复合微生态制剂是利用多种有益微生物及其代谢产物复合而成的一类生物活菌制剂[1-2]，作为饲料添加剂能够调节动物肠道微生物菌群结构[3]，提高饲料转化率、生长性能、机体免疫力[4-5]，且具有安全、无残留、无耐药性、绿色环保等优点。复合微生态制剂作为目前抗生素的替代品之一，在畜禽养殖生产中具有广阔的应用前景[6-8]。微生态制剂在家禽养殖生产中的研究和应用集中于改善肉鸡生长性能、屠宰性能、肉品质方面[9-11]、蛋鸡的产蛋性能、营养物质表观消化率、微生物菌群平衡、蛋品质等方面[12]，在蛋鸡养殖生产方面，尤其是对蛋鸡免疫功能和抗氧化功能的研究报道较少。范彧等[13]研究表明，海兰褐蛋鸡基础日粮中添加0.01%、0.02%芽孢杆菌微生态制剂能够显著提高蛋鸡的产蛋率和采食量，提高日粮干物质表观消化率。郝小静等[14]研究表明，产蛋后期蛋鸡基础日粮中添加4 mL/kg植物乳杆菌和屎肠球菌微生态制剂能够显著提高蛋鸡的产蛋率，提高蛋鸡粪便中植物乳杆菌含量，降低大肠杆菌含量。殷璐瑶等[15]研究表明，罗曼褐壳蛋鸡基础日粮中添加1 g/kg益生菌制剂能够显著提高日粮粗蛋白质、钙的表观利用率，提高盲肠微生物中的有益菌丰度。褚素乔等[16]研究表明，基础日粮中添加0.1%益生菌制剂能够显著提高罗曼褐蛋鸡的产蛋率和平均蛋重，提高鸡蛋的蛋白高度，改善蛋黄颜色和蛋壳颜色。本试验以产蛋高峰期的海兰褐蛋鸡为研究对象，探讨不同添加剂量的复合微生态制剂对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、免疫功能和抗氧化功能的影响，确定蛋鸡日粮中复合微生态制剂的适宜添加水平，为复合微生态制剂在蛋鸡养殖中的研究和应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料复合微生态制剂由新疆巴音郭楞职业技术学院自制，主要由枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌按照1∶1∶1比例组成，活菌总数≥5.0×109 CFU/g。鸡免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.2试验设计试验选用的240只30周龄海兰褐蛋鸡由轮台县野云沟乡众富农民养殖专业合作社提供。试验采用单因素完全随机设计，将240只30周龄海兰褐蛋鸡随机分为4组，即对照组、复合微生态制剂Ⅰ组、复合微生态制剂Ⅱ组、复合微生态制剂Ⅲ组，每组3个重复，每个重复20只。分别在饲喂基础日粮中添加0、0.05%、0.10%、0.20%复合微生态制剂，基础日粮组成及营养水平见表1。试验期10 w。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.013.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米65.0代谢能/(MJ/kg)11.53豆粕22.0粗蛋白/%16.87鱼粉2.0钙/%3.52石粉8.0总磷/%0.51食盐1.0磷酸氢钙1.0预混料1.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 12 000 IU、VD3 2 000 IU、VE 20 mg、VB1 2 mg、VB2 6 mg、烟酸35 mg、泛酸7 mg、叶酸1.0 mg、Fe 30 mg、Zn 60 mg、Mn 60 mg、Cu 6 mg、I 0.4 mg、Se 0.2 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验蛋鸡采用层叠式方式笼养。根据蛋鸡饲养管理手册进行规范管理及常规疫苗免疫与消毒，控制鸡舍内温度约20 ℃，相对湿度约50%，蛋鸡自由采食和饮水。1.4测定指标及方法1.4.1产蛋性能每日记录每个重复蛋鸡的产蛋数、称量蛋重、记录饲料消耗量，分别计算产蛋率、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比。产蛋率=产蛋总数/(蛋鸡数×试验天数)×100%(1)平均蛋重=蛋总重量/蛋总数(2)平均日采食量=饲料消耗总量/(蛋鸡数×试验天数)(3)料蛋比=饲料消耗总量/蛋总重量(4)1.4.2蛋品质每个重复随机选取30枚鸡蛋，利用蛋壳强度测量仪测定蛋壳强度；利用蛋壳厚度测量仪测定蛋壳厚度；利用游标卡尺测定蛋的长径和短径，计算蛋形指数；利用蛋品质测定仪分别测定蛋黄颜色和哈夫单位；利用直接皂化-硫酸铁铵比色法[17]测定蛋黄胆固醇含量。