牦牛是我国青藏高原高寒地区特有珍稀牛种，分布在青藏高原海拔3 000 m以上地区[1]，是当地人民生活的经济来源，为当地提供奶、肉、毛、燃料等生活必需品，也是耕地的主要劳动力，是当地畜牧业不可或缺的重要畜种[2]。牦牛生长速度缓慢、世代间隔较长、品种选育工作进展较为缓慢，这些因素均可降低牦牛的养殖经济效益，制约牦牛养殖业的发展[3]。女贞子是我国传统中草药，为木樨科植物女贞的果实。研究发现，女贞子中富含齐墩果酸等五环三萜类化合物，具有抑制炎症反应、增强免疫等作用；还含有裂环环烯醚萜苷类、对羟基苯乙醇苷类、磷脂、多糖、挥发油、微量元素等多种化学成分，具有多种生物活性[4]。女贞子可以有效促进动物生长[5-6]，但女贞子提取物在牦牛生产的研究报道相对较少。本研究将女贞子提取物饲喂牦牛，探讨其对牦牛生长性能、养分表观消化率以及血清生化指标等的影响，以期为女贞子提取物在牦牛生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料与动物女贞子提取物由湖南农业大学动物科学技术学院实验室制备，包含多糖、黄酮、三萜类等化学成分，制备方法参照文献[7]，其中女贞多糖含量155 g/kg，齐墩果酸含量13.2 g/kg。试验牦牛由四川省阿坝州金川县庆宁牦牛饲养场提供。1.2试验设计及饲养管理选取48头体重241 kg、42月龄的健康牦牛，随机分为4组，每组12个重复，每个重复1头牛，4组饲粮分别在基础饲粮中添加0（A组）、100（B组）、300（C组）、500 mg/kg（D组）女贞子提取物。根据NRC（2001）推荐肉牛营养需求配制饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表1。日粮精粗比为4∶6。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.004.T001表1基础饲粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米秸秆60.0净能/(MJ/kg)5.26玉米18.0粗蛋白/%12.10麸皮5.2粗脂肪/%2.31豆粕6.7中性洗涤纤维/%48.83棉籽粕6.6酸性洗涤纤维/%32.18菜籽粕1.5钙/%0.54石粉0.4磷/%0.26磷酸氢钙0.6氯化钠0.5预混料0.5注：1.预混料购自北京科瑞大地生物技术有限公司。2.营养水平均为计算值。试验牛以颈枷控制方式单槽饲喂，自由采食与饮水，根据养殖场规章制度执行日常的保健、治疗及免疫等。每天7：00统计牦牛采食量，统计结束在食槽中添加女贞子提取物。试验期60 d。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验开始及试验结束当天8：00测定牛初重和末重，测定前禁食12 h，计算牦牛平均日增重、料重比、平均日采食量。平均日采食量=总采食量/试验天数(1)平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2养分表观消化率试验第28~30 d和58~60 d，收集试验牛的粪便，将每天收集的粪便混匀，-20 ℃保存。按《饲料分析及饲料质量检测技术》[8]测定干物质（DM）含量，参照《饲料中盐酸不溶灰分的测定》（GB/T 23742—2009）测定酸不溶灰分（AIA）含量测定，使用FOSS 8100凯氏定氮仪测定粗蛋白（CP）含量，使用ANKOM XT15全自动脂肪提取仪测定粗脂肪（EE）含量，参照Van Soest等[9]方法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）含量。按照《饲料中钙、钠、磷、镁、钾、铁、锌、铜、锰、钴和钼的测定 原子发射光谱法》（NY/T 3318-2018）检测Ca、P含量。养分表观消化率=[1-(饲粮AIA含量/粪便AIA含量)×(饲粮养分含量/粪便养分含量)]×100%(4)1.3.3血清抗氧化指标试验第60 d，每组选取6头体重接近平均体重的试验牛静脉采血20 mL于采血管，3 500 r/min离心15 min，取上清液分装于2 mL小管，-80 ℃保存。使用试剂盒（上海宝曼生物科技有限公司）测定总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量。1.3.4血清免疫指标使用试剂盒（上海康朗生物科技有限公司）测定免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和干扰素-γ（INF-γ），具体操作方法按照试剂盒说明书进行。