牡丹除作为观赏花卉以外，牡丹的花、籽、根、花粉、叶均具有很高的营养价值、药用价值[1-3]。牡丹籽粕是牡丹籽压榨后剩余的糟粕，压榨产物——牡丹籽油中所含有的微量成分和多不饱和脂肪酸含量较高，尤其是α-亚麻酸含量可以达42%[4]。昝丽霞等[5]、李洁等[6]研究表明，牡丹籽粕中含有大量的粗蛋白、多糖、脂肪、微量元素、芪类成分、黄酮类成分和甾体类成分等。萜类化合物具有抗炎、抗过敏、改善记忆力、降血糖等药用价值[7]。芪类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、调节免疫力等生理活性[8-9]。彭萧等[10]在日粮中添加发酵饲料，结果发现，发酵饲料可以提高蛋鸡的生产性能、蛋品质和血清生化指标。梁天柱等[11]在三黄鸡的日粮中添加10%发酵饲料，结果发现，发酵饲料可显著提高蛋鸡的平均日增重和平均日采食量。发酵饲料是指在原料中添加微生物，通过微生物的代谢活动将原料中难以吸收利用的大分子物质转化或分解成为可被利用的有机酸和小肽等小分子物质，形成一种气味浓香、适口性好且无毒无害的饲料[12]。本试验以牡丹籽粕作为发酵原料，利用枯草芽孢杆菌发酵，旨在研究发酵牡丹籽粕对蛋鸡生产性能、蛋品质指标的影响[13]，为生产中合理利用发酵牡丹籽粕作为新型非常规蛋白饲料的潜质和价值提供参考。1材料与方法1.1试验材料油用牡丹籽粕购自铜陵凤丹科技开发公司，选用枯草芽孢杆菌（活菌数6×107 CFU/g）作为菌种发酵，获得发酵牡丹籽粕。牡丹籽粕及发酵牡丹籽粕营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.010.T001表1牡丹籽粕及发酵牡丹籽粕营养水平项目粗蛋白/%粗脂肪/%粗灰分/%粗纤维/%钙/%磷/%酸溶蛋白/%总能/(MJ/kg)牡丹籽粕24.364.803.7411.520.2850.541.1818.63发酵牡丹籽粕21.555.193.859.670.2550.642.5919.65注：营养水平均为实测值。1.2试验动物海兰褐蛋鸡由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提供。1.3试验设计选取384只26周龄体重及生产性能接近的健康蛋鸡，随机分为4组，每组4个重复，每个重复24只。对照组蛋鸡饲喂常规型日粮，试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组蛋鸡分别饲喂添加6%牡丹籽粕、6%发酵牡丹籽粕、12%发酵牡丹籽粕的基础日粮。蛋鸡试验日粮按照NRC《畜禽营养需要》（1994）和我国《鸡饲养标准》根据蛋鸡日粮营养需要量进行日粮配置。试验日粮组成及营养水平见表2，各组饲养日粮营养水平一致。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.010.T002表2试验日粮组成及营养水平（风干基础）项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组原料组成/%玉米60.1356.1854.0748.02豆粕26.8724.8225.9124.98牡丹籽0.006.000.000.00发酵牡丹籽粕0.000.006.0012.00石粉8.008.008.008.00预混料5.005.005.005.00豆油0.000.001.022.00合计100.00100.00100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)11.2911.2911.2911.29粗蛋白/%16.5016.5016.5016.50钙/%3.803.803.803.80总磷/%0.600.600.600.60有效磷/%0.400.400.400.40注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 20 IU、VK 3 IU、VB12 0.025 mg、VB1 1.8 mg、VB2 5.0 mg、生物素0.04 mg、叶酸0.6 mg、VB5 12 mg、VB3 12 mg、VB6 3.75 mg、锰100 mg、锌75 mg、铁80 mg、铜8 mg、碘0.15 mg、硒0.10 mg。