水貂是鼬科动物，因肠道较短常出现腹泻拉稀等症状，严重影响其生长发育和毛皮质量[1-2]。酶制剂作为替抗产品之一，在多种动物的饲养过程中具有良好的应用效果。侯振平等[3]研究表明，当葡萄糖氧化酶添加量为0.1%时，断奶仔猪的腹泻率明显降低，平均日增重和免疫力提高，料重比降低。王前光等[4]在1~6周龄鸭饲粮中加入葡萄糖氧化酶，结果发现，鸭的血清免疫指标、抗氧化指标相继提高，实现肠道的菌群平衡。葡萄糖氧化酶添加量为500 g/t时，可提高产蛋后期蛋种鸡血清的抗氧化能力和免疫功能[5]。唐明红[6]研究发现，在黄羽肉鸡饲粮中添加过氧化氢酶200 U/kg时，肉鸡的生长发育指标和抗氧化能力均得到提升。目前，关于酶制剂对育成期水貂生长及发育影响的研究成果相对较少。本试验在水貂基础饲粮中单独或联合添加葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，研究饲粮中加入酶制剂对育成期水貂生长发育、抗氧化能力和免疫性能的影响，为酶制剂在水貂养殖中的合理利用提供参考。1材料与方法1.1试验材料80只(75±5)日龄健康的金州黑雄性水貂购自威海市海泉珍贵毛皮动物繁育基地。葡萄糖氧化酶（20 000 U/g）、过氧化氢酶（100 000 U/g）购自湖北新华扬生物公司。免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）试剂盒购自Elabscience公司；细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）试剂盒购自湖北赛培生物科技有限公司；补体C3（C3）及补体C4（C4）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）试剂盒均购自上海酶联生物公司；总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）试剂盒均购自南京建成生物公司。1.2主要仪器电子分析天平（sartorius公司）、H1850低速离心机（湖南湘仪有限公司）、SuPerMax 3000AL型多功能酶标仪（上海闪谱生物科技有限公司）。1.3试验设计及饲养管理选取(75±5) 日龄，已免疫犬瘟热、细小病毒性肠炎和出血性肺炎疫苗的健康金州黑雄性水貂80只，随机分为4组，每组20个重复，每个重复1只。试验Ⅰ组为对照组，水貂饲喂基础日粮；试验Ⅱ组在基础日粮中添加200 g/t葡萄糖氧化酶，试验Ⅲ组在基础日粮中添加200 g/t过氧化氢酶；试验Ⅳ组在基础日粮中添加200 g/t葡萄糖氧化酶+200 g/t过氧化氢酶。以海杂鱼、鸡肠、鸡头作为动物性原料，膨化玉米作为植物性原料，添加1%育成期水貂专用预混合饲料配制成基础饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表1。试验期60 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.10.014.T001表1基础饲粮组成及营养水平项目76~95 d96~115 d116~135 d原料组成/%海杂鱼45.3843.3640.25鸡肠12.8514.1916.63鸡头24.4124.0824.48膨化玉米16.3617.3717.64预混料1.001.001.00合计100.00100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)15.3616.1817.20粗蛋白/%36.1335.0633.28粗脂肪/%16.5917.3219.76钙/%3.363.283.22磷/%1.221.181.16注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 960 000 IU、VD3 280 000 IU、VE 6 800 mg、VK3 220 mg、VB1 220 mg、VB2 550 mg、VB6 300 mg、VB12 1.5 mg、VC 50 000 mg、烟酸2 100 mg、泛酸1 100 mg、叶酸110 mg、胆碱5 000 mg、生物素10 mg、Fe 8 000 mg、Mn 1 000 mg、Zn 5 000 mg、I 50 mg、Se 20 mg、Co 50 mg[7]。2.营养水平均为实测值。每日6：30和16：30进行饲喂，记录各组水貂的采食量和健康状况。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验期60 d。每天记录各组水貂的采食量。试验开始和结束时，分别对各组水貂进行称重，计算平均日增重和料重比。平均日增重(ADG)=(末重－初重)/试验天数(1)料重比(F/G)=平均日采食量/平均日增重(2)1.4.2腹泻率和病死率饲养过程中，每日早晚饲喂时记录各组水貂腹泻死亡状况，试验结束时汇总。