中草药添加剂具有增强食欲、提高采食量、促进消化吸收、提高饲料转化率、增强免疫功能及抗应激等作用，被广泛应用于现代集约化养殖业中[1]。川芎主要活性成分为挥发油、生物碱及多糖等，具有增乳活血功效[2]。漏芦为一味传统中药，富含黄酮类、挥发油类、三萜类及甾体类等多种活性成分，具有抗菌消炎、调节免疫、消痈下乳功效[3-4]。木通为植物木通或三叶木通的干燥藤茎，富含齐墩果酸、皂苷、黄酮及多酚等活性成分，具有抗氧化、降血糖、通经活血、抑菌等功效[5-6]。甘草为豆科植物甘草或光果甘草的干燥根和根茎，富含黄酮、香豆素及多糖类等活性物质，具有抗炎、抗病毒及调和诸药之效[7-8]。针对泌乳期奶牛的生理及生产需求，本试验选取以上中药材，按一定比例配制成中草药添加剂，探讨其对泌乳期奶牛泌乳性能、血清生化指标、免疫指标及抗氧化功能的影响，为后续开发相关中草药添加剂产品提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验中草药添加剂由川芎、漏芦、三叶木通、甘草等配伍而成，均购自兰州沃特莱斯生物科技有限公司，按比例4∶2∶1∶2混匀，制成中草药添加剂。1.2试验动物选择体重（520±30）kg、胎次2~3、泌乳期（115±10）d及泌乳量（33.45±1.57）kg/(头·d)相近的荷斯坦奶牛72头，由泗水肉奶牛良种产业化繁育基地提供。1.3试验设计将72头奶牛随机分为4组，每组3个重复，每个重复6头奶牛。对照组（A组）为基础日粮，试验组（B组、C组、D组）在基础日粮中添加不同水平的中草药添加剂（0.2%、0.3%、0.4%）。试验期56 d。试验奶牛每日6：00与13：00饲喂，自由饮水。每日挤奶2次，其余日常管理均按养殖场饲养管理标准进行。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.005.T001表1基础日粮组成及营养水平原料/%含量营养水平合计100.0玉米10.0净能/(MJ/kg)6.53苜蓿10.0粗蛋白/%18.15麦麸5.0粗脂肪/%2.05甜菜5.0中性洗涤纤维/%17.12玉米青贮45.5酸性洗涤纤维/%8.05豆粕8.0钙/%1.02棉粕10.0磷/%0.57磷酸氢钙1.5食盐1.0小苏打2.0预混料2.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 5 000 IU、VD 2 000 IU、VE 24 mg、Fe 50 mg、Cu 10 mg、Mn 65 mg、Zn 56 mg、Se 0.3 mg、Co 1.0 mg。2.营养水平均为实测值。1.4测定指标及方法1.4.1泌乳性能严格记录每头奶牛每日产奶量，计算平均日产奶量。试验结束时，按5∶5比例收集每日的两次奶样，混合后用于测定乳蛋白率、体细胞数。1.4.2血清生化指标试验结束时，每组随机选择3头奶牛，颈静脉采集血液，分离血清，测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）等指标。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.4.3免疫指标使用试剂盒测定血清免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、白细胞介素-2（IL-2）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α），试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.4.4抗氧化指标抗氧化指标由全自动生化分析仪结合相应试剂盒进行测定，检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（T-SOD）等指标，上述指标试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件简单整理，SPSS 20.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛泌乳性能的影响（见表2）由表2可知，与A组相比，C组、D组奶牛产奶量分别显著提高10.13%、6.67%（P0.05）。各组乳蛋白率差异不显著（P0.05），各组体细胞数随中草药添加剂添加量的增加呈现下降趋势，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.005.T002表2不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛泌乳性能的影响组别产奶量/[kg/(头·d)]乳蛋白率/%体细胞数/(×105)A组（对照组）32.07±0.37b3.21±0.1110.28±0.31B组32.14±0.52b3.27±0.1310.32±0.57C组35.32±0.46a3.19±0.179.81±0.23D组34.21±0.58a3.37±0.079.73±0.48注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与A组相比，C组、D组奶牛血清ALT活性及BUN、GLU的含量均显著降低（P0.05）；B组、C组、D组奶牛血清TG含量显著降低（P0.05）；各组间TP、ALB、LDL-C、HDL-C的含量及AST活性差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.005.T003表3不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)TG/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)BUN/(mmol/L)GLU/(mmol/L)LDL-C/(mmol/L)HDL-C/(mmol/L)A组（对照组）73.07±0.4131.53±1.170.25±0.02a21.96±1.21a73.45±3.795.25±0.48a2.82±0.06a2.35±0.080.33±0.01B组75.16±0.2431.04±1.280.18±0.01b21.73±1.53a73.22±3.245.13±0.34b2.74±0.07a2.28±0.040.43±0.06C组74.34±0.1832.23±1.810.20±0.01b20.01±1.78b72.39±4.114.17±0.25c1.51±0.04b2.25±0.020.44±0.15D组75.25±0.3130.76±2.040.14±0.03c20.49±1.62b74.82±3.904.26±0.78c1.48±0.04b2.12±0.030.31