2.营养水平均为计算值。1.4饲养管理试验鸡采用3层阶梯式笼养的方式，每笼3只，各重复按照拉丁方设计原则分配笼位，以排除层数和区域位置对结果造成的影响。鸡舍内温度和湿度按照蛋鸡饲养管理要求规范进行。试验蛋鸡自由采食、饮水，自然光照和人工光照相配合，固定时间为16 h。通风方式选用机械+自然风。试验期8 w，每日7：00和16：30定时饲喂，16：00收蛋。按要求对鸡舍进行消毒。1.5测定指标与方法1.5.1生产性能试验期间每天7：00清扫并记录剩余料量，称取定量新料投入料槽。记录各重复的采食量、产蛋数、破蛋数、产蛋总重及死淘数。计算各组蛋鸡的平均日采食量、料蛋比、产蛋率、死淘率和软破蛋率。平均日采食量=耗料量/试验鸡数量(1)料蛋比=总耗料量/产蛋总重(2)产蛋率=产蛋数/试验鸡数量×100%(3)死淘率=死淘数/试验鸡数量×100%(4)软破蛋率=软破蛋数/产蛋数×100%(5)1.5.2蛋品质试验结束当天，每组随机选择20枚鸡蛋，每个重复5枚，测定蛋品质。使用DL91150型电子数显游标卡尺（宁波得力办公用品有限公司）测量蛋形指数；使用EFG-0503型蛋壳强度测试仪测定（日本robotmation股份有限公司）测定蛋壳强度；使用YP10001型百分之一电子天平（上海越平科学仪器制造有限公司）测量蛋黄比重；使用蛋壳厚度测量仪（日本robotmation股份有限公司）测量蛋壳厚度，多次测量，取平均值；使用TSS型蛋壳颜色测定仪（英国TSS公司）测量蛋壳颜色；使用EA-01型多功能蛋品检测仪（以色列ORKA公司）测定蛋重、蛋白高度、蛋黄颜色、哈夫单位。纵蛋形指数=径长/横径长×100%(6)蛋黄比重=蛋黄重/蛋重(7)1.5.3禽流感及新城疫抗体水平试验第1 d，蛋鸡饮水饥饿12 h。每个重复随机取3只，脚号标记，翅静脉采血，血液分别收集于2 mL的抗凝管中，采用低速离心机离心得到血清。使用移液枪将血清转移至2 mL离心管，参照鲁卫红[14]方法测定产蛋高峰期蛋鸡血清中亚型禽流感H5、H7、H9和新城疫（ND）的抗体水平。试验最后1 d，蛋鸡饮水饥饿12 h，按照脚号翅静脉采血，测量型禽流感H5、H7、H9和ND抗体水平。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel 2010软件进行前期处理，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，Dunman's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵牡丹籽粕对蛋鸡产蛋性能的影响（见表3）由表3可知，试验Ⅲ组蛋鸡的平均日采食量和产蛋率显著低于其他3组（P0.05）。试验组蛋鸡的料蛋比显著高于对照组（P0.05）。与试验Ⅲ组相比，试验Ⅱ组蛋鸡的产蛋数显著升高（P0.05）。与对照组相比，试验Ⅱ组蛋鸡的产蛋率显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.010.T003表3发酵牡丹籽粕对蛋鸡产蛋性能的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组产蛋数/枚22.50±1.01a22.45±1.14ab22.59±1.24a22.25±1.14b平均日采食量/[g/(只·d)]118.45+1.13a117.86+1.81b118.13+1.02ab117.00+2.40c料蛋比2.10±0.00c2.13±0.11b2.12±0.09b2.17±0.12a产蛋率/%93.68±4.17ab93.46±4.69b94.54±4.76a92.80±5.32b死淘率/%0.00±0.000.00±0.000.00±0.002.08±0.28软破蛋率/%0.10±0.67ab0.00±0.00b0.06±0.54ab0.13±0.86a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2发酵牡丹籽粕对蛋鸡蛋品质的影响（见表4）由表4可知，各组鸡蛋的蛋形指数差异不显著（P0.05）。