我国年均出栏肉猪约6.8亿头，约占世界总量的1/2。猪呼吸系统疾病在规模化养殖中群发是一种普遍存在的现象，发病率高达50%以上，病死率高，且呈地方流行性的发展趋势，严重威胁养殖业的发展[1-2]。猪呼吸系统疾病的病因复杂，病原众多，目前的治疗药物仍然以大环内酯类药物为主，包括泰乐菌素、替米考星等。但随着上述药物的长期使用，病原菌可对药物产生不同程度的耐药性，极大地影响了药物的治疗效果。因此，新型动物专用药物是兽药研发的重要任务。泰地罗新（tildipirosin）是一种新型十六元环动物专用的大环内酯类半合成抗生素，具有高效、广谱的抗菌活性，对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌和副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病及溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜组织菌引起的牛呼吸道疾病具有很好的疗效[3]。2011年，以泰地罗新为主要成分的无菌注射液（商品名为Zuprevo）通过了欧洲药物管理局（EMA）的审批，相继投放于欧盟国市场[4-5]。2012年，泰地罗新注射液被美国食品药品监督管理局（FDA）批准在美国上市销售[6]。泰地罗新注射液吸收迅速、分布广泛，临床上治疗猪和牛呼吸道疾病的效果较好，只需单次给药即可完成全程治疗[7-9]，广泛应用于国外临床。为考察泰地罗新注射液临床用药的安全性，本试验对泰地罗新注射液在靶动物猪体内的安全性进行了研究和评估，以期为国内临床安全用药提供参考。1材料与方法1.1仪器设备BS-240VET全自动生化分析仪（迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；ProCyte Dx™全自动五分类血细胞分析仪、VetLab UA动物尿液分析仪（爱德士生物科技有限公司）；RM2235切片机、DM750显微镜（Leica）；D7i100相机（Nikon）等。1.2试验药物泰地罗新注射液由河北远征药业有限公司生产（批号：TILDI4-1-03，规格：50 mL∶2 g）。1.3试验动物健康三元杂交猪32头，3~4月龄，雌、雄各半，由北京市畜牧总站试验动物基地提供。受试动物的饲养和管理操作符合中国农业大学国家兽药安全评价中心动物饲养的相关标准操作规程的要求。日粮不含任何药物添加剂，自由饮水。1.4试验设计试验开始前，受试动物至少在试验猪笼中经历7 d适应期，兽医对受试猪进行临床健康检查。适应期内，将32头猪随机分为4组，每组8头，雌、雄各半。按照随机单盲、平行试验设计给药，因受试制剂泰地罗新注射液的推荐给药剂量是4.0 mg/kg BW，故1倍推荐剂量组按照4.0 mg/kg BW给药，3倍推荐剂量组按照12.0 mg/kg BW给药，5倍推荐剂量组按照20.0 mg/kg BW给药，对照组不给药。每日8：00耳后肌内注射给药1次，连续给药3 d。1.5测定指标及方法1.5.1采食量、日增重及饲料转化率分别于给药前（0 d）和给药后7、14 d日，试验猪空腹称重，记录每日进食量，计算平均日采食量、平均日增重以及料重比。结果显示，不同时间点的各剂量组平均日增重差异均不显著（P0.05）；但对照组与3倍剂量组、5倍剂量组的料重比差异显著（P0.05），可能是因为不同组别动物的个体差异所造成，与给药关联不大。1.5.2临床症状试验前观察1 w，观察试验猪的行为、活动、饮水、摄食、毛发、精神、体重等，稳定后进行试验。试验期间定期观察并记录各组猪的健康状况和临床表现（精神状态、行为表现、体温、呼吸频率和脉搏等），记录死亡数，计算各组的病死率和成活率，出现不良反应的猪重点观察。1.5.3血液生理指标分别于给药前（0 d）和给药后5、14 d日，各组猪前腔静脉采血，测定白细胞计数（WBC）、淋巴细胞计数（LYM）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、平均红细胞体积（MCV）、平均血红蛋白含量（MCH）、血小板计数（PLT）等血液生理指标。1.5.4血液生化指标分别于给药前（0 d）和给药后5、14 d日，各组猪前腔静脉采血，测定肌酐（CREA）、谷氨酰转肽酶（GGT）、尿素（UREA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆红素（TBIL）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、钙（Ca）、磷（P）、总胆固醇（TC）等血液生化指标。