22b0.67±0.04c1.41±0.36160.55±5.09a210.10±8.33a试验Ⅵ组1.10±0.02bc3.19±0.26bc0.79±0.03bc1.48±0.37118.83±8.61b155.36±9.85ab除试验Ⅱ组外，其余试验组鲤鱼的肝甘油三酯含量均显著低于对照组（P0.05）。各试验组的血清甘油三酯含量均高于对照组，但差异不显著（P0.05）。随着牛磺酸添加量增加，鲤鱼肝超氧化物歧化酶活性呈先升后降的趋势，以试验Ⅴ组最高，试验Ⅳ组、试验Ⅴ组显著高于其他试验组（P0.05）。随着牛磺酸添加量的增加，鲤鱼血清超氧化物歧化酶活性的变化趋势与肝超氧化物歧化酶活性变化趋势相同。2.4低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼消化酶活性的影响（见表7）由表7可知，各组鲤鱼的胰淀粉酶活性差异不显著（P0.05）。各试验组鲤鱼的脂肪酶活性随牛磺酸添加量的增加，呈升高趋势，试验Ⅴ组和试验Ⅵ组高于其他试验组，但与对照组相比差异不显著（P0.05）。各组鲤鱼的肠、胰蛋白酶活性均显著低于对照组（P0.05），且均以试验Ⅴ组最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.011.T007表7低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼消化酶活性的影响组别胰淀粉酶肠淀粉酶胰脂肪酶肠脂肪酶胰蛋白酶肠蛋白酶试验Ⅰ组（对照组）14.32±0.8629.37±1.1034.81±4.17a37.81±4.34b173.84±4.97a252.78±6.21a试验Ⅱ组14.24±0.5429.26±1.3720.78±2.31c24.67±0.71c67.76±6.64c111.93±5.33b试验Ⅲ组15.95±0.7730.96±1.4122.08±2.60bc29.06±3.12b128.03±4.50b138.79±7.91b试验Ⅳ组16.14±0.9431.73±0.9226.81±2.33bc30.72±3.27b138.03±4.53b142.07±6.70b试验Ⅴ组16.51±1.1531.24±1.4928.98±2.21ab38.76±3.63a143.59±4.74b144.98±6.42b试验Ⅵ组16.29±0.9630.91±1.0831.68±3.34a39.65±3.92a141.23±6.71b144.30±8.32bU/g3讨论3.1低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼生长性能的影响本试验表明，试验Ⅱ组黄河鲤鱼的增重率、肝指数和肥满度低于对照组，饵料系数显著升高。结果与饵料中缺乏牛磺酸导致黄鳝（Monopterus albus）[8]和草鱼（Ctenopharyngodon idellus）[9]生长性能下降和饵料系数升高的结果相似，可能是饵料中牛磺酸含量下降，无法满足黄河鲤鱼的生长需要，导致氨基酸（AA）不平衡，降低AA代谢水平，进而使黄河鲤鱼的生长性能下降。肠道消化酶、钠钾ATP酶、碱性磷酸酶和肌酸激酶分别参与营养物质的消化、吸收、跨膜运输以及为营养物质吸收提供能量过程[10]。关于牛磺酸对鱼类生长性能影响的研究相对较少。研究发现，分别将1.4%、0.2%的牛磺酸加入鱼饵料中可促使海水鱼发育[11-13]。罗莉等[14]研究发现，在草鱼饵料中添加牛磺酸，可提高生长性能，降低饵料系数。而斑点叉尾鮰幼鱼日粮中添加牛磺酸，对生长无促进效果，成活率和饵料系数相比对照组无显著差异[15]。