贵州的农作物秸秆以水稻、玉米和油菜秸秆为主，占秸秆总量的75%以上，秸秆饲料化利用率在30%以上[1]。玉米秸秆是一种常用于饲喂牛、羊等反刍动物的生物性资源[2]，在贵州地区玉米秸秆收获后一般直接饲喂。但玉米秸秆粗蛋白含量低、粗纤维含量高、不易被家畜消化利用的木质素含量较高、适口性较差、家畜采食率低。紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是一种营养价值较高、适口性较好的优质牧草，在多雨潮湿的贵州地区，紫花苜蓿不适合生产干草利用。因此，青贮加工是紫花苜蓿贮存的重要方法[3]。紫花苜蓿缓冲能较高、含糖量低，单独青贮不易成功。研究表明，通过混合青贮可改善紫花苜蓿青贮发酵品质[4-5]。Contreras-Govea等[6]将蔓生菜豆与玉米混合青贮，结果发现，青贮饲料粗蛋白质含量增加；顾雪莹等[7]、阴法庭等[8]、尤思涵等[9]分别研究全株玉米与秣食豆、饲料油菜与玉米秸秆、黑麦草与高丹草混合青贮，均认为混合青贮比单独青贮的发酵品质好。本试验以贵州地区为例，将摘掉果穗后的鲜玉米秸秆与紫花苜蓿不同比例混合青贮，探讨不同混合处理对青贮饲料营养价值和发酵品质的影响，筛选适宜的混合比例，以期为解决玉米秸秆与紫花苜蓿单独青贮存在问题提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验选用的青贮原料紫花苜蓿（Medicago sativa L.）和玉米（Zea mays L.）种植于贵州关岭县永宁镇。取样时玉米秸秆为摘掉果穗后的茎秆，绿色叶片保留30%左右，紫花苜蓿处于盛花期。青贮原料主要营养成分见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.018.T001表1青贮原料主要营养成分项目紫花苜蓿玉米秸秆干物质27.94±0.4130.77±1.02粗蛋白15.54±0.275.06±0.13粗脂肪2.47±0.101.11±0.09粗灰分7.13±0.046.20±0.03中性洗涤纤维46.55±0.7359.42±0.57酸性洗涤纤维35.41±0.2631.83±0.61水溶性碳水化合物6.96±0.0611.27±0.32%1.2试验设计试验设置7个组，每组设3个重复。各组分别为：80%玉米秸秆和20%紫花苜蓿（C80A20）、70%玉米秸秆和30%紫花苜蓿（C70A30）、60%玉米秸秆和40%紫花苜蓿（C60A40）、50%玉米秸秆和50%紫花苜蓿（C50A50）、40%玉米秸秆和60%紫花苜蓿（C40A60）、30%玉米秸秆和70%紫花苜蓿（C30A70）、100%紫花苜蓿（A100）。1.3青贮饲料加工方法采用袋装青贮法，将刈割后的紫花苜蓿和玉米秸秆切短至1~3 cm左右，充分混匀，按照试验设计混合比例称取鲜样约500 g装入15 cm×20 cm的专用青贮袋，真空密封，自然发酵。1.4测定指标及方法1.4.1营养成分分析鲜草样品在电热干燥箱105 ℃杀青10 min，65 ℃条件下烘干至恒重，测定干物质（DM）含量。样品烘干后粉碎通过1 mm筛，用于测定相应营养成分，粗蛋白质（CP）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）和水溶性碳水化合物（WSC）含量测定方法参照张丽英[10]的方法。中性洗涤纤维（NDF）参照国标（GB/T 20806—2006）[11]测定；酸性洗涤纤维（ADF）参照农业标准（NY/T 1459—2007）[12]测定。1.4.2青贮发酵品质分析青贮60 d，打开青贮袋，青贮饲料样品充分混匀，称取70 g青贮饲料置于300 mL锥形瓶，加入140 g去离子水，4 ℃冰箱内浸提24 h，漏斗过滤，收集滤液用于测定pH值和有机酸。使用pH计测定pH值；有机酸采用高效气相色谱仪测定，包括乳酸（LA）、乙酸（AA）、丙酸（PA）和丁酸（BA），挥发性脂肪酸（VFA）为AA、PA和BA之和。