1.5.5脏器系数剖检试验过程中的死亡猪、出现明显异常表现猪，并于试验结束后随机选取对照组和5倍推荐剂量组各4头猪剖检。若5倍推荐剂量组出现明显的剖检病理变化，对3倍推荐剂量组动物进行剖检。眼观各重要脏器病变情况，对个体的主要脏器（心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏等）进行称重，计算脏器系数。1.5.6组织病理学检查分别取所剖检的试验动物的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、小肠等组织，保存于10%中性缓冲福尔马林固定液，制作病理切片，进行组织病理学检查。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 23.0软件进行方差分析和独立样本t检验分析。结果以“平均值±标准差”表示。2结果与分析2.1各剂量组试验猪的临床表现（精神状态、行为表现、体温、脉搏和呼吸频率）试验期间，各组猪行为未见异常、活动自如，体温、脉搏和呼吸频率均正常，皮毛光亮、口眼鼻耳无分泌物，摄食饮水、大便、尿颜色正常，未见任何明显毒副作用。2.2各剂量组试验猪的血液生理指标结果（见表1）由表1可知，给药5、14 d后，与对照组相比，给药剂量组的各项血液生理指标组间差异和组内差异均不显著（P0.05）。白细胞数普遍轻度偏高，红细胞平均血红蛋白含量普遍偏低，结合其他指标，无明显临床意义，且给药前（0 d）也存在，故与给药关联不大。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.005.T001表1各剂量组试验猪的血液生理指标结果Tab.1Result of blood physiological indexes of pigs in different administration time and dose groups项目时间/d对照组1倍推荐剂量组3倍推荐剂量组5倍推荐剂量组WBC/(×109/L)028.52±5.0924.60±6.4624.61±3.9728.55±8.40527.68±8.8625.62±4.2522.11±3.1423.81±3.011422.13±2.1323.24±3.3921.44±1.3822.15±2.29LYM/(×109/L)013.31±2.0713.87±2.1413.23±1.7111.25±3.38512.92±2.9212.84±1.8911.67±1.879.50±1.741410.92±1.4811.04±2.6610.39±2.7710.17±1.85RBC/(×1012/L)07.37±0.778.14±0.467.49±0.727.95±0.4657.54±1.077.81±0.497.01±0.757.32±0.71147.59±0.708.06±0.337.82±0.638.00±0.85HGB/(g/L)0112.80±9.10119.30±5.30109.90±09.70112.10±08.705124.50±11.60116.50±6.40104.80±11.60106.60±10.1014114.40±9.20117.90±6.40115.30±09.40117.90±10.20MCV/fL052.50±1.1951.10±1.5049.68±1.0849.48±1.61552.54±2.4049.15±1.7349.01±2.4448.09±2.001452.45±2.1049.73±2.2248.61±1.7749.19±1.38MCH/pg015.35±0.4714.66±0.6114.70±0.3814.60±0.56515.36±0.5214.68±0.5214.88±0.4014.73±0.581415.11±0.5514.64±0.3514.74±0.4314.78±0.51PLT(×109/L)0428.50±106.80500.88±113.56561.63±111.33509.00±73.825413.50±94.61367.13±108.11425.88±157.54362.50±171.0414482.63±130.11457.88±155.03573.86±117.62509.75±127.272.3各剂量组试验猪的血清生化指标结果（见表2）由表2可知，对照组与各给药剂量组的各项血清生化指标组间差异和组内差异均不显著（P0.05）。其中，大多数试验动物的TC在整个试验周期的血液生化检测中均普遍偏高，给药前和空白对照组均存在，结合其他指标，与给药关联不大。