本研究发现，对增重率，试验Ⅱ组显著低于试验Ⅴ组和试验Ⅳ组；表明牛磺酸具有诱食作用，可提高黄河鲤鱼的采食量，提高增重率。添加牛磺酸能够降低饵料系数。牛磺酸能够促进黄河鲤鱼体内酶活性，提高消化和代谢能力[14,16]。肝指数在添加牛磺酸后有所提高，可能是提高肝脏多胺含量，多胺的功能是促进细胞增殖[17-18]。3.2低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼体成分的影响在肉鸡饲料中添加牛磺酸可增加粗蛋白、减少粗脂肪含量[19]。在鱼类应用研究方面，饵料中添加牛磺酸，可增加草鱼和大菱鲆的体蛋白和体脂肪，降低虹鳟和大西洋鲑体脂肪[20-23]。牛磺酸在动物脂类代谢中具有重要作用，鱼类肝脏中，牛磺酸是形成胆汁酸的重要物质，胆汁酸除可促进脂肪性维生素和脂肪的消化吸收，还可加快胆固醇排出。饵料中添加牛磺酸可提高鲤鱼血清甲状腺激素，提高蛋白质合成，可能是由于牛磺酸提高鱼体粗蛋白含量导致。本试验结果表明，当饵料中添加0.6%牛磺酸时，黄河鲤鱼体粗蛋白含量最高，原因是牛磺酸可由甲硫氨酸、半胱氨酸和L-半胱氨酸合成，外源性牛磺酸可减少体内合成牛磺酸，使更多的含硫AA参与蛋白质合成，提升蛋白质利用率。牛磺酸参与合成胆汁酸，鱼类脂肪的合成以及代谢活动受到胆汁酸的促进作用[24]。本试验结果表明，饵料中加入将0.6%的牛磺酸，鱼体的粗脂肪成分量明显下降，可能是因为除合成胆汁酸外，牛磺酸还可参与其他生物途径[25-26]。牛磺酸对动物脂类代谢的影响可能随不同环境及动物种类等而有所差异[27-28]。3.3低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼胆固醇、甘油三酯的含量和超氧化物歧化酶活性的影响胆固醇是机体重要的类固醇类化合物，能够促进胆汁酸、维生素D等的合成[29]。过多摄入胆固醇，可能导致动脉硬化、心血管疾病发生。因此，降低鱼肉胆固醇含量有利于机体的健康[30]。机体需要的大部分胆固醇可由肝脏合成后转运到特定组织。本试验结果发现，在黄河鲤鱼低蛋白饵料中添加适量牛磺酸可降低胆固醇和甘油三酯含量，与张冬等[31]、冀建军等[32]研究结果相似，表明饵料中添加牛磺酸可影响动物的脂质代谢，降低血清甘油三酯和总胆固醇水平。超氧化物歧化酶是一种含铜蛋白质，可平衡机体的O2+。研究表明，牛磺酸会影响动物机体抗氧化功能[33-34]。本试验中，肝和血清中超氧化物歧化酶活性在试验Ⅴ组最高，可能是因为牛磺酸可维持机体氧化与抗氧化的动态平衡，阻止过多的O2+攻击机体的生物膜，提高超氧化物歧化酶活力，增强机体抗氧化能力。3.4低蛋白饵料添加牛磺酸对黄河鲤鱼消化酶活性的影响各试验组淀粉酶活性较高，且淀粉酶活性随牛磺酸添加量的增加而增加，可能是在酸性条件下淀粉酶活性较高，牛磺酸可提高饲料酸度，从而提高淀粉酶活性[35]。低蛋白饵料组胰脂肪酶和肠脂肪酶的活力显著低于对照组，随着牛磺酸添加量增加，试验组脂肪酶的活力升高，当添加量为1.2%时，脂肪酶活力最高，表明饵料中添加牛磺酸可增强水产动物脂肪酶活力，促进脂肪消化、吸收和代谢的作用。鱼类低蛋白饵料中牛磺酸水平对蛋白酶活性的影响研究较少。本试验中，低蛋白饵料中胰蛋白酶和肠蛋白酶活性显著低于对照组，可能是由于黄河鲤鱼摄入的蛋白质含量下降所导致[36]。但随着饵料中牛磺酸水平的提高，蛋白酶活性逐渐增大。4结论低蛋白饵料（25%）添加适量牛磺酸可提高黄河鲤鱼脂肪酶、蛋白酶活性，促进蛋白质合成和脂肪分解、增强机体抗氧化能力，从而提高生长性能，建议牛磺酸适宜添加量为0.6%~0.9%。