随着宠物市场的扩增，宠物对犬粮的口感需求增加。影响犬粮适口性的因素很多，除加工方式、风味剂种类外，选用原料也是重要影响因素之一[1-2]。市场常见的动物蛋白原料有鸡肉粉、鱼粉、肉骨粉等，常见的脂肪原料有鱼油、鸡油等。近年来，黑水虻蛋白和油脂在宠物食品中应用也逐渐成为热点[3-4]。黑水虻蛋白的氨基酸组成均衡、含量丰富[5]，黑水虻油脂中脂肪酸组成多样，含有丰富的亚麻酸[6]，具有较高的营养价值。犬的嗅觉灵敏，会影响犬的进食和对食物的选择[7]。关于风味剂的香味物质组成[8]已有相关研究，但关于黑水虻蛋白和油脂作为主要蛋白和油脂来源在犬粮中香味物质构成的研究较少。因此，试验选取传统的鸡蛋白、油脂来源（鸡肉粉与鱼油鸡油）与黑水虻蛋白、油脂分别作为犬粮的主要蛋白或油脂来源，制成3种犬粮，通过饲喂比格犬比较犬粮的适口性；利用SDE-GC-MS提取鉴定分析犬粮中的香味物质，旨在探索以黑水虻蛋白粉或油脂为主要动物蛋白和油脂来源制成犬粮的适口性及其具体的风味构成，以期为黑水虻蛋白粉与油脂在犬粮中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验日粮选用3种膨化犬粮，3种犬粮的原料配方以及营养水平见表1。3种犬粮均在广州清科生物技术有限公司加工制成。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.T001表13种犬粮的原料配方及营养水平项目对照组黑水虻蛋白替代组黑水虻油脂替代组原料组成/%玉米25.025.025.0红薯粉12.012.012.0面粉10.010.010.0玉米蛋白粉5.05.05.0甜菜粕2.52.52.5鸡肉粉20.00.020.0黑水虻脱脂蛋白粉0.020.00.0鸭肉粉8.08.08.0鱼粉2.52.52.5肉骨粉3.03.03.0磷酸氢钙1.01.01.0预混料1.01.01.0混合油脂8.08.00.0黑水虻油脂0.00.08.0固体风味剂2.02.02.0合计100.0100.0100.0营养水平能量/(MJ/kg)19.9219.2519.01粗蛋白/%32.7230.2132.55粗脂肪/%12.7213.5812.79干物质/%91.2091.2992.66有机物/%93.6892.4993.25注：1.预混料购自山东东阳饲料原料厂。2.营养水平均为实测值。1.2适口性试验设计1.2.1试验设计试验于广东省广州市华南农业大学试验动物中心进行。选取20只成年、健康的比格犬（8公、12母），随机分为2组。试验期2 d，试验前进行预试验，记录每只犬的日采食量，保证日采食量至少满足NRC（2006）推荐的正常能量，确保每只犬每日260 g的采食量。维持需要量（MJ/d）=0.54 MJ/kg×BW0.75 (1)试验开始前对试验犬进行免疫驱虫处理，试验期犬自由饮水，每日清理犬舍，每日8：30与18：00饲喂。采用双碗试验，试验犬全部采用单笼饲养（1.2 m×1.0 m×1.1 m），每个笼前端中部有2个固定的、完全相同的食碗。试验1组饲喂犬粮1和犬粮2两碗各65 g，试验2组饲喂犬粮1和犬粮3两碗各65 g。每次饲喂交换碗的位置。1.2.2第一口偏好性与采食率试验犬开始进食时观察，记录每只狗的第一口偏好性。一碗犬粮吃完时，拿出另一碗称其剩余粮重，记录两种犬粮的采食量。1.3狗粮中香味物质的萃取及分析试验设计1.3.1材料与仪器同时蒸馏萃取装置（天长市东祥玻璃仪器厂）、RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、BYN100-2氮吹仪（上海秉越电子有限公司）、98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）、气相色谱-质谱联用仪（Shimadzu）。1.3.2狗粮中香味物质的萃取试验香味物质的提取工艺采用SDE方法。利用同时蒸馏装置，分别称取20 g狗粮和200 mL蒸馏水作为水相，放入500 mL圆底烧瓶，接到装置的一端，采用电热套进行控制加热；另外量取60 mL二氯甲烷作为萃取溶剂，加入250 mL圆底烧瓶，恒温水浴加热，待两边沸腾开始计时，萃取过程持续2 h。