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.005.T002表2各剂量组试验猪的血清生化指标结果Tab.2Result of serum biochemical indexes of pigs in different administration time and dose groups项目时间/d对照组1倍推荐剂量组3倍推荐剂量组5倍推荐剂量组CREA/(μmol/L)0101.11±5.16103.72±6.14103.55±13.09107.38±10.305102.21±13.71101.24±8.6099.31±15.15102.40±9.7114102.61±14.26108.94±11.6997.00±10.89102.73±10.65GGT/(U/L)046.90±17.3650.59±11.9433.92±19.5454.89±11.44548.01±8.3141.69±13.6939.27±15.1242.05±13.121447.37±16.4633.27±14.5437.63±36.9255.86±18.61UREA/(mmol/L)03.66±0.784.07±1.104.08±1.054.23±1.3053.65±2.453.06±0.913.22±1.753.04±1.23143.86±1.383.24±0.682.79±0.394.29±0.56ALT/(U/L)055.83±7.3558.95±4.2847.50±6.6350.88±8.56551.68±5.2260.51±7.2349.83±6.2048.48±13.041452.36±7.4361.31±8.6355.60±9.1751.54±12.35AST/(U/L)061.54±16.2057.97±14.7151.54±15.5259.63±12.49554.27±19.4148.58±13.2961.12±13.0455.60±16.291460.76±13.1055.21±8.2856.00±9.5558.90±14.25ALP/(U/L)0163.90±46.58161.97±34.27157.35±36.66138.42±30.255153.68±24.48155.98±18.48158.22±45.47121.24±50.1214126.20±23.68136.32±27.38160.46±36.80120.34±36.64TP/(g/L)066.93±3.1767.53±3.5169.01±7.8566.26±4.52567.63±5.5964.35±2.2568.47±4.7466.46±5.981467.48±3.1267.65±2.9166.78±5.4265.62±5.48ALB/(g/L)029.56±1.5629.68±2.1425.02±1.9826.45±2.40531.25±2.4030.48±2.5525.31±1.8126.11±4.521431.50±1.9832.16±2.4527.15±2.2526.49±3.20GLB/(g/L)037.38±3.3337.88±4.5946.99±7.7339.81±4.84536.39±5.3933.88±3.4144.30±5.1840.36±7.131435.99±4.5535.50±3.2738.93±5.8339.14±7.75TBIL/(μmol/L)08.33±2.137.54±2.547.18±1.777.54±2.2556.14±2.495.01±1.685.16±1.725.01±2.69147.15±2.177.43±2.346.57±1.106.31±1.41GLU/(mmol/L)03.94±0.863.91±0.963.91±1.054.02±0.8454.96±0.974.71±0.524.29±0.864.40±1.15144.76 ±0.724.57±0.714.73±0.715.13±1.00TG/(mmol/L)00.50±0.140.57±0.130.57±0.180.61±0.1050.44±0.130.47±0.190.48±0.180.50±0.13140.49±0.180.43±0.120.46±0.140.48±0.13Ca/(mmol/L)02.63±0.142.68±0.132.57±0.112.57±0.0952.56±0.112.64±0.102.47±0.042.38±0.26142.51±0.132.54±0.132.45±0.122.46±0.16P/(mmol/L)03.21±0.263.37±0.183.18±0.313.09±0.2853.11±0.273.15±0.193.20±0.322.88±0.37142.94±0.193.32±0.263.25±0.082.84±0.14TC/(mmol/L)02.73±0.272.73±0.462.44±0.502.37±0.3252.60±0.812.41±0.202.62±0.252.29±0.52142.77±0.522.43±0.352.59±0.482.46±0.362.4各剂量组试验猪的大体剖检结果（见图1）由图1可知，各组心包膜和心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏被膜颜色正常，脏器表面无异常，边缘整齐，无出血点或坏死病症。