试验Ⅱ组鸡蛋的蛋重和蛋黄比例显著高于试验Ⅰ组、Ⅲ组（P0.05）。试验Ⅱ组鸡蛋的蛋壳颜色显著高于其他3组（P0.05）。试验Ⅱ组、Ⅲ组鸡蛋的蛋壳强度与蛋壳厚度显著优于对照组（P0.05）。试验Ⅱ组鸡蛋的蛋白高度显著高于试验Ⅰ组（P0.05）。与试验Ⅰ组、Ⅱ组相比，试验Ⅲ组鸡蛋的蛋黄颜色显著降低（P0.05）。试验Ⅱ组鸡蛋的哈夫单位显著高于对照组、试验Ⅰ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.010.T004表4发酵牡丹籽粕对蛋鸡蛋品质的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组蛋形指数1.29±0.041.28±0.061.28±0.041.28±0.03蛋壳颜色25.68±2.37b25.55±2.38bc26.58±2.88a24.74±2.65c蛋重/g62.16±3.51a60.98±3.52b61.18±2.74ab59.65±3.60b蛋壳厚度/mm0.34+0.02b0.35+0.02ab0.35+0.02a0.35+0.02a蛋壳强度/(kg/cm)4.25±0.60b4.27±0.58ab4.43±0.45a4.44±0.44a蛋白高度/mm7.18±0.95ab6.87±1.19b7.32±1.06a7.04±0.92ab蛋黄颜色4.53±0.55ab4.75±0.97a4.71±0.79a4.43±0.58b哈夫单位83.15±5.95b80.29±9.43c85.52±4.73a84.31±5.22ab蛋黄比例/%23.20±1.42a22.28±1.86b23.26±1.49a22.44±1.68b2.3发酵牡丹籽粕对蛋鸡亚型禽流感及新城疫抗体水平的影响（见表5）由表5可知，各组H5、H7、H9亚型禽流感及ND病毒均无显著差异（P0.05)。试验Ⅱ组与对照组在亚型禽流感H5抗体水平相同。试验Ⅰ组与对照组在亚型禽流感H9的抗体水平相同。试验结束期，试验组在H5、H7、H9亚型禽流感及ND的抗体水平呈先升后降的趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.010.T005表5发酵牡丹籽粕对蛋鸡亚型禽流感及新城疫抗体水平的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组0 dH57.00±1.287.25±1.607.00±1.287.67±0.78H77.33±1.237.67±1.447.25±1.367.75±0.97H99.58±0.679.58±0.909.25±1.489.42±1.24ND6.89±1.176.67±2.126.58±1.516.92±0.7956 dH57.67±1.077.75±1.298.09±1.047.91±1.30H78.00±0.507.33±1.078.10±0.997.82±0.98H910.50±0.769.83±1.2710.22±0.839.73±1.10ND7.00±0.826.80±1.146.89±1.057.09±1.58log2与对照组相比，试验Ⅱ组在H5、H7亚型禽流感及ND分别得到提高。与试验初期相比，试验结束期蛋鸡的H5、H7、H9亚型禽流感及ND抗体水平均得到提高，且试验Ⅱ组提升相对较高。