低蛋白质饲粮指饲粮中降低1%~4%的粗蛋白质，添加合成氨基酸，使必需氨基酸含量达到正常饲粮水平，减少豆粕等蛋白质原料的使用量，降低粪便中氮的排泄量[1]。海南猪包括定安猪、屯昌猪、临高猪和文昌猪等4个品系，具有抗粗饲能力强、肉质好等优点，缺点是生长速度慢、屠宰率低[2]。海南养猪企业配制饲料多参考NRC（2012）[3]和养猪饲养标准（2004）[4]的营养需要量标准。因海南地理位置，饲养标准存在蛋白质水平推荐量过高引起的饲料利用率低和氮排放增加的情况[5-9]。本课题组前期研究表明，海南猪饲粮粗蛋白质水平降低2%可以提高饲粮中的赖氨酸[10]或蛋氨酸[11]水平，不会对海南猪生产性能造成显著影响。苏氨酸是机体的必需氨基酸，在促进猪的生长和提高免疫力方面具有显著作用[12]。本试验以海南猪为研究对象，探讨低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪生产性能和饲料养分表观消化率的影响，为科学配制海南猪饲料、提高海南猪的养殖水平提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验在海南省农业科学院澄迈县永发镇科研基地进行，选取健康的、体重（55.31±3.09）kg的阉割海南猪公猪64头，采用单因子随机试验设计，随机分为4组，每组4个重复，每个重复4头猪。对照组饲粮粗蛋白质水平16%，苏氨酸水平0.6%；试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组的粗蛋白水平14%，苏氨酸的添加水平分别为0.6%、0.8%和1.0%。试验组参考对照组平衡赖氨酸、色氨酸、缬氨酸和精氨酸。预试期7 d，正式试验期35 d，试验猪饲喂粉料。1.2试验饲粮基础饲粮组成参考中国猪饲养标准（2004）[4]配制，试验组蛋白质水平降低2%，试验饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.009.T001表1试验饲粮组成及营养水平（风干基础）项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组原料组成/%玉米72.5071.0070.8071.03豆粕22.5015.6115.8016.00小麦麸0.006.906.696.06L-赖氨酸0.000.150.150.15色氨酸0.000.040.040.04苏氨酸0.000.050.270.47缬氨酸0.000.100.100.10精氨酸0.000.150.150.15大豆油1.002.002.002.00石粉0.700.700.700.70磷酸氢钙1.301.301.301.30食盐0.400.400.400.40膨润土0.600.600.600.60预混料1.001.001.001.00合计100.00100.00100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.25012.25012.25012.250粗蛋白/%16.00014.00014.00014.000赖氨酸/%0.7700.7700.7700.770蛋氨酸+半胱氨酸/%0.7180.7180.7180.718苏氨酸/%0.6000.6000.8001.000钙/%0.6600.6600.6600.660有效磷/%0.4700.4700.4700.470注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 1 900 IU、VD3 190 IU、VE 15 IU、VK3 0.45 mg、VB1 1 mg、VB2 3 mg、VB6 1.5 mg、VB12 15 mg、烟酸14 mg、泛酸10 mg、叶酸0.3 mg、生物素0.05 mg、氯化胆碱0.4 mg、铁90 mg、铜5 mg、锌90 mg、锰3 mg、碘0.12 mg、硒0.26 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验猪采用开放式猪舍饲养，常规免疫，自由饮水，管理按照猪场管理手册进行。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验结束，空腹称各组试验猪的体重、饲料剩余量，统计试验猪的平均日增重、平均采食量和料重比。平均日增重=(末重-初重)/测定天数(1)平均日采食量=重复饲料采食总量/(重复动物数量×测定天数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清指标试验结束，每组挑选接近平均体重的8头猪，每重复2头，进行前腔静脉采血10 mL，常温静置2 h，放入冷冻离心机3 500 r/min离心10 min取血清。