随着克氏原螯虾养殖密度逐渐提高，导致养殖病害现象频繁发生，但化工类药物和各类抗生素的滥用容易造成药物残留和耐药性等问题[1]。因此，抗生素替代品成为目前研究的热点。目前，关于酵母培养物[2]、微生态制剂[3]、酶制剂[4]、中草药[5]等抗生素替代品的研究较多。抗菌肽（AMPs）又称抗微生物肽、宿主防御肽（HDPs），是一类自然界中存在广泛，且具有生物活性的小分子多肽[6]，是生物先天免疫的重要活性物质，多数具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等生物活性[7]，在动植物防御系统中发挥重要作用[8]。调节抗菌肽水平在维持或改善鱼类健康方面具有巨大潜力[9]。杆菌七肽是肠杆菌属分泌，由核糖体合成的七肽羧基，末端天冬氨酸经过不可水解的氨基磷酸酯键连接单磷酸腺苷形成的小分子抗菌肽[10]。本试验通过在饵料中添加不同水平的杆菌七肽，研究杆菌七肽对克氏原螯虾生长性能、血清以及肝胰脏生化指标的影响，为其在克氏原螯虾全价配合饵料中的使用提供参考。1材料与方法1.1试验设计与试验饵料根据克氏原螯虾配合饲料标准（DB42/T 1572—2020）配制其全价配合饵料。按照试验配方，将饵料原料粉碎，过80目筛，混匀，加工成3 mm颗粒，晾干。杆菌七肽产品中纯品杆菌七肽的含量为1%（杆菌七肽含量的测定方法采用高效液相色谱法），载体为玉米芯粉和麦饭石，占比为80%~89%，二氧化硅约10%~15%。杆菌七肽产品由安杰利生物科技有限公司提供。克氏原螯虾苗种由恒湖农场小龙虾养殖基地提供，捕苗时间在5月9日，虾苗暂养驯化1个月，选用500尾品质优良、（10.19±0.05）g的克氏原螯虾虾苗，随机分为5组，每组5个重复，共计25个养殖桶（80 cm×66 cm×64 cm），每个养殖桶中放养20只克氏原螯虾。对照组不添加杆菌七肽；其他4组为试验组，克氏原鳌虾投喂分别添加2.5、5.0、7.5和10.0 mg/kg杆菌七肽的全价配合饵料。试验饵料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.015.T001表1试验饵料组成及营养水平（风干基础）项目对照组2.5 mg/kg组5.0 mg/kg组7.5 mg/kg组10.0 mg/kg组原料组成鱼粉13.00013.00013.00013.00013.000豆粕25.00025.00025.00025.00025.000菜粕11.00011.00011.00011.00011.000小麦粉22.00022.00022.00022.00022.000棉粕9.0009.0009.0009.0009.000米糠8.0008.0008.0008.0008.000豆油1.0001.0001.0001.0001.000鱼油1.0001.0001.0001.0001.000黏合剂2.0002.0002.0002.0002.000磷酸二氢钙2.0002.0002.0002.0002.000预混料1.5001.5001.5001.5001.500大豆卵磷脂2.0002.0002.0002.0002.000纤维素1.5001.4751.4501.4251.400虾糠粉0.5000.5000.5000.5000.500食盐0.3500.3500.3500.3500.350蜕壳素0.1500.1500.1500.1500.150杆菌七肽00.0250.0500.0750.100合计100.000100.000100.000100.000100.00营养水平粗蛋白质31.36031.78031.11031.21031.560粗脂肪4.3204.3304.4504.2804.250水分12.61010.79011.09010.55011.030粗灰分10.1509.3709.4209.4109.730注：1.预混料为每千克饵料提供：Cu 2.0 mg、Zn 24 mg、Fe 25mg、Mn 7.3 mg、Se 0.16 mg、I 1.6 mg、Mg 50 mg、Co 0.26 mg、VA1 2 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 160 mg、VK3 34 mg、VB1 75 mg、VB2 48 mg、VB6 48 mg、VB12 240 μg、VC 440 mg、烟酸150 mg、泛酸150 mg、叶酸12 mg、生物素1.2 mg。