仔猪断奶应激是养猪生产中关注的重点。良好的仔猪断奶技术能够提高母猪的年生产力、猪场经济效益等。但仔猪断奶受多种因素影响，如环境、饲料等养殖环境变化均可能导致仔猪腹泻、吸收不良等症状[1]。在断奶仔猪日粮中使用抗生素能够促进仔猪生长，增强免疫力[2]，但滥用抗生素存有很大的安全隐患，因此，寻找抗生素类替代品成为目前研究热点。植物提取精油成分中的酚类、醛类、萜类和部分氧化物能够促进动物生长，增强机体免疫力，且无毒副作用，是理想抗生素替代品。从牛至属种植物中提取的牛至油，其特有的多酚类和萜类物质具有抑菌、抗氧化等功效，成分中含量相对较高的乙酸桧萜烯酯以及特有的百里香酚和香芹酚能够为日粮增香，增强肠道屏障，帮助肠道消化吸收[3-5]。研究表明，牛至油能够增强仔猪消化道内部分酶的活性，降低腹泻率，改善消化能力，提高仔猪生长性能[6]。牛至油对改善动物的免疫功能也具有重要影响作用。韩飞等[7]研究发现，牛至油能够显著促进NK细胞活性和单核-巨噬细胞的功能。但近年来，关于探究牛至油对畜禽免疫功能影响的研究较少。因此，本试验在仔猪日粮中添加牛至油，研究牛至油对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响，为牛至油在断奶仔猪生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料牛至油，主要成分为香芹酚和百里香酚（各占5%）。1.2试验设计试验于湖南省辰河养猪专业合作社进行。选取胎次、体重相近、体况良好的26日龄断奶“长×大”二元杂交仔猪20头，公、母比例大致相同，随机分为组，对照组仔猪饲喂基础日粮，试验组仔猪饲喂分别添加250、450、650 mg/kg牛至油的日粮，每组5个重复，每个重复1头仔猪。基础日粮按照早期断奶仔猪营养标准配制，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.007.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米30.00消化能/(MJ/kg)14.60膨化玉米30.00粗蛋白质/%18.00豆粕10.00赖氨酸/%1.30膨化全脂大豆11.00蛋氨酸/%0.35乳清粉6.00苏氨酸/%0.87血浆蛋白粉1.00色氨酸/%0.24鱼粉5.00钙/%0.83柠檬酸1.00有效磷/%0.68蔗糖2.00预混料4.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 15 000 IU、VD 8 000 IU、VE 60 IU、VK2 0.5 IU、VB 130 mg、VB2 10 mg、VB6 30 mg、VB12 30 μg、烟酸250 mg、D-泛酸240 mg、叶酸1.1 mg、氯化胆碱510 mg、生物素1.3 mg、铜50 mg、铁110 mg、锰40 mg、锌70 mg、碘0.6 mg、硒0.3 mg、赖氨酸2.4 g、蛋氨酸0.8 g、苏氨酸0.7 g、色氨酸0.6 g。2.营养水平中消化能和有效磷为计算值，其余均为实测值。试验按照原场内饲养管理与免疫程序进行，对猪舍进行彻底消杀。仔猪饲养在保育床中，自由采食、饮水，粪便每日清扫1次，期间不对仔猪使用药物。试验期30 d。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验第1、10、20、30 d晨饲前，仔猪逐头称重。每日9：30~10：30、17：30~18：30观察仔猪情况，记录个体死亡和淘汰情况。若有死淘猪，及时结料，称重。记录每日给料量、剩余料、损耗料，计算平仔猪均日增重、平均日采食量、料重比和腹泻率。平均日增重=（末重-初重）/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)腹泻率=腹泻总次数/(仔猪头数×试验天数)×100%(4)1.3.2盲肠微生物数量无菌环境下，称取所有试验猪盲肠内容物0.5 g于氨苄西林瓶，加入生理盐水，旋涡振荡器振荡3 min，准确量取0.5 mL稀释液至4.5 mL生理盐水的氨苄西林瓶，稍加振荡，按照稀释10倍为1个浓度梯度，设置5个浓度梯度，依次将盲肠内容物样本接种于相应的培养基皿，每个梯度设置3个重复，37 ℃培养24 h，进行菌落计数。接种细菌为大肠杆菌、沙门氏菌、双歧杆菌、乳酸杆菌和总需氧菌，使用的培养基分别为伊红美兰琼脂、HE琼脂培养基、BBL培养基、MRS培养基和普通培养基。1.3.3血清生化指标试验第15、30 d，对所有试验仔猪采空腹前腔静脉血4~5 mL于10 mL非抗凝血真空管中，放置至析出血清，3 000 r/min离心15 min，收集血清，-20 ℃保存。利用放射免疫法测定血清中白细胞介素-2含量，采用双缩脲法和溴甲酚绿法分别测定血清总蛋白含量和白蛋白含量，计算血清球蛋白含量；比色法测定血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A、丙二醛含量以及谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性。