蛋形指数=长径/短径(5)1.4.3血清免疫指标和抗氧化指标试验结束，利用5.0 mL一次性注射器于试验蛋鸡的翅静脉处采集血液4.0~5.0 mL，将血液全部打入5.0 mL离心管，将离心管依次置于37 ℃温箱放置1 h、4 ℃冰箱放置4 h。血液以5 000 r/m离心10 min，吸取上层血清样品。利用试剂盒依次测定血清样品中IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-4、IFN-γ等免疫指标及T-AOC、T-SOD、GSH-Px、MDA等抗氧化指标。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 17.0进行差异显著性分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合微生态制剂对蛋鸡产蛋性能的影响（见表2）由表2可知，复合微生态制剂Ⅱ组、复合微生态制剂Ⅲ组蛋鸡的产蛋率、平均蛋重均显著高于复合微生态制剂Ⅰ组、对照组（P0.05）；试验Ⅱ组蛋鸡的料蛋比显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.013.T002表2复合微生态制剂对蛋鸡产蛋性能的影响组别产蛋率/%平均蛋重/(g/枚)平均日采食量/[g/(只·d)]料蛋比对照组92.71±0.67b62.31±0.19b122.06±0.972.11±0.04a复合微生态制剂Ⅰ组93.14±0.59b62.44±0.20b122.07±1.022.10±0.03ab复合微生态制剂Ⅱ组94.07±0.62a63.05±0.21a122.23±0.872.06±0.03b复合微生态制剂Ⅲ组93.86±0.58a63.01±0.19a122.21±0.952.07±0.04ab注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05）；相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。结果表明，蛋鸡日粮中添加0.10%和0.20%复合微生态制剂均能够改善蛋鸡的产蛋性能，以0.10%添加剂量的作用效果最明显。2.2复合微生态制剂对蛋鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，复合微生态制剂Ⅱ组、复合微生态制剂Ⅲ组鸡蛋的蛋壳强度、蛋壳厚度、哈夫单位均显著高于对照组（P0.05），胆固醇含量均显著低于对照组（P0.05）；复合微生态制剂Ⅱ组、Ⅲ组的蛋壳强度均显著高于复合微生态制剂Ⅰ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.013.T003表3复合微生态制剂对蛋鸡蛋品质的影响组别蛋壳强度/(kg/cm2)蛋壳厚度/mm蛋形指数蛋黄颜色哈氏单位胆固醇含量/(g/kg)对照组3.95±0.08b0.37±0.03b1.32±0.0311.58±0.7885.36±1.75b9.65±0.52a复合微生态制剂Ⅰ组3.98±0.07b0.38±0.03ab1.33±0.0312.02±0.8786.87±1.98ab9.34±0.42ab复合微生态制剂Ⅱ组4.24±0.08a0.42±0.02a1.35±0.0412.35±0.9188.24±1.75a8.92±0.54b复合微生态制剂Ⅲ组4.32±0.09a0.43±0.04a1.34±0.0312.26±0.9588.15±1.62a8.94±0.51b结果表明，蛋鸡日粮中添加0.10%和0.20%复合微生态制剂能够改善蛋鸡的蛋品质。2.3复合微生态制剂对蛋鸡血清免疫指标和抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，复合微生态制剂Ⅰ组、复合微生态制剂Ⅱ组、复合微生态制剂Ⅲ组蛋鸡血清的IgG、IL-2含量及T-AOC、T-SOD活性均显著高于对照组（P0.05），MDA含量均显著低于对照组（P0.05）；复合微生态制剂Ⅱ组、复合微生态制剂Ⅲ组蛋鸡血清的IgA、IFN-γ含量均显著高于对照组（P0.05）；复合微生态制剂Ⅱ组、复合微生态制剂Ⅲ组蛋鸡血清的IgG含量及T-AOC、T-SOD活性均显著高于复合微生态制剂Ⅰ组（P0.05），MDA含量均显著低于复合微生态制剂Ⅰ组（P0.05）；复合微生态制剂Ⅱ组蛋鸡血清T-AOC显著高于复合微生态制剂Ⅰ组、复合微生态制剂Ⅲ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.013.T004表4复合微生态制剂对蛋鸡血清免疫指标和抗氧化指标的