2.营养水平均为实测值。%1.2饲养管理克氏原螯虾每天投喂两次（8：00、17：00），日投饵量为虾体质量的3%~6%，上午投饵量为日投饵量的30%，下午70%，根据摄食和生长情况做适当调整，间隔15 min喂1次，以每次投饲1 h无残饵为宜，试验期8 w。饲养期间水温为(25±3)℃。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能采样前1 d停止投喂，分别统计各养殖桶中克氏原螯虾的数量和重量，记录每个养殖桶投喂饲料的总用量，计算克氏原螯虾成活率（SR）、末重（FBW）、增重率（WGR）、特定生长率（SGR）以及出肉率（MY）。成活率=起捕尾数/放养尾数×100%(1)末重=起捕总质量/起捕尾数×100%(2)增重率=(起捕体质量-放养体质量)/放养体质量×100%(3)特定生长率=(ln末重-ln初重)/试验天数×100%(4)出肉率=出肉总质量/起捕总质量×100%(5)1.3.2血清生化指标使用无菌注射器从虾体围心腔中取血，将血液置于无菌离心管中，4 ℃冰箱保存，离心得到血清，采用试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（AKP）活性，测定方法均按照试剂盒步骤进行测定。1.3.3肝胰脏生化指标虾体采血后剖开头胸甲，剥离肝胰脏，使用滤纸吸去表面的水分，取适量的肝胰脏样品放入冻存管，置于液氮中速冻，转移至-80 ℃冰箱保存。将肝胰脏样品解冻，洗净，称重，将肝胰脏与匀浆液按1∶9（w∶v）比例低温匀浆，4 ℃、4 000 r/min离心10 min，取上清液，使用试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定总蛋白（TP）、丙二醛（MDA）含量以及溶菌酶（LZM）活性。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 25.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1杆菌七肽对克氏原螯虾生长性能的影响（见表2）由表2可知，7.5 mg/kg组克氏原螯虾的末重、增重率和特定生长率最高，显著高于2.5 mg/kg组（P0.05），与其他组差异不显著（P0.05)；7.5 mg/kg组克氏原螯虾的存活率显著高于10.0 mg/kg组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.015.T002表2杆菌七肽对克氏原螯虾生长性能的影响组别存活率/%末重/g增重率/%特定生长率/(%/d)出肉率/%对照组70.00±2.89a17.42±0.31ab75.67±1.33ab0.99±0.01ab12.25±0.482.5 mg/kg组61.67±3.33ab16.50±0.38b70.33±5.24b0.88±0.05b12.75±0.255.0 mg/kg组65.00±2.89a17.95±0.40a71.67±0.88ab0.97±0.01ab13.25±0.257.5 mg/kg组65.00±2.89a18.44±0.30a82.33±4.10a1.07±0.04a12.75±0.8510.0 mg/kg组53.33±1.67b17.19±0.61ab74.33±3.18ab0.99±0.04ab12.50±0.50注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2杆菌七肽对克氏原螯虾血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，各试验组克氏原螯虾血清AKP活性与对照组差异不显著（P0.05）；10.0 mg/kg组血清ALT活性比对照组降低46.44%（P0.05)，7.5 