随着禁抗政策的实施，开发绿色、安全的饲料添加剂成为目前研究的重点[1]。中草药具有来源天然、功能多样、安全可靠及经济环保等特点，是一种具有开发潜力的饲料添加剂[2]。中草药添加剂在禽类以及猪的养殖中应用较多，但在具有独特消化体系的反刍动物生产中应用相对较少。研究表明，女贞子富含17种氨基酸以及黄酮类、三萜类、多糖类等多种生物活性成分，具有提高生产性能、提高免疫力、抑菌、抗氧化等生物学功能[3]。蒲公英富含多酚类、多糖类、黄酮类及萜类等多种活性成分，具有调节免疫力、抑菌抗炎、保肝利胆、提高生产性能等作用[4]。益母草含有生物碱类、黄酮类、酚酸及挥发油类等多种活性成分，具有调节微循环、清热解毒、抗炎等作用[5]。本试验选取荷斯坦牛哺乳期犊牛为研究对象，并针对犊牛生理特点，筛选女贞子、蒲公英等4味中草药配伍制成中草药添加剂，考察此中草药添加剂对哺乳期犊牛生长性能、营养物质消化率及血清生化指标的影响，为后续中草药添加剂在反刍动物中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料中草药添加剂由女贞子、蒲公英、益母草、麦芽等配伍制成。中药材提取物（10∶1）均购自陕西康骏生物科技有限公司，按比例混匀，制成中草药添加剂。1.2试验动物试验犊牛由甘肃临夏回族自治州燎原养殖场提供。1.3试验设计选取体重（40±5）kg、健康状况相近的荷斯坦犊牛60头，随机分为4组，每组3个重复，每个重复5头牛。对照组（试验1组）犊牛饲喂基础日粮，试验组（试验2组、试验3组、试验4组）犊牛饲喂在基础日粮中添加0.1%、0.2%、0.4%的中草药添加剂的日粮。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.005.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米41.3代谢能/(MJ/kg)12.53苜蓿15.0粗蛋白/%17.31麦麸14.0粗脂肪/%3.85甜菜5.0粗灰分/%4.29玉米蛋白粉10.0中性洗涤纤维/%15.10豆粕5.0酸性洗涤纤维/%8.45棉粕4.5钙/%1.06氨基酸0.2磷/%0.59磷酸氢钙0.6食盐0.4预混料4.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 3 500 IU、VD 1 200 IU、VE 12 mg、Fe 20 mg、Cu 0.5 mg、Mn 7 mg、Zn 25 mg、Se 0.08 mg、Co 0.12 mg、烟酸0.65 mg、泛酸钙0.46 mg、叶酸0.01 mg。2.营养水平均为实测值。试验期56 d。每日7：00与14：00饲喂，犊牛自由饮水，其余均按养殖场饲养管理标准进行。。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始第1 d和最后1 d测量犊牛体重，记录犊牛每日采食量，计算平均日增重、平均干物质日采食量及料重比。平均日增重=(末重－初重)/试验天数(1)干物质日采食量=每头采食量/试验天数(2)料重比=干物质日采食量/平均日增重(3)1.4.2营养物质表观消化率每组随机选取3头犊牛，试验结束前3 d收集犊牛粪便，每日收集10%，分为两部分。一部分按每100 g鲜粪样加入20 mL 10%硫酸用于固氮；另一部分不加酸，置于-20 ℃保存。利用内源指示剂法测定营养物质表观消化率，以酸不溶灰分（AIA）为指示剂，计算干物质（DM）、粗蛋白（CP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、钙（Ca）、磷（P）的表观消化率[6]。营养物质表观消化率(%)=1－100×[(饲料中养分含量/饲料中AIA含量－粪中养分含量/粪中AIA含量)/(饲料中养分含量/饲料中AIA含量)](4)1.4.3血清生化指标试验结束时，每组选择3头犊牛，颈静脉采集血液，分离血清，按试剂盒检测说明测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、尿素氮（BUN）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量以及谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.4.4免疫指标使用1.4.3分离的血清检测免疫指标，按试剂盒说明测定免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子（TNF-α），试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行统计整理，采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1中草药添加剂对哺乳期犊牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验3组犊牛的平均日增重显著提高5.51%（P0.05），平均干物质日采食量显著提高2.28%（P0.05），料重比显著降3.15%（P0.05）。