使用日本日立公司生产的7020全自动生化仪测定天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性以及总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）和尿素氮（BUN）含量等。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量等抗氧化指标采用南京建成生物工程研究所。试验南京建成生物工程研究所试剂盒测定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）免疫指标，测定仪器为美国伯乐公司生产的多功能酶标仪。1.4.3养分表观消化率采用四分法进行饲料样品的采集，各组饲料样品采集500 g，海南猪粪便的收集采用4N盐酸不溶灰分指示剂法，连续3 d收集代谢试验猪的粪便。每日排泄物滴加4 mol/L盐酸混匀，将粪样倒入平皿中在65 ℃烘箱干燥至恒重，室内回潮24 h，-20 ℃保存。饲料及粪便中养分表观消化率的检测参照张丽英[13]方法进行。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel初步整理，采用SAS 9.0软件进行统计分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验Ⅰ组海南猪的平均日增重显著低于对照组和其他两个试验组（P0.05）；试验Ⅲ组比试验Ⅰ组提高了10.62%（P0.05）。试验Ⅱ组海南猪的料重比最低，与其他各组差异不显著（P0.05）。研究表明，在饲粮中补充添加苏氨酸可提高海南猪的生长性能。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.009.T002表2低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[g/(头·d)]料重比对照组55.26±3.2383.31±4.60801.49±7.83a2 820.91±3.32ab3.52±0.20试验Ⅰ组55.25±2.4080.41±3.11723.81±3.61b2 581.13±2.13b3.57±0.31试验Ⅱ组55.94±0.8384.57±2.54818.15±8.64a2 725.18±3.45ab3.33±0.25试验Ⅲ组55.79±2.1683.88±4.99802.38±7.58a2 855.36±4.19a3.56±0.26注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验Ⅰ组海南猪血清ALB含量以及试验Ⅱ组海南猪血清BUN含量显著降低（P0.05）；试验Ⅰ组海南猪血清HDL-C含量显著高于对照组和试验Ⅲ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.009.T003表3低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)GLU/(mmol/L)TG/(mmol/L)LDL-C/(mmol/L)HDL-C/(mmol/L)BUN/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)对照组70.40±5.5041.64±3.28a5.69±0.640.37±0.211.04±0.220.72±0.11b6.08±0.87a42.60±4.1641.00±5.22试验Ⅰ组67.64±3.4336.70±1.72b5.57±0.890.34±0.041.08±0.230.96±0.17a5.28±0.58ab43.40±3.9146.40±5.78试验Ⅱ组69.72±4.1937.94±3.83ab5.14±1.250.38±0.061.04±0.230.81±0.15ab4.52±0.76b42.80±3.8640.75±3.59试验Ⅲ组71.78±7.0141.12±3.52ab5.39±1.550.32±0.051.18±0.160.73±0.17b5.12±0.82ab45.20±5.9344.33±4.462.3低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，试验Ⅰ组海南猪的血清T-AOC显著低于对照组和试验Ⅲ组（P0.05），SOD活性显著低于对照组（P0.05）。