影响组别IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-2/(ng/L)IL-4/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)T-AOC/(U/mL)T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(µmol/L)MDA/(µmol/L)对照组1.31±0.07b2.52±0.14c1.60±0.05198.65±3.14b72.58±2.7555.62±2.14b18.32±1.02d231.54±2.54c57.24±0.549.87±0.24a复合微生态制剂Ⅰ组1.38±0.11ab2.59±0.12b1.62±0.06205.42±3.84a73.54±2.5756.87±2.21ab19.65±0.98c234.87±2.47b57.62±0.489.48±0.29b复合微生态制剂Ⅱ组1.45±0.09a2.78±0.09a1.64±0.06207.24±2.98a73.98±2.4858.44±2.25a22.14±0.89a241.04±2.32a57.58±0.529.05±0.27c复合微生态制剂Ⅲ组1.48±0.10a2.82±0.11a1.65±0.07207.58±2.87a73.69±2.4158.51±2.61a21.07±0.95b239.65±2.51a57.61±0.559.04±0.21c结果表明，蛋鸡日粮中添加0.05%、0.10%和0.20%复合微生态制剂均能够改善蛋鸡的血清免疫指标和抗氧化指标，以0.10%添加剂量的作用效果较好。3讨论3.1复合微生态制剂对蛋鸡产蛋性能的影响本试验发现，在蛋鸡日粮中添加复合微生态制剂，蛋鸡的采食量无显著改善，产蛋率和平均蛋重显著增加，料蛋比显著降低，与范彧等[13]、郝小静等[14]、褚素乔等[16]研究结果相似。复合微生态制剂改善蛋鸡产蛋性能的原因可能为复合微生态制剂进入蛋鸡肠道后，通过调节蛋鸡肠道的微生态菌落平衡，提高蛋鸡肠道的消化功能，提高饲料中营养成分的消化、吸收和利用，增强蛋鸡体内养分的代谢和利用，进而提高产蛋性能。本试验中，0.10%添加量对蛋鸡产蛋性能的作用效果优于0.05%和0.20%，可能为蛋鸡肠道对复合微生态制剂的吸收利用存在一个阈值，超过阈值的多余微生态制剂无法完全被蛋鸡肠道吸收利用。3.2复合微生态制剂对蛋鸡蛋品质的影响蛋壳质量和蛋黄中胆固醇含量分别是评价蛋品质的2个最重要指标，而这2个指标除与鸡的遗传因素有关外，主要受饲料中营养成分的吸收和利用影响[18]。影响蛋壳质量的饲料中营养成分的主要因素为钙含量和钙吸收利用率等；影响蛋黄中胆固醇含量的主要因素为日粮中脂肪、脂肪酸的组成和含量，尤其脂肪酸的饱和度，因为多不饱和脂肪酸可以阻断胆固醇的合成过程，降低鸡蛋中胆固醇含量[18]。本研究表明，蛋鸡日粮中添加复合微生态制剂能够改善鸡蛋的蛋壳质量和蛋黄中胆固醇含量，表明复合微生态制剂能够提高蛋鸡肠道对饲料的转化利用率，导致饲料中钙和无机磷的吸收和利用率提高，可增加蛋鸡机体内钙的含量，为蛋鸡产蛋时钙的供应提供充分保障，进而改善蛋壳质量。复合微生态制剂中的有益菌及代谢产物进入蛋鸡肠道后，能够改善脂肪和脂肪酸的代谢，降低蛋鸡体内脂肪酸的饱和度，产生多种不饱和脂肪酸等活性物质，降低蛋鸡体内的胆固醇含量，进而改善蛋品质。3.3复合微生态制剂对蛋鸡血清免疫指标和抗氧化指标的影响免疫功能和抗氧化功能是反映机体健康状况的最重要的两大生理功能[19]。免疫球蛋白是一类由浆细胞产生的具有抗体活性的球蛋白，包含IgA、IgG、IgM，直接参与和决定动物机体的体液免疫[20]。细胞因子是由免疫细胞分泌的一类小分子活性多肽，IL-2、IL-4、IFN-γ均由淋巴细胞分泌，在动物机体的细胞免疫中发挥重要作用[18]。T-AOC、T-SOD、GSH-Px、MDA是机体抗氧化系统的主要组成部分，T-AOC、T-SOD和GSH-Px能够清除细胞脂质过氧化代谢终产物MDA和活性氧自由基，提高机体抗氧化能力[19]。本研究中，复合微生态制剂能够显著提高蛋鸡血清中的IgA、IgG等免疫球蛋白含量指标，提高蛋鸡血清中的IL-2、IFN-γ等细胞因子含量指标，改善T-AOC、T-SOD、MDA等抗氧化指标，表明复合微生态制剂能够刺激机体淋巴细胞分泌，提高免疫球蛋白和细胞因子含量，提高细胞免疫和体液免疫功能，增强机体的免疫力和抗病力，提高蛋鸡的免疫功能和抗氧化功能。4结论本试验中，蛋鸡基础日粮中添加0.10%复合微生态制剂能够显著改善蛋鸡的产蛋性能、蛋品质、血清免疫指标和抗氧化指标。