试验3组犊牛的平均日增重、平均日采食量均显著高于试验4组，料重比显著低于试验4组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.005.T002表2中草药添加剂对哺乳期犊牛生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(头·d)]干物质日采食量/[g/(头·d)]料重比对照组（试验1组）40.28±4.9168.77±1.46508.75±8.44b1 292.29±18.76b2.54±0.57b试验2组39.68±5.0468.25±1.28510.18±7.18b1 312.93±19.64a2.57±0.31a试验3组40.37±5.2870.43±1.34536.79±10.36a1 321.69±23.51a2.46±0.41c试验4组40.54±4.8769.02±1.14508.57±6.92b1 285.16±22.15b2.53±0.59b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05）；相同字母或无字母表示无显著差异（P0.05）；下表同。2.2中草药添加剂对哺乳期犊牛营养物质表观消化率的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，各试验组犊牛的DM消化率均显著提高（P0.05）；试验3组、试验4组犊牛的CP、NDF、ADF、Ca的表观消化率均显著提高（P0.05）。试验3组犊牛的NDF表观消化率最高，试验4组犊牛的ADF表观消化率最高，试验3组犊牛的P表观消化率最高。试验2组犊牛的ADF表观消化率与对照组差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.005.T003表3复方中草药添加剂对哺乳期犊牛营养物质表观消化率的影响组别DMCPNDFADFCaP对照组（试验1组）72.34±2.01c70.24±3.47c62.14±1.23c46.88±1.66c45.62±1.37b53.14±2.12b试验2组73.46±1.15b71.25±2.63c63.42±1.78b48.27±0.97c45.18±2.11b53.09±1.09b试验3组77.33±1.38a76.43±1.05b65.86±1.97a50.34±2.33b46.67±1.47a55.81±2.31a试验4组77.35±1.94a78.02±1.78a65.21±2.02a51.47±2.37a46.89±2.02a54.50±1.42b%2.3中草药添加剂对哺乳期犊牛血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照相比，试验3组、4组犊牛血清TP含量显著提高（P0.05）；各组间犊牛血清ALB、ALT、AST含量差异不显著（P0.05）；3组、4组犊牛血清BUN、TG含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.005.T004表4中草药添加剂对哺乳期犊牛血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)TG/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)BUN/(mmol/L)HDL-C/(mmol/L)LDL-C/(mmol/L)TC/(mmol/L)对照组（试验1组）52.27±1.01b28.53±2.370.35±0.04b24.36±1.3060.45±2.774.75±0.35a1.82±0.161.24±0.116.23±1.41试验2组51.42±1.04b29.04±1.680.35±0.02b24.56±1.1260.22±3.883.98±0.21b1.84±0.121.26±0.056.43±1.56试验3组54.30±0.88a29.23±1.160.31±0.01a23.06±0.7859.39±1.913.47±0.15c1.92±0.241.25±0.066.14±1.55试验4组53.85±0.91a29.76±2.030.32±0.02a23.28±1.8159.82±3.723.36±0.08c1.86±0.171.22±0.096.31±2.192.4中草药添加剂对哺乳期犊牛免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，各试验组犊牛的IgG、IgM含量均显著提高（P0.05）；试验2组、试验3组犊牛的IL-6、TNF-α含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.005.T005表5中草药添加剂对哺乳期犊牛免疫指标的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)IL-6/(ng/L)TNF-α/(ng/L)对照组（试验1组）8.05±1.31c2.28±0.121.13±0.21c466.08±16.66c95.62±16.51c试验2组9.36±0.45b2.45±0.131.41±0.11b468.29±14.97c98.18±20.82c试验3组9.23±1.01b2.48±0.051.56±0.06a476.69±22.13b106.67±12.67b试验4组9.81±1.06a2.29±0.081.51±0.02a489.93±25.72a118.89±10.57a3讨论3.1中草药添加剂对哺乳期犊牛生长性能的影响反刍动物主要以微生物和瘤胃消化为主，反刍动物胃肠道微生态平衡能够直接影响其生长性能。