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA）分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1玉米秸秆和紫花苜蓿不同比例混合青贮营养成分分析（见表2）由表2可知，青贮60 d，随着紫花苜蓿比例的增加，DM含量呈缓慢降低趋势，当添加比例达到60%以上时，DM含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.018.T002表2玉米秸秆和紫花苜蓿不同比例混合青贮营养成分分析组别DMCPEEAshWSCADFNDFC80A2030.20±0.73a8.19±0.16g1.32±0.00d5.73±0.02e3.35±0.04a38.56±0.45b56.00±0.23aC70A3029.92±0.59ab9.31±0.07f1.43±0.09d6.25±0.04d3.24±0.06b38.06±0.63bc55.73±0.66aC60A4029.64±0.45abc11.03±0.19e2.12±0.15c6.50±0.08c3.10±0.01c37.53±0.52bc51.52±0.37bC50A5029.36±0.30abc11.87±0.02d2.18±0.00bc6.58±0.06c2.89±0.03d37.33±0.04c50.02±0.50cC40A6029.07±0.16bc13.07±0.02c2.34±0.01b6.59±0.01c2.87±0.08d37.25±0.27c49.34±0.33cC30A7028.79±0.02cd13.64±0.07b2.30±0.03bc6.96±0.06b2.57±0.04e41.31±0.20a49.20±0.14cA10027.94±0.41d16.17±0.04a2.92±0.13a8.28±0.01a2.48±0.02e40.47±0.60a44.87±0.88d注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%随着紫花苜蓿比例的增加，CP含量呈显著上升趋势（P0.05），但WSC含量呈现相反的变化趋势，含量逐渐降低（P0.05），A100组的WSC含量比C80A20组显著降低了25.97%。EE和Ash含量随紫花苜蓿含量升高呈逐渐增加的趋势，A100组的EE和Ash含量最高，分别为2.92%和8.28%，C60A40、C50A50和C40A60组的Ash含量差异不显著（P0.05）。ADF含量随着紫花苜蓿含量升高呈先降低后增加的趋势，C50A50和C40A60组的ADF含量显著低于C80A20、C30A70和A100组（P0.05）。NDF含量随着紫花苜蓿含量升高而逐渐降低，对照组A100的NDF含量显著低于其他各组（P0.05），但C50A50、C40A60和C30A70组NDF含量差异不显著（P＞0.05）。2.2玉米秸秆和紫花苜蓿不同比例混合青贮发酵品质分析（见表3）由表3可知，青贮60 d后，随紫花苜蓿比例增加，C30A70和A100组pH值显著增加（P0.05），但C60A40、C50A50和C40A60组pH值差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.07.018.T003表3玉米秸秆和紫花苜蓿不同比例混合青贮发酵品质分析组别pH值LA/(g/kg DM)AA/(g/kg DM)PA/(g/kg DM)BA/(g/kg DM)VFA/(g/kg DM)LA/AAC80A203.69±0.01e57.61±4.30a19.38±0.19c0.78±0.05bc0.00±0.00c20.16±0.14c2.97±0.25aC70A303.82±0.03d58.31±3.82a19.41±0.71c0.80±0.02ab0.00±0.00c20.21±0.72c3.00±0.09aC60A404.02±0.06c49.99±1.86abc19.29±0.48c0.74±0.01bc0.00±0.00c20.03±0.49c2.59±0.16abC50A504.04±0.01c52.91±0.18ab21.08±0.97b0.79±0.01ab0.00±0.00c21.87±0.98b2.51±0.12bC40A604.08±0.01c45.30±3.45bc20.78±0.27bc0.70±0.02c0.00±0.00c21.48±0.26bc2.18±0.20bcC30A704.37±0.03b43.76±4.87c21.29±0.04b0.78±0.05abc0.36±0.05b22.43±0.04b2.06±0.23cA1005.02±0.04a28.58±4.28d23.20±1.05a0.86±0.04a2.16±0.11a26.22±0.90a1.23±0.13d各处理组的LA含量随着紫花苜蓿比例的增加呈下降趋势，A100组的LA含量显著低于其他各组（P0.05）。