试验Ⅱ组、试验Ⅲ组海南猪的血清MDA含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.009.T004表4低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/L)CAT/(U/L)SOD/(U/L)GSH-Px/(U/L)MDA/(μmol/L)对照组0.36±0.03a0.05±0.0024.32±8.06a118.25±4.526.58±0.12a试验Ⅰ组0.31±0.02b0.04±0.0212.48±1.55b114.73±3.895.52±0.27ab试验Ⅱ组0.33±0.04ab0.03±0.0119.88±3.09ab122.61±3.644.99±0.22b试验Ⅲ组0.35±0.02a0.04±0.0221.63±6.50ab127.08±4.374.89±0.58b研究表明，当降低饲粮中的粗蛋白质后，T-AOC和SOD表现为显著降低；当补充添加苏氨酸后，试验猪血清中T-AOC和SOD活性呈上升趋势；与对照组相比，试验Ⅰ组海南猪血清中MDA的含量有降低趋势，补充苏氨酸后，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组海南猪的血清MDA含量显著降低。2.4低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，海南猪血清的IgG和IgM含量差异不显著（P0.05）。试验Ⅰ组、Ⅱ组海南猪血清IgA含量显著低于对照组（P0.05）。研究表明，当低蛋白质饲粮中补充添加苏氨酸后，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组海南猪血清中IgA的含量呈现升高趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.009.T005表5低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清免疫指标的影响组别IgAIgGIgM对照组0.030±0.001a0.54±0.160.83±0.19试验Ⅰ组0.020±0.001b0.78±0.170.99±0.22试验Ⅱ组0.022±0.002b0.72±0.080.73±0.28试验Ⅲ组0.030±0.001a0.68±0.200.76±0.35g/L2.5低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪养分表观消化率的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，试验Ⅰ组海南猪的粗蛋白质、钙和磷的表观消化率均有所提高，但差异不显著（P0.05）。试验Ⅱ组和试验Ⅲ组试验猪的粗蛋白质和磷的表观消化率均显著提高（P0.05）。试验Ⅱ组和试验Ⅲ组海南猪的粗蛋白质表观消化率分别比对照组提高12.03%和13.46%；试验Ⅱ组和试验Ⅲ组海南猪磷的表观消化率分别比对照组提高9.02%和8.00%，钙表观消化率虽有所提高，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.009.T006表6低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪养分表观消化率的影响组别粗蛋白质表观消化率钙表观消化率磷表观消化率对照组74.50±3.44b71.71±1.5942.49±0.33b试验Ⅰ组81.28±4.65b72.82±2.0444.32±0.43ab试验Ⅱ组83.46±3.12a73.81±1.2246.32±0.39a试验Ⅲ组84.53±1.38a73.25±0.8445.89±0.39a%3讨论3.1低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪生长性能的影响当饲粮蛋白质水平降低一定程度，可以造成饲粮中必需氨基酸和非必需氨基酸含量低或比例不当。因此，在配制低蛋白质饲粮时，合成氨基酸的添加对动物生长非常关键[14]。研究发现，饲粮中添加苏氨酸可提高生长猪的生长速度，降低料重比[15]，缺乏苏氨酸可以导致猪生长速度变慢和采食量降低[16-17]。本试验表明，不添加苏氨酸的低蛋白质饲粮可造成海南猪平均日增重降低；补充苏氨酸后，海南猪的生长速度能够逐渐恢复至正常饲粮水平，海南猪的采食量得到提高，与上述研究结果一致[18]。本试验中，各试验组海南猪的料重比差异不显著，但以试验Ⅱ组的料重比最低。分析认为在海南热带条件下，只要合成氨基酸搭配合理，海南猪即可饲喂低粗蛋白质饲粮，达到正常饲粮的生产效果，甚至能够提高生产性能，建议生产中推荐使用。3.2低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清生化指标的影响动物血清生理生化指标含量可以反映机体内物质代谢，也是衡量动物健康与否的重要指标[8]。