研究表明，多种中草药提取物可有效改善瘤胃内环境[7]。由于中草药中富含氨基酸、蛋白质、多糖、维生素等多种营养物质，能够补充动物生长所需的能量，提高生长性能[8-9]。郭晨阳[10]研究发现，在基础日粮中添加蒲公英、益母草、金银花和连翘等4味中草药提取物可提高瘤胃内微生物活性，促进瘤胃发酵，提高机体对饲料的利用程度。周博文[11]研究发现，蒲公英粗提取物可明显提高19~34日龄犊牛日增重，但对4~19日龄的犊牛日增重不明显，可能与消化系统发育尚未成熟对蒲公英粗提物消化吸收不足有关；但随着日龄增长，作用效果日益明显。左晓磊等[12]研究发现，在新疆巴音布鲁克羊日粮中添加不同剂量的黄芪、蒲公英等构成的复方中草药添加剂，可显著提高羊的平均日增重，降低干物质料重比与精料料重比。本试验结果与上述研究相一致，试验3组犊牛的平均日增重、平均日采食量均显著高于对照组，料重比显著低于对照组，说明在犊牛日粮中添加一定量中草药添加剂可以提高生长性能。随着中草药饲料添加剂的添加量增加，试验4组各项指标均低于试验3组，原因可能是犊牛初期对中草药适应性及适口性的影响，出现拒食或少食的情况；随着犊牛日龄增加，消化系统等各方面逐渐完善，此类情况有所改善。3.2中草药添加剂对哺乳期犊牛营养物质表观消化率的影响提高犊牛瘤胃中有益菌种的增殖、抑制有害菌群的生长、改善胃肠道内环境是提高犊牛对饲料中营养物质消化吸收的关键因素[13]。郗艳丽等[14]研究发现，女贞子多酚可有效抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌，最小抑菌浓度分别为300、600、150 mg/L，且600 mg/L的女贞子提取液对上述抑菌效果优于75%乙醇。黑育荣等[15]研究发现，女贞子中的齐墩果酸可通过抑制肽聚糖的生产及细菌生物膜的形成使其自溶，达到抑菌的效果。申恒然[16]在肉羊日粮中添加2%~8%的复方中草药超微粉，结果发现，复方中草药超微粉可显著提高肉羊CP、NDF、ADF、Ca、P表观消化率。本试验结果显示，与对照组相比，各试验组犊牛的DM消化率均显著提高；试验3组、试验4组犊牛的CP、NDF、ADF、Ca消化率显著提高，其中试验3组犊牛的NDF消化率最高，试验4组犊牛的AFD消化率最高，试验3组犊牛的P消化率最高。说明在犊牛日粮中添加本试验中草药添加剂可改善犊牛胃肠道内环境，提高胃肠道对饲料中营养物质的消化与吸收，提高营养物质消化率。原因可能与中草药中多种活性成分加快饲料原料的降解与转化速率，使胃肠道更易于对营养物质的吸收。但随着添加量增加，试验4组与试验3组间DM、NDF、Ca等消化率差异不显著，表明中草药安全健康，但在反刍中的添加量并非越多越好，以免因无法被吸收利用而造成养殖成本浪费。目前中草药在反刍动物上的应用研究较少，仍需研究者更进一步探究不同中草药在反刍动物中添加量的“阈值”。3.3中草药添加剂对哺乳期犊牛血清生化指标的影响血清中TP、ALB、BUN含量等指标可反映机体对蛋白质的吸收代谢情况，TG含量能够反映机体对脂类代谢情况，ALT、AST含量是反映机体肝细胞损伤程度的重要指标。鲁利萍等[17]在断奶犊牛日粮中添加1.0%~2.0%女贞子、益母草复方中草药添加剂发现，复方中药添加剂对犊牛TG、ALB的含量以及AST、ALT活性差异不显著，但2.0%组的血清中葡萄糖含量显著提高。高雅等[18]研究表明，在肉牛日粮中添加蒲公英粉可提高血清中葡萄糖、TP含量，降低BUN含量，TG、ALB含量虽有降低趋势，但差异不显著。李玉荣[19]研究表明，添加500 g/t的蒲公英粉可有效降低猪血清中TG和TC含量，与蒲公英中黄酮类化合物可调节血脂代谢有关。本试验结果与上述研究结果相一致，与对照组相比，试验3组、试验4组犊牛TP含量显著提高；各组间ALB、TG、HDL-C、LDH-C、TC的含量以及ALT、AST的活性差异不显著；试验3组、试验4组犊牛血清BUN含量显著降低。表明本试验采用中草药添加剂及剂量内可提高犊牛机体对饲料中蛋白质的吸收代谢，且对机体肝功能及脂类代谢方面无不利影响，可应用于犊牛日常生产。3.4中草药添加剂对哺乳期犊牛免疫指标的影响免疫球蛋白含量直接反映动物机体的免疫能力，IgG可预防机体感染，IgA可预防黏膜感染，IgM可预防犊牛初期败血症。细胞因子IL-6可同时介导体液免疫与细胞免疫。TNF-α是一种促炎性细胞因子，可促进T细胞产生各种炎症因子，引发炎症。研究发现，蒲公英与女贞子中的多糖类可显著提高犊牛血清中免疫球蛋白、白细胞介素及补体C3、C4含量，降低肿瘤坏死因子-α含量，增强免疫细胞活性提高机体免疫力及抗病能力[4,17,20]。本试验结果与上述研究结果一致，与对照组相比，各试验组犊牛IgG、IgM含量显著提高；IgA含量差异不显著；试验2组、试验3组犊牛血清IL-6、TNF-α含量显著降低。说明在犊牛日粮中添加本试验中草药添加剂可有效提高犊牛免疫力及抗病能力，提升犊牛生产成绩。4结论在哺乳期犊牛日粮中添加女贞子、蒲公英、益母草、麦芽等4味中草药制成的中草药饲料添加剂可以促进犊牛对饲料中营养物质的消化利用率，提高平均日增重和平均日采食量，降低料重比，改善机体脂类代谢水平，增强机体免疫力，提高抗病能力，建议添加量0.2%为宜。