随着紫花苜蓿比例增加，各组AA含量呈上升趋势，C50A50、C40A60和C30A70组AA含量差异不显著（P0.05），A100组AA含量最高，显著高于其他各组（P0.05）。因此，各组LA/AA值随着紫花苜蓿比例的增加呈降低趋势，A100组LA/AA值显著低于其他各组（P0.05）。各组均有少量PA产生，PA含量差异较小；当紫花苜蓿混合比例低于60%时，各处理组中均无BA产生，C30A70和A100组有少量BA产生，且A100组BA含量显著高于C30A70组（P0.05）。各组VFA含量随着紫花苜蓿比例的增加呈上升趋势，C50A50、C40A60和C30A70组VFA含量差异不显著（P0.05），对照组A100VFA含量显著高于其他各组（P0.05）。3讨论3.1玉米秸秆和紫花苜蓿混合青贮对营养品质的影响青贮原料的含水量、含糖量及缓冲能是影响青贮能否发酵成功的重要因素[13-15]。部分含水量和缓冲能较高、含糖量较低的饲草单独青贮不易取得成功，但通过混合青贮能够起优势互补的作用，禾本科牧草和豆科牧草混合青贮是常见的混合青贮模式[5]。孙小龙等[16]研究苜蓿和玉米秸秆混合青贮，结果表明，混合青贮效果好于单独青贮，不仅可以提高营养价值和发酵品质，还能够解决玉米秸秆直接利用营养价值低以及紫花苜蓿不易调制优质青贮的问题。本试验中，玉米秸秆的干物质和水溶性碳水化合物含量相对较高；当玉米秸秆比例达到40%时，与对照组紫花苜蓿单独青贮相比，干物质和水溶性碳水化合物含量显著增加，表明紫花苜蓿与玉米秸秆混合青贮能够有效增加干物质含量、降低缓冲能，水溶性碳水化合物含量增加弥补紫花苜蓿青贮发酵底物不足的问题，促进乳酸菌发酵产生足够数量的乳酸，保证青贮成功。青贮饲料的粗蛋白质含量是评价营养价值的重要指标，中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的含量能够反映反刍动物对粗饲料的消化利用情况，酸性洗涤纤维含量越高，表明难以被反刍动物消化利用的纤维素和木质素成分含量较多，青贮饲料质量越差[17-18]。本试验中，随着玉米秸秆比例的增加，粗蛋白含量显著减少，与青贮原料紫花苜蓿粗蛋白含量高而玉米秸秆粗蛋白含量低有密切关系。中性洗涤纤维含量逐渐增加，酸性洗涤纤维含量呈先降低后增加的趋势，说明紫花苜蓿青贮中添加玉米秸秆可提高青贮品质，且以C50A50和C40A60组的效果相对较好。柳茜等[19]、辛鹏程等[20]研究表明，紫花苜蓿与全株玉米混合青贮建议以3∶7或者4∶6的混合比例较为适宜。本研究中，随着玉米秸秆比例的加大，中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的含量上升，影响青贮饲料的消化率。因此，适当控制玉米秸秆添加比例对青贮饲料营养价值非常重要。3.2玉米秸秆和紫花苜蓿混合青贮对发酵品质的影响青贮饲料的pH值和丁酸含量是反映青贮饲料发酵品质的指标[18,21]。一般认为，pH值降到4.2以下、丁酸含量低于2.0 g/kg DM时，青贮饲料能够发酵成功且青贮品质较好[22-23]。本试验中，青贮60 d后，当紫花苜蓿比例低于60%时，pH值均成功降至4.2以下，乳酸含量显著增加，且无丁酸产生。但随着紫花苜蓿比例的增加，pH值明显增加，C30A70和A100组pH值高于4.2，乳酸含量降低，且少量丁酸产生，与柳茜等[19]、辛鹏程等[20]研究结果一致，原因是紫花苜蓿比例增加，水溶性碳水化合物含量减少，青贮发酵无法产生足够的乳酸，有害微生物的活性未被完全抑制，部分蛋白质、葡萄糖等营养成分被降解，产生丁酸等有害物质，进而导致青贮饲料的pH值增加，青贮品质变差。4结论紫花苜蓿与玉米秸秆混合青贮的干物质、水溶性碳水化合物和乳酸含量均增加，pH值和丁酸含量均降低。结果表明，在贵州地区玉米秸秆收获后与紫花苜蓿混合青贮能够克服两者单独青贮存在不足，起到优势互补的作用，建议添加40%左右的玉米秸秆与紫花苜蓿混合青贮较为适宜。