植物蛋白质原料含量高、营养丰富，能够不同程度刺激动物生长和繁殖。目前，植物蛋白资源短缺，影响饲料工业的持续发展[1]。由于饲料玉米豆粕减量化替代方案的提出，使植物资源饲料化成为研究热点。菜籽粕（Rapeseed meal，RSM）是油菜籽榨油的副产物，粗蛋白含量达32%~40%[2]，赖氨酸含量与大豆蛋白接近，蛋氨酸含量高于大豆蛋白，是动物饲料蛋白的良好来源[3-4]。但菜籽粕中植物次生代谢物硫代葡萄糖苷（又称硫甙）[5]是影响菜籽粕利用的主要抗营养因子之一。硫甙本身具有毒性，在酶的作用下，硫甙可降解为硫氰酸盐[6]。硫氰酸盐会影响动物适口性，过量使用会引发机体恶心、呕吐、腹泻和器官衰竭等[7]。研究表明，饲喂十字花科植物能够引起生乳中硫氰酸根含量显著上升[8]，使植物资源在动物饲料中的应用受到限制[9-10]。因此，通过测定硫氰酸盐含量可以反映抗营养因子硫甙的含量，明确菜籽粕中抗营养因子水平。目前，硫氰酸盐的检测方法种类包括显色分光光度计法[11]、高效液相色谱法[12]、气相色谱法[13]、扫描拉曼光谱法[14]、离子色谱法[15-16]等，离子色谱法以灵敏度高、分离效果好、前处理简单等优点被广泛使用。硫氰酸盐的检测分析研究集中在乳制品，在植物饲料原料，如菜籽粕中硫氰酸盐含量分析报道较少。本研究建立饲料原料菜籽粕中硫氰酸盐分析方法，对完善硫氰酸盐的检测方法体系、发挥菜籽粕等植物蛋白资源在畜禽养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1材料、试剂与仪器菜籽粕购自北京某饲料生产企业。优级纯硫氰酸钠（NaSCN）（Sigma公司）、电阻率18.2 MΩ·cm超纯水（德国默克密理博Milli-Q）、3 mL 0.2 μm滤膜（EMR-Lipid：Agilent Technologies）。Dionex ICS-1100（USA）离子色谱仪（抑制器、电导检测器、Dionex EGC Ⅲ KOH 型淋洗液自动发生装置）、KS 300 EI数控超声清洗仪、ME 204/02电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）、DMT-2500多管漩涡混合仪（杭州米欧仪器有限公司）；FW-100高速万能粉碎机（北京市永光明医疗仪器有限公司）；色谱纯乙腈（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）。1.2分析条件色谱柱：IonPac AS-16型色谱柱（4 mm×250 mm）和IonPac AG-16型保护柱（4 mm×50 mm）。抑制器：AERS 500，电流161 mA。淋洗液：45~65 mmol/L KOH溶液，梯度淋洗。色谱柱淋洗梯度条件见表1。流速1.0 mL/min，柱温：30 ℃，进样量：10 μL。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.T001表1色谱柱梯度淋洗条件时间/min0~1313.1~18.018.1~23.0OH-浓度/(mmol/L)4565451.3样品前处理取2 g（精确至0.01 g）样品，加入4 mL乙腈，加水定容至20 mL，涡旋混匀，超声提取30 min，静置5 min，取适量提取液，过EMR-Lipid柱，取1 mL滤液水定容至10 mL，过0.22 μm滤膜，上机。1.4硫氰酸盐标准溶液配制将硫氰酸钠（NaSCN）标准品于烘箱内烘干2 h，准确称取干燥的NaSCN 0.139 7 g，采用水定容至100 mL容量瓶中，配制浓度为1 000 mg/L的标准储备液，0~4 ℃保存。移取储备液1 mL，水定容至100 mL，混匀，配制浓度为10 mg/L的标准中间液，0~4 ℃保存。分别移取适量标准中间液，梯度稀释配制成0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L的标准溶液，现用现配。1.5数据统计与分析试验数据主要采用Excel进行处理，并绘制曲线。2结果与分析2.1样品前处理OnGuard RP和EMR-Lipid两种固相萃取柱均对蛋白质、脂类具有较高的选择吸附性。EMR-Lipid在样品处理效率具有明显优势。前处理方法对比是否进行离心操作，两种前处理方法硫氰酸根离子回收率见图1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.F001图1两种前处理方法硫氰酸根离子回收率注：方法一为离心；方法二未离心。