鳗鲡（Anguilla spp.）肉质鲜美、营养丰富，被视为滋补佳品[1]。随着鳗鲡集约化养殖模式的推广，我国鳗鲡产业发展速度较快，但存在一些管理和病害问题[2-3]。在提倡生态养殖的背景下，亟须寻找能够替代水产药品和抗生素的绿色添加剂。肉桂醛具有多重生物学活性，可在抗菌、抗氧化、抑制炎症反应和调节菌群结构等方面促进畜禽动物的肠道健康[4-5]。近年来，通过包埋和纳米乳化等处理方式，肉桂醛在水产动物中也获得了理想的应用效果。如肉桂醛制成的纳米颗粒可显著提高罗非鱼（Oreochromis niloticus）的生长性能，改善罗非鱼在缺氧应激和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）侵染条件下的生理机能，降低病死率[6]。Zhou等[7]研究表明，肉桂醛通过调节肠道消化酶活性和氨基酸转运蛋白（AATs）mRNA水平，提高草鱼的消化和吸收能力。上述深层调节通常与肠道的基础结构息息相关[7-8]，提供了更直观的角度判断肉桂醛等新型添加对动物肠道的影响。目前，肉桂醛在鳗鲡中的应用报道较少，本研究从组织结构的角度初步评价了肉桂醛对鳗鲡肠道的潜在影响，以期为新型饲料添加剂的开发和应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验采取单因素随机试验设计，将大小规格相近、健康状况良好的日本鳗鲡（4.56±0.02）g约36万尾随机随机分为对照组和试验组，每组3个重复，每个重复放养约6万尾，于6口精养池中（15 m×15 m，水深0.7 m）饲养。对照组（C组）日本鳗鲡投喂基础饵料，试验组（P组）日本鳗鲡投喂基础饵料＋250 mg/kg肉桂醛。试验所用基础饵料为市售鳗鲡黑仔配合饵料，由进口鱼粉、鱼油、α-淀粉、复合维生素、复合矿物质等原料制成，基础饵料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.T001表1基础饵料营养水平项目粗蛋白粗脂肪粗纤维总磷赖氨酸粗灰分含量48.56.50.81.83.712.0注：营养水平均为实测值。%肉桂醛由江苏某饲料科技公司提供，分别以二氧化硅和聚丙烯酸钠作为载体和赋形剂，净含量为50%。1.2饲养管理试验期30 d，饵料与水按1.0∶1.2比例打料，每日6：00和18：00投喂。试验期间水体溶解氧保持在5.0 mg/L以上，维持水温在25~27 ℃，pH值在6.5~7.5，氨氮和亚硝酸分别低于盐0.15和0.02 mg/L。1.3测定指标及方法试验结束后，试验鱼进行24 h饥饿处理，从每口池中随机抽取6尾鳗鲡用于后续试验。在冰浴条件下剖取鳗鲡肠道，分别截取前肠、中肠和后肠，以中性福尔马林缓冲液固定，经清洗、脱水、包埋和切片处理，以苏木精-伊红（Hematoxylin - eosin staining，HE）染色法染色。染色完成的切片采用中性树脂封片，室温风干，日产OlympusBX-41TF显微镜进行观察、拍照和测量。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），Duncan's法进行多重比较分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析通过放大观察，横向切片中清晰可见肠道黏膜、黏膜下层、肌层和浆膜等基础结构。鳗鲡前肠、中肠和后肠的组织结构基本相同，主要差异体现在黏膜层。2.1肉桂醛对鳗鲡前肠结构的影响（见图1、表2）由图1可知，C组前肠的整体形态明显优于P组，绒毛密集、细长且具有广泛的分支结构，几乎布满整个肠腔。两组绒毛表层均见柱状上皮细胞整齐排列，外部纹状缘边界清晰，无组织脱落现象。C组中前肠淋巴细胞主要沿基底膜正常排列，P组的部分样本可见淋巴细胞在黏膜下层聚集而呈现轻微的炎性浸润。图1两组鳗鲡前肠切片注：Su为黏膜下层；MC为肌层；Se为浆膜层。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F1a1（a）C组（200 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F1a2（b）C组（100 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F1a3（c）P组（200 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F1a4（d）P组（100 μm）由表2可知，前肠结构显示，C组前肠绒毛数量均显著低于P组（P0.05），形态短粗，有一定的分支退化现象。