复合微生态制剂是多种有益微生物复合而成的生物制品[1]，具有纯天然、无残留、无耐药性、绿色环保等优点。饲料禁抗政策的实施，使复合微生物制剂成为理想的抗生素替代品之一[2-5]。泌乳期奶牛极易受妊娠、泌乳等生理变化以及环境应激影响，这些变化均会导致泌乳期奶牛生产性能和机体健康状况下降[6]、奶制品食品安全、奶牛养殖经济效益下降。微生态制剂能够改善反刍动物瘤胃微生态平衡，提高营养物质吸收利用率，改善反刍动物免疫力和身体健康状况。刘冰许等[7]研究表明，微生态制剂能够提高荷斯坦奶牛的产奶量，增加牛乳中的乳脂含量。李光梅等[8]研究表明，复合微生态制剂能够提高羊血清中总抗氧化能力（T-AOC）以及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性，提高青海细毛羊的抗氧化功能。魏小霜等[9]研究表明，微生态制剂能够提高犊牛血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）含量，提高犊牛免疫功能。微生态制剂在提高奶牛的产奶量以及改善羊、肉牛的抗氧化功能和免疫功能等方面发挥着巨大作用，但相关报道较少。本试验探究复合微生态制剂的不同添加剂量对奶牛生产性能、抗氧化功能和免疫功能的影响，以期为复合微生态制剂在奶牛养殖生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料复合微生态制剂购自山东微尔生物工程有限公司，主要由芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、植物多肽等组成，活菌总数均大于3×109 CFU/g。荷斯坦奶牛由沈文义家庭农场提供。1.2试验设计选用胎次、泌乳天数、产奶量、体重相近的60头荷斯坦奶牛随机分成3组，每组4个重复，每个重复5头奶牛。对照组、0.05%添加组、0.10%添加组分别在基础日粮中添加0、0.05%、0.10%复合微生态制剂。基础日粮组成及营养水平见表1。试验期间奶牛采用单栏饲养，自由采食饮水。试验期45 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.004.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米青贮27.0产奶净能/(MJ/kg)6.85苜蓿甘草17.0粗蛋白/%15.83玉米32.0钙/%1.21豆粕14.0磷/%0.68麸皮7.0磷酸氢钙0.5碳酸钙0.5食盐1.0预混料1.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 4 000 IU、VD 1 200 IU、VE 50 IU、Fe 30 mg、Mn 20 mg、Zn 30 mg、Cu 8 mg、Se 0.3 mg、Co 0.1 mg。2.营养水平产奶净能为计算值，其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生产性能每日记录奶牛的产奶量，根据试验期内奶牛的总产奶量，计算平均日产奶量。试验结束时采集乳样，利用乳品分析仪测定乳蛋白率、乳脂率、乳糖率、乳干物质率和体细胞数。平均日产奶量=试验期产奶总量/试验天数(1)1.3.2抗氧化功能试验结束时，利用一次性10 mL注射器于颈静脉处采集血液，37 ℃放置2 h，置于2~8 ℃放置2 h，5 000 r/m离心10 min，取上清液。使用试剂盒测定血清样品中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，操作步骤参考试剂盒说明书。1.3.3免疫功能操作步骤按照说明书，利用试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定血清样品中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）含量。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合微生态制剂对奶牛生产性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，0.05%添加组奶牛的平均日产奶量和乳蛋白率显著提高（P0.05），体细胞数显著降低（P0.05）；0.10%添加组奶牛的平均日产奶量、乳蛋白率和乳脂率显著提高（P0.05），体细胞数显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.004.T002表2复合微生态制剂对奶牛生产性能的影响组别平均日产奶量/[kg/(头·d)]乳蛋白率/%乳脂率/%乳糖率/%乳干物质率/%体细胞数/(×104个/mL)对照组31.25±0.89c2.98±0.08c3.51±0.11b5.11±0.1611.21±0.5228.87±2.65a0.05%添加组32.31±0.87b3.21±0.09b3.57±0.12ab5.24±0.1511.42±0.5625.98±2.56b0.10%添加组33.38±0.92a3.33±0.09a3.69±0.14a8.28±0.1811.51±0.5722.84±2.61c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。与0.05%添加组相比，0.10%添加组平均日产奶量、乳蛋白率显著提高（P0.05），体细胞数显著降低（P0.05）。2.2复合微生态制剂对奶牛抗氧化功能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，0.05%添加组奶牛的T-AOC显著提高（P0.05），SOD、CAT的活性虽有所升高，但差异不显著（P0.05）；0.10%添加组奶牛的T-AOC、SOD、CAT活性均显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）。