mg/kg组血清AST活性比对照组降低44.54%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.015.T003表3杆菌七肽对克氏原螯虾血清生化指标的影响组别AKP/(金氏单位/100 mL)ALT/(U/L)AST/(U/L)对照组0.98±0.0514.17±1.85ab14.93±1.88b2.5 mg/kg组1.01±0.0717.08±1.44a10.68±1.57bc5.0 mg/kg组0.98±0.0914.12±0.88ab23.57±3.18a7.5 mg/kg组0.94±0.0512.29±0.59b8.28±0.62c10.0 mg/kg组0.82±0.057.59±1.72c14.00±0.52bc2.3杆菌七肽对克氏原螯虾肝胰脏生化指标的影响（见表4）由表4可知，随着杆菌七肽添加量的提高，克氏原螯虾肝胰脏内TP含量呈先升高后降低的趋势，5.0 mg/kg组克氏原螯虾肝胰脏内TP含量显著高于对照组、7.5 mg/kg组和10.0 mg/kg组（P0.05），与2.5 mg/kg组差异不显著（P0.05）；5.0 mg/kg组克氏原螯虾肝胰脏MDA含量显著低于2.5 mg/kg组（P0.05），但与其他各试验组无显著性差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.015.T004表4杆菌七肽对克氏原螯虾肝胰脏生化指标的影响组别TP/(g/L prot)LZM/(U/mg prot)MDA/(μmol/g prot)对照组47.05±3.12bc1.32±0.06c5.58±0.84ab2.5 mg/kg组50.76±2.76ab3.30±0.57a7.47±1.30a5.0 mg/kg组54.95±1.48a1.98±0.18bc4.02±0.93b7.5 mg/kg组47.30±1.98bc2.64±0.12ab4.99±0.33ab10.0 mg/kg组41.15±1.23c1.08±0.00c6.04±0.63ab3讨论3.1杆菌七肽对克氏原螯虾生长性能的影响本试验中，饵料中添加7.5 mg/kg的杆菌七肽可以显著提高克氏原螯虾的生长性能。在其他水产动物上也有类似的结果，添加150 mg/kg的天蚕素抗菌肽对湘云鲫具有促生长效果[11]。柴仙琦等[12]研究表明，饵料中添加抗菌肽可以显著提高凡纳滨对虾增重率，300~400 mg/kg是最佳添加量。本试验中，添加一定量杆菌七肽能够显著提高克氏原螯虾的生长性能，原因可能是抗菌肽能够改善的肠道组织结构，维持肠道稳态[13]，进而提高肠道对饲料营养物质的消化吸收能力。杆菌七肽的添加量与前人试验添加量不同，可能因为抗菌肽种类或试验动物种类不同，但最适添加量与水产动物的类别和生长阶段有关。3.2杆菌七肽对克氏原螯虾血清生化指标的影响水产动物血液是其体内重要的组织，与机体代谢、营养状况及疾病有密切关系[14]。正常情况下，血清中相关转氨酶活性处于较低水平，肝脏细胞受损导致其细胞膜通透性变强时，ALT、AST才会大量渗透到血液，导致肝脏中ALT、AST活性明显降低。因此，血清中AST和ALT活活性是反映肝功能正常的重要指标[15-16]。本试验中，7.5 mg/kg杆菌七肽添加量可以降低血清中AST和ALT活性，增强克氏原螯虾的非特异性免疫力，与李晓颖等[17]研究指出抗菌肽低剂量添加对鲤鱼生长发育及机体抗病力均有较好促进作用的结果相类似。本试验中，添了杆菌七肽的试验组与对照组之间克氏原螯虾血清中AKP的活力无差异。3.3杆菌七肽对克氏原螯虾肝胰脏生化指标的影响本试验中，5.0 mg/kg杆菌七肽显著降低肝脏中MDA含量，与王一娟等[18]研究抗菌肽能够显著降低性腺中MDA结果相类似。因此，饲料中添加杆菌七肽对提高克氏原螯虾抗氧化能力起到一定作用。在先天性免疫中，溶菌酶是重要的生物防御效应器，在水产动物抵抗病原微生物感染中起重要作用[19]。本试验中，杆菌七肽添加量为2.5 mg/kg时，肝胰脏LZM活性最高，之后随着杆菌七肽添加量的提高呈下降趋势，可知在饲料中添加杆菌七肽能够提高克氏原螯虾免疫力。4结论本试验表明，饲料中添加一定量的杆菌七肽可以促进克氏原螯虾的生长，增强肝功能，以5.0~7.5 mg/kg添加量效果最佳。