添加在饲料中的抗生素对动物的抑菌、促生长等方面起到显著效果；但滥用、超量使用或不按停药期使用抗生素，导致的细菌耐药性、环境污染、食品安全等问题接踵而来。畜牧工作者在积极探索各种方法以期替代抗生素，使用无抗饲料，发展健康养殖，提供安全畜禽产品，并且改善动物肠道健康和生产性能。适当剂量的益生菌可使宿主胃肠道内的微生态平衡，畜体的健康水平和生长性能得到改善[1]。家禽饲喂益生菌制剂后，肠道内有益菌数量增加，机体抗病能力提高，营养物质的吸收利用能力增强，达到防治肠道疾病和促进生长的双重作用[2]。与使用抗生素不同，动物的非特异性免疫力在使用益生菌制剂后得到增强，饲料的利用率提高，动物生长性能改善，减少环境污染[3]。目前，益生菌制剂在生产中使用效果评价不一，主要与菌群活性和添加量有关。本试验探讨在肉仔鸡饲粮中添加不同比例的复合益生菌制剂对其生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响，为肉鸡生产中确定适宜添加比例的复合益生菌制剂提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验复合益生菌由发酵乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌混合而成，三者以1∶1∶1的比例混合。各菌株含量均≥1.0×109 CFU/g，以上菌种由大连某畜牧业公司提供。ELISA试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司生产。1.2试验饲粮参考我国《鸡饲养标准》（2004）和Cobb500肉鸡的营养需求[4]配制基础饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.02.009.T001表1基础饲粮组成及营养水平Tab.1Basic diet composition and nutritional level项目1～21日龄22～42日龄原料组成/%玉米56.058.0豆粕34.035.0鱼粉3.01.0磷酸氢钙1.51.4石粉1.21.0豆油3.02.3食盐0.30.3预混料1.01.0合计100.0100.0营养水平代谢能/(MJ/kg)12.9213.28粗蛋白质/%21.4519.15钙/%0.900.76有效磷/%0.430.38蛋氨酸/%0.450.41赖氨酸/%1.191.00注 ：1.每千克预混料含：VA 12 500 IU、VD3 2 500 IU、VE 30 mg、VK3 2.6 mg、VB1 2 mg、VB2 6 mg、泛酸 15 mg、烟酸35 mg、生物素 0.036 mg、叶酸1.25 mg、VB12 0.03 mg、铁80 mg、铜8 mg、锰100 mg、 锌75 mg、碘0.35 mg、硒0.16 mg。2.营养水平中代谢能值为计算值，其余均为实测值。1.3试验设计试验采用单因子完全随机化设计，选用1日龄健康的科宝肉仔鸡360只（公、母雏混养），对照组饲喂基础饲粮，试验组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组）饲粮在基础饲粮中分别添加0.5%、1.0%和1.5%3个水平的复合益生菌制剂，每组设3个重复，每个重复30只鸡，试验期42 d。1.4饲养管理饲养试验在大连瓦房店某鸡场进行。试验肉仔鸡采用小笼养方式进行饲养，1~21日龄，每笼饲养15只鸡，22~42日龄时每笼饲养10只鸡。整个试验期自由采食，自由饮水。饲养管理和免疫程序参照科宝500饲养管理手册进行。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能每日记录鸡只采食量，分别在21日龄和42日龄早6：00，以重复为单位，对每组肉仔鸡进行空腹称重。统计试验期内各组肉仔鸡的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。料重比（F/G）=消耗饲料总量/增重总量 （1）1.5.2免疫功能分别在21日龄和42日龄时从每个重复中随机选取3只肉仔鸡翅静脉采血2 mL，分离血清后按照ELISA试剂盒说明书测定各组血清中的免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白G（IgG）含量，由辽宁农业职业技术学院畜牧兽医系动物疫病检测中心进行检测。1.5.3肠道菌群数量在试验结束时，从每个重复中随机选取3只肉仔鸡处死，无菌采集盲肠内容物，对盲肠内大肠杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌进行计数，菌落数用每克盲肠内容物所含细菌菌落的对数表示（lg CFU/g），由辽宁农业职业技术学院畜牧兽医系动物疫病检测中心进行检测。1.6数据统计与分析数据用Excel 2017进行初步整理，单因素方差分采用SPSS 17.0中的ANOVA进行，组间数据用Duncan's法进行多重比较，结果用“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合益生菌制剂对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，1~21日龄和22~42日龄，各组肉仔鸡的平均日采食量无显著差异（P0.05）；1~21日龄时，Ⅲ组肉鸡平均日增重显著高于对照组和Ⅰ组（P＜0.05），Ⅲ组肉鸡料重比显著低于对照组（P＜0.05）。