与0.05%添加组相比，0.10%添加组奶牛的T-AOC显著提高（P0.05），其他各项指标差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.004.T003表3复合微生态制剂对奶牛抗氧化功能的影响组别T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组10.21±0.47c15.62±0.89b6.98±0.32b310.57±9.872.98±0.24a0.05%添加组10.97±0.46b16.27±0.88ab7.14±0.41ab312.56±9.142.75±0.26ab0.10%添加组11.87±0.50a16.71±0.84a7.42±0.39a315.84±9.852.63±0.28b2.3复合微生态制剂对奶牛免疫功能的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，0.05%组奶牛血清IgG、IL-2、IFN-γ含量显著提高（P0.05）；0.10%添加组奶牛的血清IgA、IgG、IL-2、IFN-γ含量显著提高（P0.05）。与0.05%添加组相比，0.10%添加组奶牛血清IgG、IL-2含量显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.004.T004表4复合微生态制剂对奶牛免疫功能的影响组别IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)对照组0.21±0.04b1.68±0.10c1.18±0.0921.74±0.76c365.21±3.8798.75±2.12b0.05%添加组0.26±0.05ab1.85±0.11b1.21±0.0923.18±0.81b366.24±3.74102.14±2.34a0.10%添加组0.30±0.05a2.02±0.10a1.26±0.0824.17±0.87a368.14±3.89104.15±2.39a3讨论3.1复合微生态制剂对奶牛生产性能的影响产奶量和乳品质是评价泌乳奶牛生产性能的两个重要指标。产奶量直接影响奶牛养殖场的经济效益；乳品质中乳蛋白、乳脂、乳糖等是乳制品的主要成分，涉及食品安全与消费者健康，乳品质直接影响乳制品的营养价值[10]。产奶量和乳品质等生产性能取决于营养物质的摄入量和转化效率，饲喂微生态制剂可以增加反刍动物瘤胃内有益菌种群密度，提升反刍动物瘤胃发酵能力；且微生态制剂能够产生维生素、氨基酸、短链脂肪酸等多种营养物质，进而提高蛋白质等营养物质的消化和吸收。金红岩等[11]研究表明，微生态制剂能够显著改善牦牛瘤胃内微生物菌群，增加瘤胃液中丙酸浓度，提高牦牛瘤胃的发酵能力。谢景龙等[12]研究表明，泌乳期荷斯坦奶牛每日饲喂40 g米曲霉培养物可将平均日产奶量提高4.02%。刘冰许等[7]研究表明，泌乳高峰期荷斯坦奶牛基础日粮中添加100 g/d微生态制剂能够提高奶牛的产奶量，增加牛乳中的乳脂含量。本试验中，荷斯坦奶牛基础日粮中添加0.10%复合微生态制剂可显著提高平均日产奶量、乳蛋白率和乳脂率，降低体细胞数，与金红岩等[11]、谢景龙等[12]、刘冰许等[7]的研究结果一致。3.2复合微生态制剂对奶牛抗氧化功能的影响动物机体的抗氧化功能主要依靠抗氧化酶系统发挥作用，T-AOC体现机体抗氧化酶系统对外刺激的代偿能力；SOD和GSH-Px能够调解氧化与抗氧化的平衡；CAT能够使细胞膜免受氧化损伤；MDA是体内脂质过氧化反应的终产物[13]。微生态制剂具有改善机体抗氧化系统、减轻氧化应激造成损害的能力。王改芳[14]研究发现，在杜寒杂交肉羊基础日粮中添加10.0%酵母菌复合微生态制剂可显著提高血清中SOD活性和T-AOC。于宝君等[15]研究发现，在肥育猪基础日粮中添加微生态制剂可将血清中T-AOC提高13.06%，将血清中MDA含量降低13.89%。魏帅等[16]研究发现，在蛋鸡基础日粮中添加复合微生态制剂后显著提高血清中SOD、GSH-Px活性以及T-AOC，降低血清MDA含量。本试验中，荷斯坦奶牛基础日粮中添加0.10%复合微生态制剂可显著提高奶牛血清中SOD、CAT活性以及T-AOC，降低MDA含量，表明复合微生态制剂能够提高奶牛血液的抗氧化能力。3.3复合微生态制剂对奶牛免疫功能的影响免疫球蛋白是一类具有抗体活性的球蛋白，主要起免疫调节作用的是IgA、IgG、IgM。机体内IgA、IgG、IgM含量越高，免疫功能越强。细胞因子是由免疫细胞合成和分泌的小分子多肽，具有调节免疫应答、参与炎症反应等多种生物学功能，IL-2可促进淋巴细胞增殖和发育，提高机体的免疫耐受能力；IFN-γ能够活化巨噬细胞和自然杀伤细胞，调节机体免疫应答反应[17]。目前，使用免疫球蛋白、细胞因子含量评价动物机体免疫功能的研究较多。谢大识等[18]研究表明，断奶仔猪日粮中添加400 mg/kg复合微生态制剂可显著提高血清中IgG、IgA、IL-2、IFN-γ含量。陈西风等[19]研究表明，肉鸡日粮中添加0.1%、0.2%复合微生态制剂可显著提高血清中IgA、IgG含量。卢浩诚等[20]研究表明，育肥后期肉牛日粮中添加微生态制剂可显著提高血清中IgA、IgM、IgG含量。本研究中，荷斯坦奶牛基础日粮中添加0.10%复合微生态制剂可显著提高奶牛血清中IgG、IgA、IL-2、IFN-γ含量，与谢大识等[18]、陈西风等[19]、卢浩诚等[20]的研究结果相似，表明微生态制剂能够提高免疫球蛋白和细胞因子含量，诱导和调节免疫应答反应，增强动物机体的免疫力。4结论本试验中，荷斯坦奶牛基础日粮中添加0.10%复合微生态制剂可显著提高奶牛的生产性能、抗氧化功能和免疫功能。