霉变饲料可使畜禽内脏器官发生病理变化，降低畜禽生产力[1]，以黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮（ZEA）对畜禽危害最大[2]。日粮中ZEA含量达到1 mg/kg时，猪出现阴门红肿，直肠、阴道和子宫脱出，子宫增大和卵巢萎缩；50~100 mg/kg ZEA可影响排卵、受孕、胎儿发育、新生儿的存活率等[3-4]。黄曲霉菌可产生多种毒素[5-6]，尤其黄曲霉毒素B1（AFB1），对奶牛的生长和健康状况有较强的影响作用[7]。油脂作为一种添加剂，对于饲料发霉影响的研究尚不多见。本试验旨在研究饲料中添加5%和10%的菜籽油、猪油、混合油对饲料发霉和饲料主要营养成分的影响，以期为饲料添加剂的拓展提供参考。1材料与方法1.1试验材料玉米、豆粕、麸皮（石家庄孜孜贸易有限公司）；菜籽油（云南四方街贸有限公司）、猪油（青岛麦瑞克食品有限公司）。1.2仪器及试剂仪器：凯氏定氮仪、全自动滤袋式脂肪仪、马弗炉、烘箱、培养箱、酸度计、称量皿、分析天平、坩埚。试剂：石油醚、浓硫酸、浓盐酸、氢氧化钠、硼酸；AFB1试纸、ZEA试纸（深圳芬德生物技术有限公司）。1.3试验设计取7份质量相同（15 g）、水分含量为15%的混合饲料样品，3份分别加入5%的菜籽油、猪油、混合油（m菜籽油∶m猪油=1∶1），3份分别加入10%的菜籽油、猪油、混合油（m菜籽油∶m猪油=1∶1），1份为对照样品。样品35 ℃培养，于第20、40 d测定各样品饲料中的水分、粗灰分、粗蛋白、粗脂肪、pH值以及AFB1、ZEA。饲料由玉米、豆粕、麸皮按照1∶1∶1比例混合，pH值6.25，营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.018.T001表1饲料营养水平营养水平水分粗灰分粗蛋白粗脂肪含量15.04.226.75/10注：15%水分含量包括混合饲料本身8.3%水分含量和添加6.7%的水分；5%油脂含量包括混合饲料本身2.2%粗脂肪含量和添加2.8%的油脂；10%油脂含量包括混合饲料本身2.2%粗脂肪含量和添加7.8%的油脂。%1.4测定指标及方法水分参照GB/T 6435—2014的测定方法；粗蛋白参照GB/T 6432—2018的测定方法；粗脂肪参照GB/T 14772—2008的测定方法；粗灰分参照GB/T 6438—2007的测定方法；pH值参照pHS-3C型酸度计的使用方法。AFB1、ZEA使用胶体金检测卡检测。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件统计整理，SPSS 17.0进行单因素方差分析，LSD法多重比较，P0.05表示差异显著，P0.01表示极显著。2结果与分析2.1不同油脂类型和添加量对饲料主要营养成分含量的影响（见表2、表3）由表2、表3可知，培养20 d时，各组间水分含量差异极显著（P0.01），油脂种类与油脂添加量之间交互作用极显著（P0.01）。混合油组饲料水分含量显著高于菜籽油组（P0.05）。培养40 d时，7组组间水分含量差异极显著（P0.01），油脂种类与油脂添加量之间交互作用极显著（P0.01）；混合油组水分含量显著高于对照组、菜籽油组水分含量（P0.05），混合油组饲料水分含量极显著高于猪油组水分含量（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.018.T002表235 ℃下培养20 d各组主要营养成分含量差异性比较项目水分/%粗蛋白/%粗灰分/%粗脂肪/%pH值5%菜籽油组8.95Bbc24.90ab3.00ABab3.00Bb4.50Bb5%猪油组10.95Bb22.15ab1.50Bb3.50Bb4.87ABb5%混合油组8.00Bbc28.90a4.00ABab3.00Bb4.82ABb10%菜籽油组5.50Bc18.00b3.50ABab6.50Aa4.93ABb10%猪油组8.45Bbc24.70ab3.50ABab4.00ABb4.99ABb10%混合油组22.30Aa21.00ab5.00ABa3.00Bb5.58Aa对照组9.05Bbc19.40b5.50Aa2.00Bb5.03ABab油脂种类菜籽油组7.23b21.453.25ABbc4.75a4.72b猪油组9.70ab23.432.50Bc3.75ab4.93ab混合油组15.15a24.954.50ABab3.00ab5.20a无添加组9.05ab19.405.50Aa2.00b5.03ab油脂添加量09.0519.405.50a2.00b5.03ab5%9.3025.322.83b3.17ab4.73b10%12.0821.234.00ab4.50a5.17aP值7组之间0.0000.1850.0860.0190.058P值油脂种类0.1200.5280.0570.1580.076P值添加量0.3540.1290.0760.0780.018P值交互0.0000.1560.6210.0440.240注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.018.T003表335 ℃下培养40 d各组主要营养成分含量差异性比较项目水分/%粗蛋白/%粗灰分/%粗脂肪/%pH值5%菜籽油组9.50ABabc22.60ABCabc2.007.50ab4.82Bb5%猪油组5.50ABc16.00Cd3.508.45ab5.14Bb5%混合油组10.45ABa18.25BCc3.006.00ab4.87Bb10%菜籽油组6.50ABbc21.65ABCbc4.5010.00a4.88Bb10%猪油组9.00ABabc26.00ABab2.507.50ab5.00Bb10%混合油组27.50Aa27.40Aa1.505.45ab6.04Aa对照组7.50ABabc24.30ABab4.004.00b4.90Bb油脂种类菜籽油组8.00ABb22.133.258.75a4.85猪油组7.25Bb21.003.007.98ab5.07混合油组18.98Aa22.832.255.73ab5.46无添加组7.50ABb24.304.004.00b4.90油脂添加量07.5024.30ab4.004.004.905%8.4818.95b2.837.324.9410%14.3325.02a2.837.655.31P值7组之间0.0000.0150.8380.3500.009P值油脂种类0.0160.7680.8180.2160.136P值添加量0.0740.0161.0000.8100.138P值交互0.0000.0230.4580.5750.009培养20 d时，7组组间粗蛋白含量差异显著（P0.05），油脂种类和油脂添加量之间交互作用不显著（P0.05），7份样品饲料的组间粗蛋白含量差异不显著（P0.05）。培养40 d时，7组组间粗蛋白含量差异极显著（P0.01），油脂种类和油脂添加量之间交互作用显著（P0.05），10%油脂添加量组饲料粗蛋白含量显著高于5%油脂添加量组（P0.05）。培养20 d时，7组组间粗灰分含量差异极显著（P0.01），油脂种类和油脂添加量之间交互作用不显著，对照组粗灰分含量显著高于5%油脂添加量组（P0.05），对照组饲料粗灰分含量显著高于菜籽油组（P0.05），混合油组饲料粗灰分含量显著高于猪油组（P0.05），对照组粗灰分含量极显著高于猪油组（P0.01）。培养40 d时，7组组间粗灰分含量差异不显著（P0.05），油脂种类和油脂添加量之间交互作用不显著（P0.05），7组组间粗灰分含量差异不显著（P0.05）。培养20 d时，7组间粗脂肪含量差异极显著（P0.01），油脂种类与油脂添加量之间交互作用显著（P0.05），10%油脂添加量组饲料粗脂肪含量显著高于对照组（P0.05），菜籽油组粗脂肪含量显著高于对照组（P0.05）。培养40 d时，7组间粗脂肪含量差异显著（P0.05），油脂种类与油脂添加量之间交互作用不显著（P0.05），菜籽油组粗脂肪含量显著高于对照组（P0.05）。培养20 d时，7组组间pH值差异极显著（P0.01），油脂种类与油脂添加量之间交互作用不显著（P0.05），10%油脂添加量组饲料pH值显著高于5%油脂添加量组（P0.05），混合油组饲料pH值显著高于菜籽油组（P0.05）。培养40 d，7组组间pH值差异极显著（P0.01），油脂种类与油脂添加量之间交互作用极显著（P0.01），7份样品饲料的组间pH值差异不显著（P0.05）。2.2不同油脂类型、不同油脂添加量对饲料发酵的影响2.2.140 d霉菌发酵情况（见图1）7份样品饲料，在35 ℃ 15%水分浓度下培养，发霉程度最严重的是添加10%混合油组饲料，对照组几乎无发霉现象，其余组饲料发霉程度较轻。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.018.F001图140 d霉菌发酵情况2.2.220 d和40 d霉菌试纸检测结果（见表4）7份样品饲料，在35 ℃、15%水分浓度下，培养至第20、第40 d时，各组饲料AFB1和ZEA试纸检测的结果均为阴性。