22~42日龄时，Ⅲ组肉鸡平均日增重显著高于对照组和Ⅰ组（P＜0.05），Ⅱ组和Ⅲ组肉鸡料重比显著低于对照组（P＜0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.02.009.T002表2复合益生菌制剂对肉仔鸡生长性能的影响Tab.2Effect of compound probiotic preparations on growth performance of broilers项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组1~21 d平均日采食量/（g/d）55.61±0.3456.02±0.1356.51±0.3257.11±0.23平均日增重/(g/d）40.03±0.11b41.12±0.12b41.82±0.41ab42.68±0.16a料重比1.40±0.01a1.36±0.03ab1.35±0.01ab1.34±0.05b22~42 d平均日采食量/(g/d)140.78±1.31142.08±1.72143.13±1.62145.05±1.32平均日增重/(g/d）80.71±0.42b82.23±0.62b84.79±0.39ab87.21±0.71a料重比1.74±0.02a1.73±0.12ab1.69±0.08bc1.66±0.05c注 ：同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P＞0.05），不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）；下表同。2.2复合益生菌制剂对肉仔鸡肠道菌群的影响（见表3）由表3可知，添加复合益生菌后，肉仔鸡盲肠中大肠杆菌数量显著减少（P＜0.05），Ⅱ组和Ⅲ组肉仔鸡盲肠中双歧杆菌和乳酸杆菌数量显著高于对照组和Ⅰ组（P＜0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.02.009.T003表3复合益生菌制剂对肉仔鸡肠道菌群的影响Tab.3Effect of compound probiotic preparations on the intestinal flora of broilers 单项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组大肠杆菌8.23±0.04a7.61±0.02b7.67±0.03b7.73±0.07b双歧杆菌7.21±0.16b7.27±0.23b7.91±0.03a7.73±0.11a乳酸杆菌8.21±0.16b8.27±0.24b9.81±0.04a9.73±0.23a位：lg CFU/g2.3复合益生菌制剂对肉仔鸡免疫性能的影响（见表4）由表4可知，饲料中添加复合益生菌能显著提高21日龄肉仔鸡血清中IgA水平（P＜0.05），Ⅱ组和Ⅲ组肉仔鸡血清IgG水平显著高于对照组和Ⅰ组（P＜0.05）；42日龄时，添加复合益生菌组肉仔鸡血清中IgA水平和IgG水平均显著高于对照组（P＜0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.02.009.T004表4复合益生菌制剂对肉仔鸡免疫性能的影响Tab.4Effect of compound probiotic preparations on the immune performance of broilers项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组21 dIgA0.39±0.04b0.61±0.02a0.67±0.03a0.73±0.07aIgG3.21±0.16b3.27±0.23b3.91±0.03a3.73±0.11a42 dIgA0.43±0.02c0.54±0.01b0.63±0.02a0.64±0.03aIgG3.73±0.17b4.78±0.32a4.73±0.09a4.56±0.12ag/L3讨论3.1复合益生菌制剂对肉仔鸡生长性能的影响将益生菌制剂添加到肉鸡饲料中可以促进肉鸡成长。张曼[5]研究表明，3种不同配比的混合益生菌制剂（包括乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌）均能显著提高肉鸡的生长性能。谢文慧等[6]将由枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母以及乳双歧杆菌混合而成的益生菌制剂添加到肉仔鸡饲粮中，显著增加鸡的平均日采食量和平均日增重，降低料重比。秦康乐[7]在肉鸡饲粮中添加合适剂量的益生菌可显著促进雏鸡的生长，日增重提高，料重比降低。郭王勇等[8]发现，在肉鸡饲料中添加复合益生菌，可降低肉鸡料肉比。张雷等[9]研究复合益生菌和低聚果糖对雏鸡的影响，结果表明，复合微生态制剂能够提高雏鸡的平均体重。本试验结果表明，日粮中添加复合益生菌制剂可促进肉仔鸡的生长，本试验条件下，1.0%添加量的复合益生菌制剂效果优于其他试验组。3.2复合益生菌制剂对肉仔鸡肠道菌群的影响动物机体的健康、预防疾病离不开稳定的肠道微生态环境，肠道微生态环境是动物体抵御外来致病因素的屏障，在机体的消化吸收、免疫等方面发挥着重要作用。李可等[10]研究表明，地衣芽孢杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌不同程度改变肉鸡肠道的菌群结构。刘凤美等[11]研究表明，日粮中添加乳酸菌、枯草芽孢杆菌和复合菌可以改善肠道微生物区系，促进有益菌增殖，抑制有害菌生长，与单菌种相比，复合菌的使用效果更佳。张雷等[9]研究表明，复合微生态制剂能够促进白羽乌骨雏鸡盲肠内乳酸杆菌和双歧杆菌增殖。本试验中，使用复合益生菌增加肉仔鸡盲肠有益菌群的数量。3.3复合益生菌制剂对肉仔鸡免疫功能的影响IgA可以中和家禽体内的感染因子；IgG可以激活补体、中和毒素[12]。益生菌或益生片在M细胞协助下穿越肠道黏膜淋巴结上皮细胞后，激活巨噬细胞、树突状细胞等产生细胞因子（IL-4、IL-6、IL-10、转化生长因子-β等），诱导B淋巴细胞表面抗原IgM转变为IgA，增加肠道黏膜IgA分泌细胞的数量，诱导IgA循环[13]。Zhang等[14]在肉仔鸡饲粮中添加复合益生菌（由嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌组成）使肉仔鸡血清中IgA和IgM的含量显著提高。郭欣怡等[15]在肉鸡饲粮中添加乳酸菌，丁酸菌和复合菌均可增强肉仔鸡的免疫功能，而且复合菌优于乳酸菌。刘淑娇等[16]在肉鸡饲粮中添加复合益生菌制剂（包括乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌）使肉鸡的免疫性能显著增强。本试验也取得类似结果。4结论饲粮中添加复合益生菌制剂可提高肉仔鸡的生长性能，增加盲肠有益菌群数量，改善免疫功能，其中复合益生菌的添加比例在1.0%时效果较好。