腹泻率=腹泻总数∕(试验数×试验天数)×100%(3)病死率=(死亡个体数∕试验只数)×100%(4)1.4.3血清抗氧化指标及免疫性能试验结束当日使用剪脚趾法采血，每组采血10只，每只1.5 mL，离心后取血清低温保存。按照试剂盒说明测定IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-6、补体C3和C4、IFN-γ、TNF-α含量和T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量，使用生化分析仪测定血清总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）含量。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 25.0进行单因素方差分析，Duncan's法多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1酶制剂对育成期水貂生长性能的影响（见表2）由表2可知，与Ⅰ组相比，试验组育成期水貂的平均日增重分别提高11.82%、14.86%和31.89%（P0.05）；试验组水貂的料重比均显著降低（P0.05），且试验Ⅳ组的料重比最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.10.014.T002表2酶制剂对育成期水貂生长性能的影响组别初重/g末重/g平均日采食量/[(g/(头·d)]平均日增重/[(g/(头·d)]料重比Ⅰ组1 531.10±60.342 084.30±82.16c220.07±10.18c9.22±0.21c23.87±0.63aⅡ组1 522.69±58.652 141.29±78.27b235.36±12.23b10.31±0.25b22.83±0.61bⅢ组1 546.45±62.162 181.85±86.21b238.43±11.65b10.59±0.33b22.51±0.68bⅣ组1 523.96±59.372 253.56±90.12a262.57±12.25a12.16±0.26a21.59±0.65c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2酶制剂对育成期水貂腹泻率和病死率的影响（见表3）由表3可知，试验组水貂腹泻率、病死率均显著低于试验Ⅰ组（P0.05），且以试验Ⅳ组的腹泻率和病死率最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.10.014.T003表3酶制剂对育成期水貂腹泻率和死亡率的影响组别腹泻率病死率Ⅰ组8.33a15.00aⅡ组5.58b5.00bⅢ组6.62b5.00bⅣ组1.67c0c%2.3酶制剂对育成期水貂血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，试验组水貂血清T-SOD、GSH-Px活性均显著高于试验Ⅰ组（P0.05），MDA含量显著低于试验Ⅰ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.10.014.T004表4酶制剂对育成期水貂血清抗氧化指标的影响组别T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(μmol/L)Ⅰ组23.43±1.03b60.12±2.03b3.21±0.15aⅡ组28.23±1.25a71.15±2.23a2.11±0.13bⅢ组28.03±1.15a70.18±2.25a2.18±0.11bⅣ组29.86±1.18a73.17±2.34a2.08±0.11b2.4酶制剂对育成期水貂免疫性能的影响（见表5）由表5可知，试验组水貂血清TP、ALB、IgM、IgA、IL-6和TNF-α含量均高于Ⅰ组（P0.05）；试验Ⅳ组水貂血清中IgG、IL-2含量分别比Ⅰ组提高26.36%和23.57%（P0.05）；试验组水貂血清补体水平C3、C4含量显著高于Ⅰ组（P0.05），Ⅳ组比Ⅰ组分别提高25.84%和31.06%（P0.05）；试验Ⅳ组水貂血清IFN-γ比Ⅰ组提高31.66%（P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.10.014.T005表5酶制剂对育成期水貂免疫指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IgA/(g/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)C3/(mg/L)C4/(g/mL)IFN-γ/(ng/L)TNF-α/(ng/L)Ⅰ组33.21±2.6526.43±2.031.10±0.06c1.12±0.021.21±0.059