3讨论3.1发酵牡丹籽粕对蛋鸡生产性能的影响有研究表明，牡丹籽粕中粗蛋白含量为27.57%[15]，发酵牡丹籽粕中粗蛋白含量为20.46%，豆粕中粗蛋白含量为46.54%[5]，比发酵牡丹籽粕高26.08%，发酵牡丹籽粕可以成为替代豆粕的蛋白质饲料[16-19]。魏尊[13]在饲料中添加10%发酵棉粕饲喂蛋鸡，结果发现，与对照组相比，试验组蛋鸡的料蛋比更高。本试验中，与对照组相比，试验Ⅱ组蛋鸡的料蛋比显著提高，但与试验Ⅰ组无显著差异，且随着发酵牡丹籽粕比例增加，料蛋比逐渐增加；可能是因为发酵牡丹籽粕比例增加，发酵气味过大影响鸡群采食。崔卫涛等[20]研究发现，试验组蛋鸡的料蛋比低于对照组，可能与枯草芽孢杆菌发酵牡丹籽粕替换部分豆粕促使添加不同比例发酵饲料日粮中营养物质及微量元素减少有关[21]。王一平[22]添加5.5%海鲜菇菌渣发酵饲料饲喂蛋鸡，结果发现，蛋鸡的平均日采食量、产蛋率与对照组差异不显著，且5.5%菌渣发酵饲料平均日采食量高于4%、7%菌渣发酵饲料，产蛋率高7%菌渣发酵饲料，与本试验结果一致。张驰等[23]研究日粮中添加发酵饲料对蛋鸡生产性能的影响，结果发现，试验组蛋鸡的产蛋率均略高于对照组，与本试验中试验Ⅱ组蛋鸡的产蛋率略高于对照组结果一致。但与朱元召等[24]研究结果不一致，可能是因为蛋鸡处在产蛋高峰期，生理机能处于最佳状态，试验组日粮也能够为蛋鸡提供所需营养和能量，添加过高比例发酵牡丹籽粕影响蛋鸡采食和营养转化。本研究中，适量添加经发酵处理牡丹籽粕能够有效改善家禽的生产性能。3.2发酵牡丹籽粕对蛋鸡蛋品质的影响蛋品质能够反映鸡蛋营养价值，对蛋的市场价格、种蛋孵化率等均具有重要影响[25]。蛋壳厚度、蛋壳强度表明蛋鸡运输过程中会降低因破损而带来的利益减少的后果，降低鸡蛋的生产成本[26-27]。白子金等[28]在蛋鸡日粮添加复合微生态制剂，结果发现，复合微生态制剂可提高试验组蛋鸡的蛋壳厚度、蛋壳强度和蛋白高度，与本试验添加发酵牡丹籽粕组蛋壳厚度显著高于对照组结果一致，表明发酵饲料中含有的小肽等活性物质，可促进鸡群对钙、磷的吸收利用，增强蛋壳厚度。崔卫涛等[29]研究发现，饲喂添加发酵棕榈粕的混合饲料，试验组鸡蛋蛋壳强度高于对照组，但差异不显著。该试验结果于本试验结论不一致，可能是因为棕榈粕中含有的单宁等物质阻碍对钙、磷的吸收，牡丹籽粕中抗营养因子被降解。蛋白高度越高，鸡蛋越新鲜，哈夫单位值越大，表明蛋品质越高。崔卫涛等[29]在添加4%发酵棕榈粕形成的混合饲料饲喂蛋鸡，结果表明，蛋白高度高于对照组。邓雨英等[30]研究表明，雪峰乌骨鸡食用添加枯草芽孢杆菌和植物精油复合制剂可提高试验组的哈夫单位，与本试验添加发酵牡丹籽粕可提高蛋白高度的结论一致。本试验中，试验Ⅲ组比其他3组的蛋黄颜色浅。Abdo等[31]在蛋鸡日粮添加绿茶，结果发现，随着添加比例提高，蛋黄颜色越深，与本试验研究结果不一致，原因可能是发酵牡丹籽粕类胡萝卜素和胡萝卜素含量较低，当发酵牡丹籽粕比例添加量越高，饲粮中色素含量越低。3.3发酵牡丹籽粕对蛋鸡血清抗体水平的影响天气变换季节，鸡群极易感染禽流感。禽流感可引起蛋鸡产蛋性能下降，造成直接经济损失[32]。新城疫病毒是感染鸡的主要传染性病毒，强毒株新城疫主要是在已感染鸡上分离得到[33]。对不同时期鸡群进行4种病毒抗体水平的检测，是分析鸡群免疫能力的关键。本试验中，试验初期，各组间抗体水平无明显差异，试验结束，除新城疫ND抗体水平降低，亚型禽流感抗体水平均上升。夏圣奎等[34]研究发现，添加有多种益生菌发酵饲料饲喂蛋鸡，H5及ND抗体水平提高，与本试验结果一致。林明星等[35]研究发现，对鸽子注射H9亚型禽流感及ND后，随着注射时间增加，A组和B组鸽子的抗体水平均下降，进行常规饲养并不会提高抗体水平。说明本试验饲喂使用枯草芽孢杆菌发酵牡丹籽粕会使机体产生免疫应答反应，从而提高机体的免疫能力。4结论日粮中添加发酵牡丹籽粕能够改善蛋鸡生产性能和蛋品质，在一定程度上能够提高血清抗体水平。说明发酵牡丹籽粕可以作为蛋鸡的非常规蛋白饲料来源，建议6%为最适添加比例。