有益微生物制剂在消化道繁殖和代谢过程中可产生挥发性脂肪酸、消化酶和多种B族维生素，具有激发小肠段上皮细胞对葡萄糖的转运和吸收等功能[1-2]，对动物机体有益，有望成为抗生素的有效替代品。有研究表明，日粮中适当添加有益微生物制剂可改善机体免疫功能，调节肠道功能平衡[3-5]。目前，针对有益微生物制剂开展的相关研究多集中于制剂的作用机制，主要探究畜禽在食用芽孢杆菌微生物制剂饲料后肠道微生物菌群和免疫功能会受到的影响；但在有益微生物制剂对饲料养分消化利用方面的研究较少[6-8]。本研究选择黄羽肉鸡作为试验动物，在黄羽肉鸡日粮添加芽孢杆菌微生物制剂，研究芽孢杆菌对黄羽肉鸡生长性能、养分（蛋白质及氨基酸）利用率以及盲肠菌群数量的影响，以期为相关应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验采用芽孢杆菌微生物制剂由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌混合制成，孢子含量为2×1010 CFU/g，由武汉雄峰科技有限公司提供。黄羽肉鸡来自某基地。采用全封闭鸡舍，试验开始前已做好消毒工作。1.2试验设计试验选取240羽7日龄体重接近、健康状况良好的快长型黄羽肉鸡，随机分为2组，每组6个重复，每个重复20只。试验期49 d，分为2个阶段。7~28日龄为第一阶段，29~56日龄为第二阶段。对照组肉鸡饲喂基础日粮；试验组在基础日粮中加入250 g/t芽孢杆菌微生物制剂。1.3试验日粮试验基础日粮主要原料选用玉米、豆粕、次粉和油糠等食材，原料的配比参考美国NRC肉鸡饲养标准（1994）肉鸡营养需要以及及饲养标准（NY/T 33—2004）。基础日粮组成及营养水平见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.010.T001表1基础日粮组成及营养水平Tab.1Basic diet composition and nutritional level项目7~21日龄22~56日龄原料组成/%玉米50.0050.63小麦次粉7.8210.17油糠13.0015.00进口鱼粉00酶力肽2.002.12豆粕11.005.00棉粕4.005.00菜粕2.001.85大米蛋白粉4.006.00磷酸氢钙1.301.30石粉1.501.80食盐0.400.40猪油1.601.55DL-蛋氨酸0.180.05赖氨酸盐酸盐0.200.13预换混料1.001.00合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)11.6312.13干物质/%83.6483.66粗纤维/%19.8018.02粗蛋白/%2.431.68蛋氨酸/%0.890.97赖氨酸/%0.480.35蛋氨酸+肽氨酸/%0.820.72苏氨酸/%1.030.77色氨酸/%0.240.19钙/%0.920.95总磷/%0.690.72有效磷/%0.350.33注 ：1.预混料为每千克日粮提供：VA 15 000 IU、VD3 2 000 IU、VE 20 mg、VK3 1.5 mg、VB1 2.0 mg、VB2 8.0 mg、VB12 0.03 mg、烟酸30 mg、叶酸0.75 mg、泛酸钙15 mg、VB6 3.0 mg、生物素0.06 mg、胆碱400 mg、铜20 mg、铁90 mg、锌50 mg、锰70mg、碘0.38mg、硒0.16mg。2.营养水平均为计算值。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始和结束，试验鸡空腹称重。试验期间观测记录各重复耗料量以及试验鸡生长状况，计算平均日增重、平均日采食量以及料重比。平均日增重=（末重-初重）/试验天数（1）平均日采食量=各重复采食量/各重复鸡数（2）料重比=平均日采食量/平均日增重（3）1.4.2营养物质表观消化率试验结束前7 d，每个重复选择1只中等体重鸡，置入代谢笼开展行氮代谢试验。预试期3 d，正式试验期7 d。代谢试验期收集试鸡的排泄物，粪便烘干制成风干样品。参照《饲料分析与饲料质量检测技术》，测定日粮和排泄物中常规养分；采用waters pico-TagAA分析仪，测定排泄物和试验日粮氨基酸的表观消化率。营养物质表观消化率=(养分摄入量-养分排泄量)/养分摄入量×100%（4）1.4.3盲肠菌群数量取0.5 g匀质的盲肠内容物，加入到4.5 mL无菌生理盐水，振荡混匀，取0.5 mL；依次稀释至10~6倍。选择3个合适的稀释度，由高稀释度开始，吸取菌液加入各培养基平皿内，每个平皿3个稀释度，每个稀释度做3个重复，37 ℃培养24~48 h，采用平板计数法进行计数，并计算每克内容物所含菌数。培养基为各细菌的选择性培养基，乳酸杆菌采用烛缸法进行厌氧培养，其余均采用需氧培养。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 13.0统计软件序进行数据分析，Duncan's进行多重比较和相关回归分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1芽孢杆菌微生物制剂对黄羽肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验组肉鸡的末重、平均日增重和平均日采食量均显著升高（P0.05）。