1.3.5脂代谢指标使用酶比色法测定甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量，使用选择性沉淀法测定低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2010初步处理，SPSS 20软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1女贞子提取物对牦牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，D组牦牛的末重、平均日采食量和平均日增重均显著高于A组、B组、C组（P0.05），料重比显著低于A组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.004.T002表2女贞子提取物对牦牛生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日采食量/[(kg/(头·d)]平均日增重/[(kg/(头·d)]料重比A组241.17±12.57278.76±13.41b5.78±0.57b0.63±0.08b9.17±0.72aB组242.33±11.62280.46±12.76b5.77±0.53b0.64±0.07b9.02±1.04abC组240.58±11.01280.34±13.07b5.81±0.52b0.64±0.05b9.08±0.87abD组243.76±13.68287.02±12.24a6.35±0.66a0.74±0.05a8.58±0.64b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2女贞子提取物对牦牛养分表观消化率的影响（见表3）由表3可知，D组牦牛对CP、EE以及P的表观消化率显著高于A组（P0.05）。研究表明，随女贞子提取物饲喂量增加，牦牛对DM、CP、EE、ADF、Ca的表观消化率呈升高趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.004.T003表3女贞子提取物对牦牛养分表观消化率的影响组别DMCPEENDFADFCaPA组64.35±2.4355.24±3.75b73.54±1.96c36.43±1.5823.17±2.7755.34±2.2452.19±1.57bB组65.18±2.4156.12±3.27b74.28±1.35c36.12±1.7423.67±2.3555.76±1.9351.86±1.82bC组65.53±2.1857.34±3.66b76.52±1.62b35.89±1.2524.02±2.1856.37±2.0552.74±2.13abD组66.01±2.6559.78±3.03a80.69±1.06a36.75±1.5224.75±2.5356.82±1.8454.12±1.53a%2.3女贞子提取物对牦牛血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，B组牦牛血清GSH-Px和SOD活性显著高于A组（P0.05）；C组和D组牦牛血清T-AOC、GSH-Px和SOD活性显著高于A组，MDA含量显著低于A组（P0.05）。研究表明，随女贞子提取物饲喂量增加，牦牛血清T-AOC、GSH-Px和SOD活性逐渐升高，MDA含量逐渐降低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.004.T004表4女贞子提取物对牦牛血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)A组11.95±1.27c77.52±4.78c87.54±4.23d11.55±0.42aB组12.43±0.77c85.22±6.33b96.39±5.34c10.72±0.34aC组14.75±1.03b93.42±5.87a103.31±6.25b10.11±0.14bD组16.54±0.89a94.43±5.45a115.34±5.04a9.75±0.18c2.4女贞子提取物对牦牛血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，C组牦牛血清IgG和IL-2含量显著高于A组（P0.05），TNF-α含量显著低于A组（P0.05）；D组牦牛血清IgG、IgA、IgM和IL-2含量显著高于A组（P0.05），TNF-α水平显著低于A组（P0.05）。研究表明，随女贞子提取物饲喂量增加，牦牛血清IgG、IgA和IgM含量逐渐升高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.004.T005表5女贞子提取物对牦牛血清免疫指标的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)TNF-α/(ng/L)IL-1β/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)IL-8/(ng/L)INF-γ/(ng/L)A组10.32±0.47b0.68±0.11b2.41±0.27b61.23±1.21a23.11±0.76328.74±5.87c104.55±6.13261.34±11.52552.32±14.26B组10.35±0.52b0.71±0.13b2.42±0.33b60.24±0.95a23.51±0.55332.15±6.12b106.32±6.31263.16±10.82549.56±15.23C组10.78±0.46a0.75±0.08ab2.53±0.31b55.85±1.04b23.46±0.84364.45±6.11a105.52±5.24262.56±8.59546.23±14.57D组10.85±0.43a0.83±0.10a2.82±0.25a51.22±0.75c24.13±0.75373.52±5.62a106.12±6.23264.19±12.34548.21±18.332.5女贞子提取物对牦牛血清脂代谢指标的影响（见表6）由表6可知，C组牦牛血清LDL-C水平显著低于A组（P0.05），HDL-C水平显著高于A组（P0.05）；D组牦牛TG、TC以及LDL-C水平显著低于A组（P0.05），HDL-C水平显著高于A组（P0.05）。