ALB具有重要的营养作用，可以保证细胞内液、外液和组织液之间的稳定交换，同时白球比可反映机体的抵抗力[19]。本试验中，试验Ⅰ组海南猪血清ALB含量显著低于对照组。当低蛋白质饲粮补充苏氨酸后，ALB水平逐渐提高，说明海南猪血清ALB含量受饲粮蛋白质水平的影响较大，补充添加苏氨酸后可缓解海南猪缺乏蛋白质的症状，从而使海南猪血清ALB升高，也可能是海南猪所处的生长环境和生长阶段所致。BUN是动物机体内蛋白质和氨基酸代谢的最终产物，BUN含量与动物蛋白质利用率相关。研究表明，动物饲粮蛋白质水平与血清BUN含量呈负相关[20]，饲粮中蛋白质水平越高，血清中BUN含量越高，饲料利用越不充分；当降低饲粮中蛋白质水平时，动物血清中的BUN含量越低[11]。本试验结果表明，低蛋白质饲粮添加苏氨酸可以显著降低海南猪血清BUNA含量。当试验猪饲粮中蛋白质降低时，试验猪血清中BUN有降低趋势，当饲粮中补充添加苏氨酸，试验猪血清中BUN水平开始上升，证明BUN也可以作为猪饲料蛋白质利用情况的一个敏感指标。HDL-C在机体内起抗动脉粥样硬化作用。本试验中，低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清中HDL-C含量影响达到显著水平；当饲粮中蛋白质降低时，海南猪血清中HDL-C呈升高趋势；当饲粮中补充添加苏氨酸后，试验猪血清中HDL-C的含量表现出降低趋势。江勇等[21]研究发现，低蛋白质饲粮添加苏氨酸会造成北京鸭血清HDL-C含量降低。本试验中是蛋白质水平影响HDL-C，还是其他原因所致，仍需后续深入研究。3.3低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清抗氧化指标的影响T-AOC、CAT、SOD、GSH-Px和MDA是组成动物机体重要的抗氧化防御体系，主要作用是抵御抗氧化应激和清除体内的自由基[19]，提高机体的免疫力和促进动物生长。机体抗氧化指标不仅可以作为判断动物的抗氧化能力，而且与生产性能、血液生理生化指标一起作为判断动物营养需要量、健康等综合性指标[22]。本试验中，降低饲粮粗蛋白质2%，导致海南猪血清SOD活性和T-AOC均显著降低，原因可能是降低海南猪日粮蛋白质水平2%，影响海南猪的正常蛋白质需要，导致生长速度和抗氧化能力等指标的下降。补充添加苏氨酸后，试验猪血清中SOD活性和T-AOC呈上升趋势，由于苏氨酸的添加弥补因蛋白质水平降低造成的影响，从而使海南猪血清SOD活性和T-AOC回升，说明苏氨酸的添加对提高低蛋白质饲粮的海南猪血清抗氧化能力方面具有一定的促进作用。MDA是存在于体内一种自由基，具有细胞毒性作用。机体内含量越高，危害越大[23]。本试验发现，试验猪血清MDA含量呈下降趋势，试验Ⅱ组和试验Ⅲ组猪血清中MDA含量显著降低，说明低蛋白质饲粮添加苏氨酸可以发挥降低血清MDA含量的作用。3.4低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪血清免疫指标的影响苏氨酸在促进动物生长方面的功能已有报道。在调节动物机体免疫力方面，肖长艇[24]、姜宁[25]和张艳蕾等[26]分别在猪、鹅和兔报道添加苏氨酸可以提高动物机体的免疫力。本试验表明，饲粮中降低蛋白质水平能够显著降低海南猪血清IgA含量；添加苏氨酸，试验猪血清IgA的含量开始升高，原因可能是低蛋白质饲粮添加苏氨酸可提高海南猪的生长速度，使海南猪的健康状态得到改善，从而促进海南猪机体免疫力的提高。3.5低蛋白质饲粮添加苏氨酸对海南猪养分表观消化率的影响低蛋白质氨基酸平衡饲粮是养猪行业提高饲料利用率和粪便氮排放的主要措施之一。甄吉福等[27]研究表明，低蛋白饲粮条件下，添加谷氨酸可提高生长猪的蛋白质利用率。本课题组前期研究表明，低蛋白饲粮条件下补充赖氨酸和蛋氨酸均可提高海南猪的蛋白质利用率，降低粪便中氮的排放量。低蛋白质饲粮在提高畜禽饲料利用率和降低粪便氮排放方面的作用已得到认可。本试验结果表明，试验Ⅰ组海南猪的粗蛋白质、钙和磷的表观消化率与对照组比较均有所提高，当降低饲粮蛋白质水平2%，提高饲粮苏氨酸水平，试验猪的粗蛋白质和磷的表观消化率达到显著水平，证明低蛋白质饲粮会提高海南猪饲粮粗蛋白质的利用率。低蛋白质饲粮条件下，猪通过提高小肠中胰蛋白酶和肠激酶等消化酶方式，提高摄入有限蛋白质的利用率，进而满足自身对蛋白质的需要[28-29]。本试验证明低蛋白质饲粮补充苏氨酸可以提高饲料利用率，对海南猪的生长速度并无太大影响。因此，低蛋白质饲粮技术可以在海南作为降低集约化养猪场氮排放的主要措施。4结论在海南猪生长中期，当饲粮粗蛋白质水平由16%降至14%，饲粮中苏氨酸的含量提高至0.8%，海南猪可以获得与正常饲粮组相近的生产效果。