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.005.F001图1各剂量组试验猪的大体剖检结果Fig.1Gross autopsy result of pigs in each dose group at different administration times结果表明，5倍推荐剂量连续给药3 d对猪主要脏器无肉眼可见的不良影响。2.5各剂量组试验猪的脏器重量及系数（见表3）由表3可知，对照组和5倍推荐剂量组猪的各脏器系数差异均不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.005.T003表3各剂量组试验猪的脏器重量及系数Tab.3Organ weights and coefficients of experimental pigs with different doses项目对照组5倍推荐剂量组心脏重量/g30.65±5.2426.00±5.91心脏系数/%101.38±19.8192.80±19.99肝脏重量/g3.31±0.303.60±0.39肝脏系数/%563.51±95.20480.08±72.93脾脏重量/g18.47±1.6718.78±2.08脾脏系数/%43.55±9.8232.88±5.21肺脏重量/g1.42±0.161.28±0.13肺脏系数/%283.70±28.54279.93±29.62肾脏重量/g9.44±1.6111.03±1.59肾脏系数/%107.78±8.7697.95±13.042.6各剂量组试验猪的组织病理学结果由对照组猪和5倍推荐剂量组猪的组织病理学检查结果可知，5倍推荐剂量组4头猪肝组织显微镜下可见肝小叶及肝小叶间质可见少量的淋巴细胞浸润，其余脏器未见明显病理变化；3倍推荐剂量组4头猪和对照组4头猪各组织均未见明显的病理变化。因此，按5倍推荐剂量连续给药3 d对受试动物三元杂交猪的肝脏具有一定的毒性，对其余脏器无明显毒性作用。若按推荐剂量用药，对受试动物的各组织无明显毒性作用。3讨论泰地罗新注射液按1倍、3倍、5倍推荐剂量连续给药3 d对受试动物三元杂交猪平均采食量、平均日增重、饲料转化率、临床症状、血液生理指标、血清生化指标、大体剖检结果及脏器系数均无显著影响；组织病理学检查结果显示，5倍推荐剂量连续给药3 d对受试动物猪的肝脏具有一定毒性，但按照推荐剂量给药对受试动物猪是安全的。目前，泰地罗新注射液已被国内多家企业和机构作为二类新兽药进行研究。靶动物安全性试验为必要研究内容之一。泰地罗新注射液临床上应用于治疗猪的由胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌病、猪链球菌引起的呼吸系统疾病疗效显著，推荐给药剂量为4 mg/kg BW（肌内注射），每日仅用1次[10-12]。林红等[13]评价了泰地罗新注射液对靶动物猪的安全性，试验动物分组与各组给药剂量与本研究相同，但给药时间为每隔4 d给药1次，连续给药3次。本试验结果显示，各组试验猪的体重以及血液生理、生化指标等检测结果差异均不显著，解剖试验猪未见肉眼可见的病理变化，组织切片显微镜观测未见病理变化。本研究采用的给药方式为每日给药，连续3 d；结果显示，仅在5倍剂量组中发现泰地罗新具有一定的肝脏毒性，其原因可能为连续给药使药物在动物体内的累积达到了对肝脏具有毒性影响的浓度。但3倍剂量组未见此毒性影响，说明泰地罗新注射液在受试动物猪的体内耐受性高，按临床推荐剂量应用是安全的。闫超群等[14]、谢顺[15]研究了泰地罗新注射液对靶动物猪的安全性，结果显示，高剂量组出现了心肌细胞变性的症状，也表现出对肝脏和肾脏的损伤。上述研究表明，在临床推荐剂量范围内使用对靶动物猪的生理生化无明显的影响，与本研究结果一致。4结论临床上，泰地罗新注射液按推荐剂量给药对靶动物猪是安全的。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.005.F002