研究表明，随女贞子提取物饲喂量增加，牦牛血清TG、TC以及LDL-C水平逐渐降低，HDL-C水平逐渐升高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.004.T006表6女贞子提取物对牦牛血清脂代谢指标的影响组别TGTCLDL-CHDL-CA组0.22±0.02a4.75±0.42a3.12±0.48a1.52±0.18cB组0.21±0.02a4.66±0.39a3.03±0.52a1.59±0.16cC组0.20±0.03a4.53±0.41a2.44±0.43b1.82±0.12bD组0.16±0.02b4.13±0.35b2.32±0.38b1.95±0.08ammol/L3讨论3.1女贞子提取物对牦牛生长性能的影响女贞子中富含多糖、维生素、微量元素等生物活性物质，可以有效满足动物生长发育需求，提高饲粮的营养价值，补充基础饲粮营养物质，而且可以维持动物内环境稳定，调节胃肠道微生物菌群平衡，保障动物健康[10]。乔国华等[11]添加女贞子饲喂羔羊结果表明，试验组羔羊采食量及体重等均明显提高，女贞子有利于提高羔羊的生长性能。本试验中，使用女贞子提取物饲喂牦牛可以显著提高其末重、平均日采食量以及平均日增重，降低料重比，从而改善牦牛生长性能，与上述研究结果相符。盛东峰等[12]研究表明，女贞子有利于提高畜禽的日增重及日采食量，改善生长性能，原因可能与女贞子中含有齐墩果酸、红景天苷、熊果酸等生物活性成分有关。研究表明，齐墩果酸等生物活性成分有利于促进动物胃肠道的健康发育，提高饲料消化利用率，各生物活性成分还可以提高动物免疫能力，增加动物抗逆性，减少应激消耗，因此使用女贞子提取物饲喂动物利于改善其生长性能[13-15]。3.2女贞子提取物对牦牛牛养分表观消化率的影响养分表观消化率高低可有效反映动物对营养物质的吸收情况。本研究表明，饲喂女贞子提取物后，牦牛对DM、CP、EE、NDF、ADF、Ca以及P的表观消化率升高，提示女贞子提取物饲喂牦牛可有效提高牦牛对营养物质的利用效率。唐玲等[16]和张耀文等[17]研究表明，女贞子有利于改善畜禽胃肠组织结构，提高淀粉酶活性，因而有利于促进物质吸收。女贞子可显著提供动物回肠绒毛高度，降低十二指肠和回肠的隐窝深度，有效改善动物肠道组织结构，可提高养分表观消化率，原因可能与女贞子中富含活性成分可调节免疫机能，降低机体炎症等有关[18-20]。研究发现，女贞子可以有效提高牛消化道某些消化酶的活性，有效提高牛对养分的消化利用率[21]。3.3女贞子提取物对牦牛血清抗氧化指标的影响机体正常代谢中能够产生氧自由基等物质，会刺激机体引发脂质过氧化反应，导致机体内MDA等含量升高，MDA会破坏机体正常结构及功能，导致动物生产性能降低[22]。女贞子中含有齐墩果酸和熊果酸等活性成分，可以通过提高机体抗氧化酶活性以及维持脂质体膜稳定等作用提高机体抗氧化能力[23]。本试验结果表明，使用女贞子提取物饲喂牦牛，牦牛血清T-AOC、GSH-Px和SOD水平逐渐升高，MDA含量逐渐降低。朱琪等[24]和戚世媛等[25]试验均表明女贞子可有效提高畜禽抗氧化能力，与本试验结论一致。3.4女贞子提取物对牦牛血清免疫指标的影响免疫球蛋白具有结合抗原、激活补体等重要作用，其水平高低与机体免疫功能关系密切[26]。Wang等[27]体外试验研究发现，女贞子粉可以调节动物免疫机能，上调淋巴细胞增殖活性，调节机体炎性细胞因子。闫先峰等[28]研究发现，饲粮中添加1.0%的女贞子可以提高蛋鸡血清IgG、IgA、IgM含量。曹铮等[29]研究发现，饲喂女贞子可以有效改善热应激期间奶牛的免疫能力。本试验结果表明，随女贞子提取物饲喂量增加，牦牛血清IgG、IgA、IgM以及IL-2水平逐渐升高，TNF-α水平显著逐渐降低，与上述研究结论相符。3.5女贞子提取物对牦牛血清脂肪代谢指标的影响本试验中，随女贞子提取物饲喂量增加，牦牛血清TG、TC以及LDL-C水平逐渐降低，HDL-C水平逐渐升高，说明女贞子提取物可有效调节牦牛脂代谢。曹兰秀等[30]使用女贞子饲喂高脂模型小鼠，结果表明，饲喂女贞子后小鼠TC和TG水平明显降低，进一步分析发现女贞子可能通过对PPARα-LPL通路以及HMGCR表达调控实现降脂作用。研究发现，女贞子中富含的齐墩果酸能够显著降低脂肪代谢相关基因的mRNA和蛋白质表达，选择性抑制脂肪生产。齐墩果酸衍生物3-乙酰基油酸也可以显著降低血清总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇等水平，抑制脂肪沉积[31]。因此，使用女贞子提取物饲喂牦牛可有效调节其血清脂代谢相关指标水平。4结论女贞子提取物可以改善牦牛生长性能和养分表观消化率，提高机体抗氧化能力和免疫功能，对牦牛脂代谢具有一定调节作用，建议适宜添加量为500 mg/kg。