.08±1.12c8.59±1.0396.52±9.96c208.22±20.32c548.97±102.05c76.39±6.35Ⅱ组34.11±2.9427.11±2.251.19±0.09b1.15±0.031.23±0.0310.32±1.06b8.62±1.05110.33±10.58b242.12+16.68b678.10±56.20b76.72±5.24Ⅲ组34.18±2.4527.03±2.161.16±0.11b1.18±0.051.22±0.0210.40±1.05b8.66±1.07112.88±11.04b240.02+17.55b639.60±89.90b76.64±5.16Ⅳ组34.17±2.4527.86±2.121.39±0.10a1.17±0.041.23±0.0611.22±1.04a8.64±1.07121.46±10.33a272.89±17.38a722.78±66.28a76.66±6.293讨论3.1酶制剂对育成期水貂平均日增重及料重比的影响Zhao等[8]与Liu等[9]研究发现，葡萄糖氧化酶可显著提高鸡、鸭的采食量，降低料重比，提高鸡、鸭的生长性能。Li等[10]研究发现，断奶仔猪饲粮中添加2 000 mg/kg外源性CAT（日粮CAT活性为120 U/kg）可以提高断奶仔猪的生长性能，对其抗氧化能力产生有益影响，并通过抑制LPS攻击仔猪的肝细胞凋亡，缓解氧化应激和肝损伤。詹海杰等[11]研究发现，饲粮中联合添加葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶对肉兔的生长性能、免疫指标具有显著影响。本试验结果表明，育成期水貂饲粮中添加酶制剂时，试验Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组水貂采食量增加，试验Ⅳ组葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的混合添加，平均日采食量提高19.31%，平均日增重提高31.89%，可产生最大的经济效益。3.2酶制剂对育成期水貂腹泻率、死亡率的影响葡萄糖氧化酶作为饲料禁抗重要的替抗绿色添加剂，具有清除自由基、改善肠道内环境等重要作用[12]。过氧化氢酶具有维持肠道上皮细胞功能、增加肠壁厚度等功能[13]。Li等[14]研究发现，葡萄糖氧化酶很好地抑制从家禽体内分离出的致病性沙门氏菌的生长。本研究表明，饲粮中混合添加葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，育成期水貂腹泻率从8.33%降到1.67%，死亡率显著降低，说明两种酶的混合添加可降低水貂的腹泻率和死亡率。3.3酶制剂对育成期水貂血清抗氧化和免疫指标的影响血清T-SOD、GSH-Px和MDA水平可以反映机体的抗氧化能力。孙春阳等[15]研究发现，饲粮中添加葡萄糖氧化酶可提高肉鸡血清T-SOD、GSH-Px水平，降低MDA水平，增强机体的抗氧化性能。本研究发现，当育成期水貂饲粮中添加酶制剂时，T-SOD、GSH-Px水平均有不同程度提高，MDA水平降低，说明酶制剂可以提高育成期水貂的抗氧化性能。血清中的免疫球蛋白由B细胞受抗原刺激分化为浆细胞而产生，主要介导体液免疫。细胞因子多与细胞免疫、体液免疫和炎症反应有关。Wang等[16]研究发现，饲粮中添加葡萄糖氧化酶等酶制剂可以明显提高黄羽肉鸡血清中的IgG和IL-2水平，提高动物机体免疫性能。Ronja等[17]研究发现，水貂腹泻的发生与血清中的IgG含量有直接的关系，当血清中IgG含量升高时，腹泻率降低。本研究表明，当葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的混合添加时，育成期水貂血清的IgG和IL-2水平比对照组分别提高26.36%和23.57%。作为机体免疫机制中补体系统重要组成成分的C3和C4，在介导炎症反应、免疫调节和抵抗病原微生物入侵过程中具有极其重要作用[18]。Wu等[19]与Zhang等[20]研究发现，在补体系统中，C3是补体激活、免疫防御和免疫调节的核心成分。在补体激活的所有途径中，关键步骤是将成分C3转化为C3b和C3a，负责消除病原体和调理作用。IFN-γ是一种高效的抗病毒生物活性物质，血清中的IFN-γ水平在水貂抗肠炎病毒感染发挥重要作用。本研究发现，试验Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组水貂血清补体水平C3、C4和IFN-γ含量显著高于对照组，尤其混合添加Ⅳ组比对照组分别提高25.84%、31.06%和31.66%，对提高育成期水貂免疫性能、降低水貂死亡率均发挥重要作用。4结论在水貂饲粮中的混合添加200 g/t葡萄糖氧化酶+200 g/t过氧化氢酶可以显著提高75~135日龄育成期金州黑雄性水貂的生长性能，降低腹泻率和死亡率，增加抗氧化能力和免疫性能。