萃取结束收集提取液，使用旋转蒸发仪将得到的萃取液浓缩至约5 mL，氮吹仪浓缩至1 mL，加入适量乙酸苯乙酯作为内标。1.3.3气相色谱条件ON-FFAP毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 µm）；载气：氦气，不分流进样；流速为1.5 mL/min。升温程序：初始温度为50 ℃，以3 ℃/min升温至240 ℃，保持5 min；进样口温度250 ℃。1.3.4质谱条件离子源温度200 ℃，电子能量70 eV；接口温度250 ℃；扫描范围35~450 amu。1.3.5定性定量分析将所得图谱与NIST、FFNSC数据库筛选比对，采用气相色谱峰面积归一法对所得到的狗粮的香味物质相对含量进行计算。1.4数据统计与分析对经过GS—MS分析后的数据进行收集分析整理，采用归一法计算各化合物的相对含量，Excel对所有的数据计算并汇总，将各样品中的香气成分按种类进行统计分析。2结果与分析2.1适口性比较（见表2）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.T002表2适口性比较组别第一口偏好性占比采食率犬粮137.5062.50犬粮262.5054.09犬粮135.0047.45犬粮365.0052.55%由表2可知，犬粮2和犬粮3的第一口偏好性占比、采食率均高于犬粮1。2.2同时蒸馏萃取法提取3款犬粮中的香味物质GC-MS成分分析（见图1~图3、表3）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.F001图1犬粮1的挥发性成分GC-MS总离子流图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.F002图2犬粮2的挥发性成分GC-MS总离子流图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.F003图3犬粮3的挥发性成分GC-MS总离子流采用GC-MS联用技术对用同时蒸馏萃取法提取得到3种犬粮中挥发性化合物进行化学成分分析得到总离子图。由图1~图3可知，犬粮2与犬粮3的主要香味物质组成与犬粮1存在差异。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.T003表3同时蒸馏萃取法提取3款犬粮中的香味物质GC-MS成分分析序号化合物名称相对含量/%序号化合物名称相对含量/%犬粮1犬粮2犬粮3犬粮1犬粮2犬粮31棕榈酸26.0018.1328.8318γ-戊内酯0.75——2反油酸12.650.238.0619正十五酸0.75——310-顺-十七碳烯酸6.68——20(Z)-7-十六碳烯醛0.74——4十七烷5.51——211-氯代辛烷0.7——52,6,10,14-四甲基十九烷4.46——22月桂酸乙酯0.690.50.396月桂酸4.4016.41—2318-甲基十九烷醇三甲基硅醚0.66——7肉豆蔻酸4.233.812.8424十九烯-3,5-dien-酮0.63——8硬脂烷醛3.84——253-壬烯-2-酮0.620.390.69硬脂酸3.15—3.47262-(12-十五碳炔基氧基)四氢-2H-吡喃0.62——10丁基苯甲醇2.22—0.8127邻苯二甲酸二甲酯0.590.790.74114-甲基-1-(2,3,4,5-四氢-5-甲基[2,3'-双环呋喃])-5-yl-2-戊酮1.24——282-正戊基呋喃0.590.230.45122,6-(1,1-二甲基乙基)-4-羟基-4-甲基-2,5-环己二烯-酮1.13——29十五醇0.59——13(Z)-5-十九烯1.01——30糠醇0.57—0.514十五烷0.97——312-戊基癸酮0.540.29-15十八烷0.93——32二十二烷酸二十二烷基酯0.5——16正二十一烷0.92——33反-2-