由图1可知，离心后硫氰酸根离子回收率效果较差，可能因为离心处理后上层提取液中待测物分布不均，导致回收率低。在对蔬菜中硫氰酸盐含量测定的研究中[17]，采用20 min超声提取具有较好的回收率。在对奶粉中硫氰酸根测定中采用10 min超声提取具有较好的回收率[18]，鉴于饲料原料菜籽粕较蔬菜和奶粉基质较为复杂，延长超声提取时间至30 min，可以获得较好回收率。2.2色谱柱的选择硫氰酸根离子是易极化和疏水性的阴离子。AS11色谱柱和AS19色谱柱在测定硫氰酸根离子时，出现峰形拖尾严重、干扰峰多现象，检测时间长。硫氰酸根离子的离子色谱图见图2。由图2可知，AS16分析柱分析硫氰酸根离子的分离效果较好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.F002图2硫氰酸根离子色谱图2.3线性范围、相关系数、检出限结果采用外标法定量，以硫氰酸根离子质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到硫氰酸根离子在0.1~5 mg/L内与峰面积呈线性关系，线性方程分别为Y=0.216x－0.009，R2=0.999。硫氰酸根离子标准曲线见图3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.F003图3硫氰酸根离子标准曲线由图3可知，线性关系良好，满足分析要求。2.4重复性及回收率结果取浓度为5 mg/kg的标准溶液，重复测定6次，测定见图4。由图4可知，其电导检测器测定结果的RSD值为0.191%，RSD值均小于2.0%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.F004图4硫氰酸根离子精密度测定（n=6）硫氰酸根离子精密度测定见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.T002表2硫氰酸根离子精密度测定项目硫氰酸根含量/(mg/kg)RSD/%保留时间/minRSD/%硫氰酸根离子5.053 90.2267.2370.0915.068 47.2235.059 97.2245.040 97.2305.049 67.2245.038 37.218由表2可知，利用离子色谱法测定菜籽粕中SCN-含量的精密度较高，满足分析要求。对菜籽粕中SCN-进行加标回收分析，在菜籽粕中添加0.2与0.3 mg/g硫氰酸跟标准品，样品加标回收率见表3，样品中硫氰酸根离子色谱图见图5。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.T003表3样品加标回收率（n=6）项目添加浓度0.2 mg/g添加浓度0.3 mg/g回收率平均值RSD回收率平均值RSD硫氰酸根离子回收率85.086.12.8101.2102.42.986.699.484.9107.490.2104.687.399.682.8102.3%10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.F005图5样品中硫氰酸盐色谱图由表3、图5可知，所得平均加标回收率分别为86.1%与102.4%（n=6）。本方法测定菜籽粕中SCN-含量回收率较好，说明该方法检测结果准确。2.5样品硫氰酸盐含量分析（见表4）不同饲料生产企业采集6份不同来源菜籽粕进行分析。根据文献报道对比目前蔬菜、牛奶中的硫氰酸盐含量[19-20]，不同种类硫氰酸盐含量对比见表5。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.T004表4样品中硫氰酸盐含量（n=2）项目S1S2S3S4S5S6SCN-104.93103.7099.87107.41117.20115.74mg/kg10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.09.026.T005表5不同种类硫氰酸盐含量对比项目萝卜干生乳菜籽粕SCN-32.356.67104.93mg/kg由表4、表5可知，菜籽粕中的浓度较高，替代豆粕使用时，尤其在奶牛饲料中的安全问题不容忽视。3结论本试验建立在菜籽粕中硫氰酸根离子的离子色谱分析方法之上，样品前处理简单，重复性良好，在0.1~5.0 mg/kg浓度范围内具有良好的线性范围，添加回收率满足方法学要求，可以作为饲料植物蛋白原料菜籽粕中硫氰酸根的检测方法。