试验组肉鸡的料重比略低于对照组，但差异不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.010.T002表2芽孢杆菌微生物制剂对黄羽肉鸡生长性能的影响Tab.2Effect of Bacillus microbial preparation on production performance of yellow feather broilers组别初重/g末重/g平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比对照组617.5±8.541 594.3±44.6834.84±1.8890.21±4.472.62±0.08试验组613.4±4.881 648.3±33.82*36.71±1.06*95.88±5.78*2.61±0.17注 ：与对照组相比，*表示差异显著（P0.05）；下表同。2.2芽孢杆菌微生物制剂对黄羽肉鸡蛋白质和氨基酸表观消化率的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验组肉鸡对饲料中蛋白质、苏氨酸、甘氨酸、胱氨酸、组氨酸、脯氨酸的表观消化率均显著升高（P0.05）。两组肉鸡天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸表观消化率差异不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.010.T003表3芽孢杆菌微生物制剂对黄羽肉鸡蛋白质和氨基酸表观消化率的影响Tab.3Effect of Bacillus microbial preparation on protein and amino acid digestibility of yellow feather broilers项目对照组试验组蛋白质72.52±2.3377.68±2.10*天冬氨酸88.24±1.6891.92±0.50苏氨酸72.28±5.7480.44±2.32*谷氨酸90.82±1.0193.78±0.64丝氨酸87.55±0.8890.57±0.75甘氨酸74.51±0.5579.21±0.84*丙氨酸86.21±0.8188.34±1.27胱氨酸75.61±2.7483.77±2.80*蛋氨酸93.24±4.1394.34±1.68异亮氨酸86.34±0.8188.64±0.42亮氨酸90.44±0.1591.72±0.91组氨酸87.15±0.4392.95±1.87*苯丙氨酸92.22±5.0495.24±0.61脯氨酸84.18±4.5289.68±6.38*%2.3芽孢杆菌微生物制剂对黄羽肉盲肠微生物菌群的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组肉鸡盲肠乳酸杆菌、双歧杆菌数量均显著升高（P0.05），大肠杆菌数量显著降低（P0.05）。试验组肉鸡盲肠肠球菌数量虽略高于对照组，但差异不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.04.010.T004表4芽孢杆菌制剂对黄羽肉鸡盲肠微生物菌群的影响Tab.4Effect of Bacillus microbial preparation on intestinal microbiota of yellow feather broilers组别乳酸杆菌肠球菌双歧杆菌大肠杆菌对照组6.52±0.057.26±0.087.28±0.158.47±0.07试验组8.04±0.05*7.32±0.087.98±0.03*7.01±0.09*lgCFU/g3讨论在养殖行业，长期使用抗生素可造成的养殖动物自身免疫力降低及抗生素残留等问题，寻找合适的抗生素替代品成为研究热点。有研究表明，乳酸菌、芽孢杆菌等益生菌具有代替抗生素应用于畜禽饲料的潜力[9-10]。其中，芽孢杆菌因易于贮藏、运输而逐渐作为抗生素替代品，并取得了较好的应用效果[11]。有研究发现，芽孢杆菌以芽孢形式被养殖动物摄入有助于促进养殖动物的生长[12-13]。因此，发展芽孢杆菌的基础以及应用研究具有重要意义。本研究中，试验组在基础日粮中添加芽孢杆菌微生物制剂，黄羽肉鸡的日增重和饲料转化效率得到提升，表明黄羽肉鸡生长后期采用芽孢杆菌微生物制剂替代抗生素具有一定可行性。微生物制剂能够刺激肠道局部免疫反应，促进机体对病原细胞的免疫攻击和对病原菌的抵抗力，同时其代谢产物在消化道形成的酸性环境能够抑制有害菌群生存[14]。上述作用均利于促进动物的生长。本研究虽并未开展对肉鸡的相关免疫指标变化情况的研究，但测定了肉鸡后肠道的微生物菌群情况，得到的结果同样可以证实上述观点。在基础日粮中添加芽孢杆菌微生物制剂，可对黄羽肉鸡盲肠微生物情况产生有益的影响[15]。本研究中，试验组使用芽孢杆菌微生物制剂，盲肠乳酸杆菌和双歧杆菌的数量升高，大肠杆菌数量显著降低，但对肠球菌的影响不大，与上述研究结果一致。芽孢杆菌作用于盲肠可抑制有害菌生长，促进有益菌的增殖。有研究发现，采用添加枯草芽孢杆菌的日粮饲喂AA肉仔鸡，结果显示，l、3周龄肉仔鸡粪便大肠杆菌数量显著降低，3周龄仔鸡肠道中乳酸杆菌的数量显著增加，沙门氏菌的数量显著降低，但并未对大肠杆菌数量产生显著影响[16]，结论与本研究类似。但芽孢杆菌无法在消化道内定植，只有通过动物不断采食添加芽孢杆菌的饲料才能够发挥作用。4结论有益微生物制剂对肉鸡的生长以及对养分的吸收具有较好的应用效果。在基础日粮中加入适量的芽孢杆菌微生物制剂，可有效改善肉鸡的肠道微生物菌群情况，降低大肠杆菌数量，有助于肉鸡更好地吸取饲料中的养分，促进其健康生长。