血清球蛋白含量=总蛋白含量－血清白蛋白含量(5)1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 17软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），LSD法多重比较。结果用“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1牛至油对断奶仔猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验组断奶仔猪末重分别比对照组提高4.99%、6.03%、6.47%（P0.01），650 mg/kg牛至油组仔猪的增重最多。与对照组相比，试验组断奶仔猪的平均日采食量显著升高（P0.05），650 mg/kg牛至油组仔猪的日采食量增加最多；试验组断奶仔猪平均日增重极显著升高（P0.01），650 mg/kg牛至油组仔猪的平均日增重最多；添加450 mg/kg牛至油组仔猪的料重比最低；试验组仔猪的腹泻率极显著下降（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.007.T002表2牛至油对断奶仔猪生长性能的影响项目对照组250 mg/kg牛至油组450 mg/kg牛至油组650 mg/kg牛至油组P值初重/kg8.23±0.018.22±0.038.22±0.068.22±0.040.921末重/kg20.23±0.12Bb21.24±0.40Aa21.45±0.10Aa21.54±0.10Aa0.006平均日采食量/[g/(头·d)]704.94±4.62b761.77±10.91a765.71±10.01a769.42±10.01a0.043平均日增重/[g/(头·d)]399.65±4.12Bb433.86±12.94Aa440.89±3.15Aa441.65±4.65Aa0.004料重比1.77±0.041.77±0.081.73±0.051.75±0.040.687腹泻率/%2.77±041Aa1.18±0.53Bb0.98±0.39Bb0.92±0.43Bb0.006注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2牛至油对断奶仔猪盲肠微生物数量的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验组仔猪盲肠的沙门氏菌极显著低于对照组，且650 mg/kg牛至油组数量最少（P0.01）；450、650 mg/kg牛至油组仔猪盲肠双歧杆菌和总需氧菌均显著高于对照组（P0.05）；试验组仔猪的乳酸菌数量极显著高于对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.007.T003表3牛至油对断奶仔猪盲肠微生物数量的影响项目对照组250 mg/kg牛至油组450 mg/kg牛至油组650 mg/kg牛至油组P值大肠杆菌4.74±0.134.63±0.084.66±0.034.64±0.030.721沙门氏菌5.63±0.10Aa5.37±0.12Bb4.90±0.23Bb4.40±0.13Cc0.002双歧杆菌5.84±0.28b6.24±0.21a6.42±0.24a6.84±0.18a0.043乳酸杆菌5.74±0.21Bb6.24±014Aa6.64±0.27Aa6.88±0.16Aa0.004总需氧菌5.77±0.31b6.18±0.13b6.68±0.32a6.62±0.23a0.046lg（CFU/g）2.3牛至油对断奶仔猪血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组断奶仔猪血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力以及免疫球蛋白A以及免疫球蛋白M含量均显著提高（P0.05）。试验组断奶仔猪血液中白细胞介素-2含量极显著高于对照组（P0.01），以450 mg/kg牛至油组含量最高。试验组断奶仔猪血清中丙二醛含量显著低于对照组（P0.05）。试验组断奶仔猪血清中球蛋白、总蛋白、葡萄糖以及免疫球蛋白G含量均差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.007.T004表4牛至油对断奶仔猪血清生化指标的影响项目对照组250 mg/kg牛至油组450 mg/kg牛至油组650 mg/kg牛至油组P值球蛋白/(g/L)27.56±1.0827.68±0.3427.70±0.5327.64±0.320.882总蛋白/(g/L)60.19±1.3060.78±1.9861.39±1.5161.13±1.320.455葡萄糖/(mmol/L)5.03±0.104.78±0.814.87±0.174.93±0.320.820超氧化物歧化酶/(U/mL)116.37±1.25b126.92±7.13a133.34±9.43a132.27±8.43a0.033谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)440.32±10.53b478.47±8.28a498.11±5.31a501.82±4.92a0.039丙二醛/(μmol/L)2.96±0.24a2.37±0.12b1.89±0.27b1.79±0.23b0.027总抗氧化能