±0.112.3不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛免疫指标的影响（见表4）由表4可知，与A组相比，B组、C组、D奶牛血清IgA、IL-2的含量均显著提高（P0.05），且D组奶牛血清IL-2含量显著高于B组、C组（P0.05）；试验各组IgM、IgG、TNF-α的含量差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.005.T004表4不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛免疫指标的影响组别IgM/(g/L)IgG/(g/L)IgA/(g/L)TNF-α/(ng/L)IL-2/(ng/L)A组（对照组）2.42±0.215.21±0.871.58±0.03b35.61±0.7122.15±1.68cB组2.50±0.415.25±0.411.77±0.11a36.76±0.3423.85±1.13bC组2.63±0.165.33±0.131.84±0.01a37.48±0.6924.19±1.59bD组2.57±0.235.18±0.611.82±0.03a36.34±0.2125.24±1.47a2.4不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，与A组相比，D组奶牛血清GSH-Px活性显著提高（P0.05）；C组、D组奶牛血清MDA的含量均显著降低（P0.05）；B组、C组、D组奶牛血清T-AOC均显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.005.T005表5不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛抗氧化指标的影响组别T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(µmol/L)T-AOC/(U/mL)A组（对照组）60.23±1.67768.91±41.77b4.37±0.35a7.27±0.47cB组62.43±2.03782.25±40.65b3.72±0.09ab8.14±0.61bC组61.78±2.84797.73±38.48b3.28±0.71b8.93±0.38bD组63.27±2.79811.28±41.63a3.03±0.24c9.54±0.49a3讨论3.1不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛产奶性能的影响本试验发现，不同水平的中草药添加剂均能够提高奶牛产奶量，对奶品质无不利影响。与A组对比，C组、D组奶牛产奶量分别显著提高10.13%、6.67%，且试验各组乳蛋白率无显著差异，乳中体细胞数随添加量增加具有下降趋势。刘莉莉等[9]研究发现，25~100 µg/mL的漏芦乙醇提取物可显著提高细胞泌乳信号通路信号分子STAT5、mTOR、SREBP1、AKT1、GLUT1基因的mRNA表达水平及p-STAT5、p-mTOR、SREBP1等蛋白质表达水平，说明漏芦乙醇提取物可通过调节泌乳信号通路关键信号分子的表达，进而促进乳成分的合成。徐一石[10]研究发现，添加100、200、400 g/t的川芎挥发油均能够显著提高奶牛泌乳量、抗氧化能力及免疫调节能力；有效降低鲜奶中体细胞数，且随添加量增加体细胞数下降越明显，说明川芎挥发油可提高奶牛生产性能，改善奶牛健康状况。董雪松[11]研究发现，在奶牛日粮中添加200 g/(头·d)的中草药制剂（由黄芪、党参、甘草等8味药材组成），奶牛日均产奶量显著提高10.98%，乳蛋白率提高5.25%。本试验结果与前人研究结果相一致，表明试验中草药添加剂能够提高奶牛产奶量并改善奶品质。3.2不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛血清生化指标的影响本试验中，中草药添加剂可显著降低泌乳期奶牛血清中ALT活性及BUN、GLU、TG的含量，并对血清中TP、ALB、LDL-C、HDL-C的含量及AST活性无显著影响，其中LDL-C含量呈下降趋势，但差异不显著。杨金博等[12]研究发现，三叶木通提取物可显著降低Ⅱ型糖尿病小鼠TG、TC、LDL-C的含量，提高HDL-C含量，降低GLU含量。贾哲[13]研究发现，甘草中活性物质甘草酸可显著降低血清中TG含量、ALT活性，表明甘草酸可减少肝脏细胞损伤，能够起到保护肝脏的作用。本试验结果与前人研究结果相一致，说明该试验中草药添加剂可调节奶牛代谢水平，保护肝胆，并对奶牛机体无不利影响。3.3不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛免疫指标的影响血清IgA主要分布于乳汁、呼吸道及泌尿生殖道分泌液中，能够抑制病原微生物附着，减缓病毒繁殖，是机体重要的免疫屏障。IL-2可刺激和维持T细胞的分化增值，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有着重要作用。本试验发现，与A组相比，B组、C组、D组奶牛血清IgA、IL-2含量均显著提高，试验各组IgM、IgG、TNF-α含量无显著差异。潘昱麒等[14]研究发现，随饲养时间增加，饲喂甘草茎叶组巴什拜羔羊的IgA、IgG、IgM含量均显著高于对照组，其免疫球蛋白含量增长与饲喂时间呈正相关。丁艳[15]研究发现，甘草多糖可降低细菌脂多糖刺激雏鸡血清中IgA、IgG、IgM等含量，缓解刺激引起的过度免疫应答，发挥免疫调节作用。王丹阳[16]研究表明，与对照组相比，高、中剂量的甘草多糖均可显著提高小鼠血清中IgG、IgA、IgM、IL-2的含量。3.4不同水平的中草药添加剂对泌乳期奶牛抗氧化指标的影响本试验中，与A组相比，D组奶牛血清GSH-Px活性显著提高；B组、C组、D组奶牛血清MDA含量、T-AOC均显著降低。洪军等[17]对漏芦中总黄酮类活性物质进行抗氧化活性研究，抗氧化活性与VC相比，漏芦中总黄酮对ABTS+清除能力更强，但还原能力相对较弱。胡永灵等[18]研究漏芦、王不留行、何首乌等制成的中草药添加剂对奶牛抗氧化能力的影响中发现，添加100 g/d水平的中草药组奶牛血液抗氧化酶GSH-Px、CAT基因的表达水平较对照组提高13.0%和16.0%。张才等[19]研究发现，甘草多糖可显著提高仔猪血清中GSH-Px活性，降低血清中MDA含量。本试验研究结果与前人一致，表明试验中草药添加剂可有效增强奶牛机体抗氧化能力，改善奶牛的健康状况。4结论试验结果表明，泌乳期奶牛日粮中添加0.3%的中草药添加剂，可有效提高泌乳期奶牛泌乳性能，改善机体代谢水平，提高抗氧化能力，增强免疫力，进而提高奶牛的生产效益。