十一碳烯醛0.5——17邻苯二甲酸二酯0.77——34反,反-2,4-癸二烯醛0.470.29—352-甲氧基-4-乙烯基苯酚0.47——683-氨基-4-溴-1H-吡唑-5-羧酸0.12——36癸酸乙酯0.44——691-环己酮-乙烯酮0.08——37(Z)-7-十四烯酸0.43-0.770十一烷酸内酯0.070.46—38(Z)-(13,14-环氧)十四烷胺-11-en-1-醇乙酸盐0.39——714,4-二甲基-1-(2,7-辛二烯)-环丁烯0.05——392-丁基-2-辛烯醛0.390.320.33721-丁磺酰胺-2-羟基苯0.05——40棕榈酸甲酯0.36——73(N)-环丙基-N'-(2-糠基)-草酰胺0.05——41(E,E)-9,11-亚油酸甲酯0.36——74亚油酸—9.540.5642十九酸0.34——75十八烯酸—9.11—43萘0.340.25-76正十七烷二酸—4.45—441-辛烯-3-醇0.32-0.2177十七碳烯酸—3.85—45(E)-十八烯酸乙酯0.31——782,6,10,14-四甲基十五烷二酸—3.58—46十八碳二烯-[9,12]-酸乙酯0.310.2—794-甲基-1-(2,3,4,5-四氢-5-甲基(2,3'-双环呋喃)-5-yl)-2-戊酮—1.03—47糠醛0.30.310.2380正癸酸—0.983.4748十七烷酮0.280.17-81丁羟甲苯—0.97—499-溴壬酸乙酯0.270.27-82二丁酯—0.97—503,6,6-三甲基-双环庚烷-2-酮0.27——83十六烷基环八硅氧烷—0.92—51二十二碳六烯酸0.270.32—84十九烯—0.87—523,5-二叔丁基-4-羟基苯甲醛0.270.330.2185正十八烷—0.830.3753壬醛0.260.190.2586十五烷二酸—0.74—54十六甲基八硅氧烷0.23—0.587乙烯基愈疮木酚—0.72—55十四烷0.22—0.1588十四甲基环七硅氧烷—0.70.656苯甲醛0.220.140.1989环己二烯酮—0.69—57十六烷0.20.75-90十二甲基环六硅氧烷—0.620.3358三氟醋酸盐油醇0.2——91十六烷基七硅氧烷—0.580.2559(E)-6-十八烯-1-醇-乙酸盐0.19——92四十三烷—0.57—60苯乙基硬脂酸0.180.15—936-十九烷-4-en-1-yl-3-甲基丁酸甲酯—0.55—612-壬烯醛0.18—0.1594十八醛—0.542.73624-羟基-3-叔丁基-苯甲醚0.18——95十六烷酸甲酯—0.54—63吲哚0.18—0.2396十二酸苯甲酯—0.46—643-辛烯-2-酮0.16——97月桂酰胺—0.440.5265(S)-二氢猕猴桃内酯0.15——98邻苯二甲酸二辛酯—0.44—662-辛烯醛0.15——99苯并二氢呋喃-2-羧酸—0.43—67十六碳酰氯0.15——100间羟基苯甲酸乙酯—0.42—101十七烯—0.42—1352-乙酰基-6-甲基吡嗪—0.13—102十五酸—0.42—1361,3,2-二氧硼杂,2,4-二乙基-5-甲基-6-丙基—0.13—103十甲基环五硅氧烷—0.39—137三聚甲醛—0.110.12104丁烯腈—0.39—138菲—0.11—105(Z)-6-二十一碳烯-11-酮—0.39—1393,5-辛二烯-2-醇—0.1—106双环庚烷-2-1-十九烷—0.36—140仲辛酮—0.1—1071-溴-3-甲基丁烷—0.36—141丁位十二内酯—0.10.14108乙酸-3,7,11,15-四甲基-十六烷基酯—0.32—142丁位十六内酯—0.1—1092,4-二叔丁基苯酚—0.320.25143环己烷羧酸-(1H-四唑-5-yl)酰胺—0.08—110苯酚—0.290.231441,2-二苯氧基乙烷—0.051421113,5-二甲氧基苯乙酮—0.29—145棕榈油酸——8.291121,1'-双二苯基膦甲烷3-甲基苯—0.27—1462-戊酮,4-甲基-1-(2,3,4,5-4氢-5-甲基[2,3'-双环呋