力/(U/mL)2.62±0.12b3.50±0.16a4.00±0.04a4.13±0.11a0.032免疫球蛋白A/(g/L)0.85±0.03b0.96±0.07a1.10±0.19a1.17±0.15a0.022免疫球蛋白M/(g/L)7.87±0.03b8.58±0.14a9.14±0.52a8.85±0.26a0.042免疫球蛋白G/(g/L)0.81±0.030.83±0.070.84±0.130.84±0.070.052白细胞介素-2/(ng/L)346.75±11.08Bb374.50±23.43Aa402.02±43.25Aa399.43±32.74Aa0.0033讨论3.1牛至油对断奶仔猪生长性能的影响植物提取物在促畜禽生长上具有同等抗生素的优良功效，可作于抗生素的优良替代品[8-9]。本试验发现，饲喂添加250 mg/kg的牛至油日粮可以显著提高断奶仔猪的平均日增重，以添加450 mg/kg组仔猪的平均日增重最高；牛至油内含有特有的百里香酚和香芹酚对断奶仔猪采食具有显著促进作用，低浓度250 mg/kg牛至油能够达到显著促进作用，能够降低断奶仔猪腹泻率和料重比。姚佳等[10]研究表明，饲喂不同水平100、200、300 mg/kg的20%微囊化牛至油的日粮，对断奶仔猪生长性能具有显著改善作用，添加量达400 mg/kg时料重比开始下降。林海春等[11]在日粮中添加不同含量牛至油发现，断奶仔猪的日增重显著提高，600 mg/kg牛至油组显著降低料重比。研究发现，在断奶仔猪日粮中添加牛至油，能够显著提高日粮的蛋白质和干物质的消化率，提高仔猪的日增重，降低腹泻率，对仔猪应激也有缓解作用[12-13]。马玉芳等[14]研究发现，日粮中添加牛至油能够显著促进断奶仔猪的采食量，添加量越高促进效果越显著。以上研究均与本试验结果一致，表明日粮中添加牛至油能够提高断奶仔猪的平均日采食量、断奶仔猪日增重和末重，降低断奶仔猪的腹泻率，对断奶仔猪的生长发育具有重要促进作用。3.2牛至油对断奶仔猪盲肠微生物数量的影响仔猪断奶期，肠道发育不完善、微生物区系尚不稳定、易受多种环境影响、易使断奶仔猪发生应激反应，导致肠道微生物环境失衡，发生仔猪腹泻[15-16]。猪盲肠常有食糜残留，此处的菌群数量和种类皆为最多。此环境的菌群中，有益菌主要为乳酸杆菌和双歧杆菌，有害菌之一为沙门氏菌。大肠杆菌在机体稳定期间无不良反应，但机体处于应激状态或免疫力不佳时，易引发机体腹泻[17]。牛至油对稳定肠道微生物平衡，促进肠道健康具有重要作用[12,18]。本试验发现，日粮中添加牛至油能够显著提高断奶仔猪盲肠内乳酸杆菌和双歧杆菌的数量，降低沙门氏菌数量，大肠杆菌的数量差异内不显著，但呈降低的趋势。雷必勇[19]研究发现，牛至油对仔猪肠道黏膜生长发育和控制肠道大肠杆菌数量具有积极作用。李海兰等[20]在日粮中添加酸化剂和牛至油，结果发现，酸化剂和牛至油有利于维持仔猪肠道微生物菌群的稳定平衡。韩庆功等[6]发现，日粮中添加牛至油，可以使断奶仔猪粪便中大肠杆菌数量下降，增加乳酸杆菌、双歧杆菌数量，有益菌群和有害菌群的控制效果优于添加抗生素的日粮。以上研究结果均与本试验结果一致，牛至油对于维护断奶仔猪肠道微生物平衡和稳定具有积极调控作用。3.3牛至油对断奶仔猪免疫功能的影响仔猪断奶后胰腺分泌多种酶的活性下降，断奶给仔猪带来的应激也会造成器官组织的实质性损害，因此提高断奶期仔猪的免疫力十分必要。血清总蛋白含量反映日粮中蛋白质水平及动物对蛋白质吸收代谢程度，免疫球蛋白是由浆细胞分泌的免疫物质；白细胞介素主要源于活化T细胞对机体的免疫应答具有重要作用；IgA、IgG、IgM是3种骨髓B淋巴细胞产生能够参与体液免疫调控的免疫球蛋白，其含量直接关系机体的免疫力[20-22]。本试验发现，日粮中添加牛至油能够显著提高断奶仔猪血清中免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶含量，极显著提高白细胞介素-2含量，显著降低丙二醛含量，说明牛至油能够显著提高断奶仔猪的免疫能力和抗氧化能力。张勇等[12]研究发现，单独添加牛至油，断奶仔猪血清中总蛋白、球蛋白、白细胞介素、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M含量和超氧化物歧化酶活性均显著提高，牛至油具有增强断奶仔猪免疫性能的作用。郝丹丹等[23]研究发现，日粮中添加牛至油能够提高畜禽血清中免疫球蛋白G含量以及脾脏中抗炎因子的表达量。王亮等[24]研究发现，日粮中添加牛至油可以提高断奶仔猪血清免疫球蛋白含量和抵抗力。韩庆功等[6]研究日粮中添加牛至油饲喂不同日龄的断奶仔猪，结果发现，添加牛至油后，仔猪的猪瘟抗体水平显著提高11%~15%，提高机体免疫力具有重要影响作用。Halas等[25]发现，在断奶仔猪日粮中添加牛至、肉桂能够提高断奶仔猪非特异性细胞免疫和体液免疫。Yi等[26]研究发现，日粮中添加一定剂量的牛至油可以显著降低肌肉pH值和血清肌酸激酶以及皮质醇水平，预示牛至油具有提高猪抗氧化能力的作用。Zeng等[13]研究发现，在日粮中添加牛至油可以显著提高断奶仔猪血清中总抗氧化能力和超氧化物歧化酶活力，对提高仔猪抗氧化能力具有显著作用。4结论本试验条件下，日粮中添加牛至油可以显著提高断奶仔猪免疫力、抗氧化能力；综合考虑，建议添加450 mg/kg牛至油量效果较好。