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.018.T004表420 d和40 d霉菌试纸检测结果组别20 d40 dAFB1ZEAAFB1ZEA5%菜籽油组阴性阴性阴性阴性5%猪油组阴性阴性阴性阴性5%混合油组阴性阴性阴性阴性10%菜籽油组阴性阴性阴性阴性10%猪油组阴性阴性阴性阴性10%混合油组阴性阴性阴性阴性对照组阴性阴性阴性阴性3讨论3.1饲料发霉对饲料营养成分的影响在饲料原料中，玉米比小麦和豆粕更容易感染黄曲霉毒素[8]，饲料原料中的霉菌及毒素含量较高，霉菌种类也多种多样，因此饲料原料霉菌感染问题不容忽视[9-10]。霉菌生长过程中，营养成分总量不变的情况下，不同霉菌之间存在竞争关系，一种霉菌的生长可能会抑制另一种霉菌生长[11-14]。青贮在发酵过程中饲料也易感染霉菌[15]饲料发霉可使饲料中的水分、粗灰分含量降低，蛋白质和脂肪的溶解度降低，pH值降低[1]。生毒霉菌生长所需的水分活度值低于毒素形成所需，但霉菌生长的代谢水产生可增加生长环境的水分活度值[2]。玉米、豆粕中加入玉米油和豆油，各组饲料水分含量呈先减少后增加的趋势[16]。本试验中，与原始饲料各营养成分相比，10%混合油组的样品饲料水分含量增加，其余样品饲料水分含量均低于原始水分含量（15%）。20 d时，10%混合油组和对照组的粗灰分含量小幅上升，其余组粗灰分含量均降低；40 d时，10%菜籽油组粗灰分含量增加，其余样品饲料粗灰分含量低于原始粗灰分含量（4.2%）。20 d时，5%混合油组粗蛋白含量小幅上升，其余组粗蛋白含量均降低；40 d时，10%菜籽油组粗蛋白含量小幅上升，其余样品饲料粗蛋白含量低于原始粗蛋白含量（26.7%）。20 d时，各组粗脂肪含量均降低；40 d时，10%猪油组和10%混合油组粗脂肪含量降低，10%菜籽油组粗脂肪含量不变，其余组粗脂肪含量均上升，各组pH值均降低。3.2不同类型、添加量油脂及其交互作用对饲料营养成分的影响不同油脂种类（玉米油、豆油）对饲料水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分含量无影响；对霉菌的产生和AFB1的产生没有影响，对酸价有影响[16]。本试验中，添加菜籽油、猪油、混合油对培养到20 d时的7份样品饲料水分、粗脂肪的含量和pH值具有显著影响，对组间粗灰分含量存在极显著影响，对组间粗蛋白含量无显著影响；添加菜籽油、猪油、混合油对培养到40 d时的7份样品饲料水分含量存在极显著影响，对组间粗脂肪含量存在显著影响，对组间粗蛋白、粗灰分含量和pH值无显著影响。结果表明，添加油脂为菜籽油和猪油，分别为植物油、动物油，已有研究中添加油脂均为植物油，对营养成分和pH值的影响存在一定差异。不同油脂添加量（添加油脂至油脂含量为5%）对饲料水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分含量无影响；对霉菌的产生和AFB1的产生无影响，对酸价有影响[16]。本试验中，0、5%、10%油脂添加量对培养到20 d时7份样品饲料粗灰分、粗脂肪含量和pH值具有显著影响，对组间水分、粗蛋白含量无显著影响；0、5%、10%油脂添加量的培养到40 d时的样品饲料粗蛋白含量存在显著影响，对组间水分、粗脂肪、粗灰分含量和pH值无显著影响。油脂种类和油脂添加量的交互作用对20 d和40 d的水分含量存在极显著影响，对40 d的粗蛋白含量存在显著影响，对20 d的粗脂肪含量存在显著影响，对40 d的pH值存在极显著影响。3.3水分含量、温度、不同油脂、不同油脂添加量对饲料发酵的影响有研究在37 ℃、0.9水分活度下培养15 d未发现有AFB1产生；也有研究发现在28 ℃、0.97水分活度值下15~30 d时ZEA生长速率最快，显著产毒的水分活度值达到0.95以上[2]。霉菌生长最适温度为20~30℃，大部分霉菌生长的最适相对湿度为80％~90%[17]。增加油脂添加量可促进AFB1产生，当添加量1%时，花生油促进作用最强，其次为玉米油大豆油小麦胚芽油。添加油脂有助于黄曲霉菌落的生长，其中花生油效果最好[1]。本试验处于35 ℃、15%水分含量下，饲料长出霉菌，AFB1试纸和ZEA检测7份饲料，结果均为阴性。因温度较高，随着培养时间延长，饲料中的水分含量亦发生变化；且饲料中所长霉菌不是黄曲霉、玉米赤霉烯酮。35 ℃不是霉菌的最适生长温度，水分含量15%低于适合霉菌生长的水分需求，菜籽油和猪油对霉菌的生长促进作用不明显。4结论发霉可降低饲料中的pH值，菜籽油和猪油对AFB1和ZEA的生长促进作用不明显；不同的油脂种类对各组饲料的水分含量、粗灰分含量、粗脂肪含量、pH值具有显著影响，对各组饲料的粗蛋白含量无显著影响；不同的油脂添加量对各组饲料的粗蛋白含量、粗灰分含量、粗脂肪含量、pH值具有显著影响，对各组饲料的水分含量无显著性影响。