喃]-5烷)——1.411135H-环戊并[b]吡啶—0.27—147亚麻酸——1.26114二氢猕猴桃内酯—0.24—1482-羟基-环十五酮——1.18115乙酸甲酯9-油酸—0.24—149十五烷酸——1.07116雪松醇—0.21—150亚油酸甲酯——1.051173,3',5,5'-四甲基联苯—0.21—1512,6-二(叔丁基)-4-羟基-4-甲基-2,5-环己二烯-1-酮——1.011181-溴-2,3,5-三甲基苯—0.2—152反-二环[3.3.1]壬烯-2-en-9-醇——0.911192-乙基己醇—0.19—153邻苯二甲酸——0.71204-羟基壬烯醛—0.19—154十二烷酸甲酯——0.61215-甲硫基戊腈—0.19—155桃醛——0.581222-乙酰基吡咯—0.190.33156环十五烷酮——0.54123(4-(1-甲基乙基)苯基)-甲酮—0.19—157双环[2.2.1] 庚烷,2-1-十九烷——0.52124十四烯酸—0.19—1581-氯辛烷——0.481254-环戊烯-1,3-二酮—0.170.12159顺-5-十二碳烯酸——0.45126二苯胺—0.17—160正十七烷——0.45127正二十烷—0.15—161姥鲛烷——0.451282,2',5,5'-四甲基联苯基—0.15—162邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯——0.451291,2,3,4-四氢-9-丙基-蒽—0.15—163珍珠酸——0.431307,9-二叔丁基-1-氧杂螺[4.5]癸-6,9-二烯-2,8-二酮—0.15—164壬酸——0.41131十七烷酸—0.15—165棕榈酸乙酯——0.411321-乙丙烯基-吡嗪—0.14—166油酸——0.37133二正戊基酮—0.14—167十三酸——0.371341,1'-(1-甲基亚乙基)4-甲基苯—0.14—1682-十五烷酮——0.35169顺式-10-十七烯酸——0.33191乳腈——0.14170邻苯二甲酸二丁酯——0.33192甲基壬基甲酮——0.14171端羟基12酸——0.31193甲基乙烯基亚硝胺——0.12172(Z)6,(Z)9-Pentadecadien-1-醇——0.45194(+)-茨醇——0.12173橙花叔醇——0.27195反-2-辛烯醛——0.12174(E,E)-2,4-癸二烯醛——0.251963-甲基十五烷——0.121753-乙基-3-甲基十九烷——0.231972-乙炔基-6-甲基吡嗪——0.1176环五聚二甲基硅氧烷——0.231981-庚烯-3-酮——0.1177正十五烷——0.23199正己醇——0.081782-十一烯醛——0.212002,2',5,5'-四甲基联苯——0.081792-甲基-2-(3-甲基)-1-环己酮——0.212014-氧代环己基(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基环丙烷甲酸甲酯4-甲基苯磺酸盐——0.081801-十六烯——0.21202邻苯二甲酸二异丁酯——0.08181二十七烷-1-烯——0.19203庚烯醛——0.06182柠檬酸三丁酯——0.192042-己烯-1-基酯正十二烷酸——0.06183羟基丙酮——0.172052-癸酮——0.06184(L)-抗坏血酸-2,6-二棕榈酸酯——0.17206三环癸烷——0.061853,5辛二烯醇——0.152077-甲基-Z-8,10-二烯醛——0.04186甲基酮——0.152082,5辛二酮——0.041872-酯-环辛酮——0.152092-壬酮——0.0418810-环己基十九烷——0.152106-环己基-十三烷——0.04189亚麻酸甲酯——0.15211二甲基三硫——0.02190油腈——0.142125-三萜烯——0.02注：“—”表示无。由表3可知，3种犬粮通过SDE-GC-MS法测定出的香味物质共有212种。犬粮1检出73种，犬粮2检出95种，犬粮3检出103种。犬粮1中棕榈酸、反油酸、10-顺-十七碳烯酸、十七烷、2,6,10,14-四甲基十九烷、月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂烷醛、硬脂酸和丁基苯甲醇10种成分占总香味物质含量的70.92%。犬粮2中棕榈酸、月桂酸、亚油酸、十八烯酸、正十七烷二酸、十七碳烯酸、肉豆蔻酸、2,6,10,14-四甲基十五烷二酸8种成分占总香味物质含量的68.87%。犬粮3中棕榈酸、肉豆蔻酸、棕榈油酸、反油酸、正癸酸、硬脂酸、十八醛7种成分占总香味物质的67.69%。2.33种犬粮中香味物质的韦恩图及香气物质含量（见图4、表4）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.F004图43种犬粮中香味物质的韦恩图由图2可知，3种犬粮中均被鉴定出的物质仅有12种，分别是棕榈酸、反油酸、肉豆蔻酸、月桂酸乙酯、9-壬烯-2-酮、邻苯二甲酸二甲酯、2-正戊基呋喃、2-丁基-2-辛烯醛、糠醛、3,5-二叔丁基-4-羟基苯甲醛、壬醛和苯甲醛。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.08.028.T004表43种犬粮中各类香气物质含量分类犬粮1犬粮2犬粮3种类相对含量/%种类相对含量/%种类相对含量/%酸类1259.201872.811971.98烷类914.1373.95153.18醛类117.3092.42145.48酯类135.58156.02124.98酮类94.96124.00154.86醇类53.9130.5093.06杂环类21.2171.3730.89烯类21.0621.2930.43酚类10.4731.3220.48醚类20.8400.0000.00其他71.35196.31114.65由表4可知，3种犬粮所含的主要化合物为酸类、酯类、醛类、烷类和酮类。相对犬粮1、犬粮2和犬粮3所含的酸类物质种类较多且相对含量较高，烷类、醛类物质相对含量较低。3讨论不同动物蛋白原料或动物油脂原料来源所制成的犬粮所含的主要化合物均为酸类、酯类、醛类、烷类和酮类。本试验中，与犬粮1相比，犬粮2和犬粮3检测出更多的香味物质，且具有较高的酸类物质含量以及较低的烷类和醛类物质含量；3种犬粮酯类和酮类物质的含量差值较小。结果表明，与鸡肉粉和鱼油鸡油相比，黑水虻蛋白粉和油脂会给犬粮带来更丰富的香味物质，提供较多的酸类物质的风味以及较低的烷类和醛类物质的风味。食品的香味物质中，酸类化合物阈值较高，对整体风味影响较小，但作用不容忽视[9]。酯类物质通常气味较浓郁，一般呈香甜果味，香气比较持久，对食品风味具有较大的贡献[10]；醛类物质具有脂肪的香气，是肉香味的重要组成部分[11]；酮类化合物多数阈值较高，可能是醇类的氧化物或者是酯类分解的产物[12]，部分酮类充当着形成杂环化合物的重要中间体，对肉香味的形成具有重要的作用[13]。3种犬粮中共同含有的香味物质只有12种，说明在具体成分构成上仍然存在较大差异。本试验中，犬粮1中含有10-顺-十七碳烯酸、十七烷、2,6,10,14-四甲基十九烷和硬脂烷醛；犬粮2中含有十八烯酸、正十七烷二酸、十七碳烯酸和2,6,10,14-四甲基十五烷二酸；犬粮3含有棕榈油酸、亚麻酸和2-羟基-环十五酮。与犬粮1相比，犬粮2中亚油酸、月桂酸的含量较高，反油酸含量极低；犬粮3中的肉豆蔻酸、正癸酸和十八醛含量较高，反油酸含量较低。犬粮2和犬粮3的适口性均优于犬粮1，说明十八烯酸十七烷二酸、十七碳烯酸，2,6,10,14-四甲基十五烷二酸、棕榈油酸、亚麻酸、2-羟基-环十五酮等化合物，或者较高含量的亚油酸、月桂酸、豆蔻肉酸、正癸酸和十八醛可能对狗粮的适口性起到积极的作用。4结论分别以黑水虻蛋白和油脂作为主要动物蛋白来源和油脂来源制成的犬粮适口性均优于以鸡肉粉和鱼油鸡油为主要动物蛋白来源和油脂来源所制成犬粮。与鸡肉粉+鱼油鸡油组犬粮相比，添加黑水虻蛋白与油脂的犬粮中分离出的香味物质种类更多，酸类物质相对含量更高，烷类和醛类物质相对含量更低。