肌层组织主要由环形平滑肌构成，P组前肠的肌层厚度显著高于C组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.T002表2肉桂醛对日本鳗鲡肠道结构的影响项目组别肌层厚度/μm绒毛数量/个绒毛高度/μm杯状细胞/个前肠C组25.72±2.02b26.32±0.31bc310.84±21.32d5.77±0.21abP组40.86±5.87a30.30±0.14a632.04±22.57a5.56±0.09b中肠C组19.03±2.42c25.13±0.24c285.40±16.54d4.94±0.11cP组39.84±5.34a28.25±0.26ab608.39±19.45ab4.41±0.10d后肠C组23.34±3.25bc24.50±0.21c252.41±19.68e5.94±0.12aP组37.76±5.31a24.56±0.16c513.17±22.51c6.26±0.11a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2肉桂醛对鳗鲡中肠结构的影响（见图2）由图2可知，在C组中，多数样本可见固有层和黏膜下层发生大范围的炎性浸润，绒毛间质宽度明显增加；大量淋巴细胞同时还向上皮细胞之间迁移，引发上皮水肿和脱落现象。P组中虽然也有白细胞聚集（主要是嗜酸性粒细胞）和淋巴细胞迁移现象，但是黏膜结构未受到明显影响。由表2可知，鳗鲡C组和P组中肠的绒毛数量和绒毛高度均低于前肠（P0.05），绒毛分支也明显减少。P组中肠的结构基础优于C组，肌层厚度、绒毛数量、绒毛高度均显著提高（P0.05）。杯状细胞数量显著低于C组（P0.05）。图2两组鳗鲡中肠切片注：Ne为中性粒细胞；Eo为嗜酸性粒细胞；E为水肿；N为上皮脱落。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F2a1（a）C组（200 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F2a2（b）C组（50 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F2a3（c）P组（200 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F2a4（d）P组（100 μm）2.3肉桂醛对鳗鲡后肠结构的影响（见图3）由图3可知，两组后肠均有严重的炎症反应，杯状细胞数量异常增加，P组的部分样本出现绒毛坏死现象。图3两组鳗鲡后肠切片注：HGC为杯状细胞增生；N为上皮脱落；D为变性（坏死）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F3a1（a）C组（200 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F3a2（b）C组（50 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F3a3（c）P组（200 μm）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.11.012.F3a4（d）P组（50 μm）由表2可知，与中肠绒毛数量和绒毛高度相比，鳗鲡后肠的绒毛数量和绒毛高度进一步梯度下降，P组的下降幅度较为明显（P0.05）。除绒毛高度保持优势之外，试验组鳗鲡后肠的绒毛数量和分支形态与对照组相比差异均不显著（P0.05）。3讨论动物肠道的生理功能与其结构基础相适应，改善肠道结构可以促进营养物质的消化和吸收，增强机体对病原体的抵御能力[8]。研究表明，肉桂醛可以显著提高鱼类的生产性能[9-10]。Zhou等[7]研究发现，肉桂醛能够改善草鱼中肠和后肠的绒毛结构，通过增强肠道消化酶活性和上调氨基酸转运蛋白（AATs）mRNA水平提高草鱼的消化和吸收能力。肉桂醛还可以激活胰岛素样生长因子（IGF-1）以增强鱼体对蛋白质的合成与积累[11]。Rolin等[12]研究发现，在饵料中添加1%的肉桂提取物使鲶鱼（Pangasianodon hypophthalmus）酮体的蛋白含量提高了24%。本研究中，肉桂醛整体提高了鳗鲡肠道的绒毛数量、高度和分支结构，在结构基础上改善了肠道的消化和吸收功能。肉桂醛也明显增加了鳗鲡肠道的肌层厚度，为肠道蠕动提供额外的动力[8]，有助于提高鳗鲡的生长。组织细胞之间形成紧密连接构成了肠道黏膜物理屏障的基础[8,13]。研究表明，肉桂醛等植物精油可以通过促进肠道上皮紧密连接蛋白Occludin和胞质蛋白ZO-1等基因的表达增强仔猪肠道的完整性，减少因通透性增加而引发的感染风险[14]。本研究中，一些黏膜结构的异化现象（如绒毛间质增厚和末端膨大等）与炎症反应具有潜在的相关性。Fronte等[15]认为，绒毛增厚是固有层发生炎性浸润的结果，上述变化可以提供更有效的物理屏障防止细菌易位[16]，但浸润发生的程度和影响范围难以界定。因为在C组的中肠以及P组的后肠中还发现了上皮脱落和组织坏死等现象，上述变化均对肠道的吸收效率存在负面影响。一些特定的功能性物质有助于改善鱼类的肠道结构，增强非特异免疫水平，如维生素、氨基酸、胆汁酸和中草药等[17-20]。目前，肉桂醛在相关方面的研究报道还很有限。Zhou等[21]研究发现，肉桂醛能够改善草鱼在嗜水汽单胞菌（A. hydrophila）侵染下的免疫功能，并通过NF-κB信号通路影响炎症相关细胞因子的表达抑制炎症反应。本研究中，肉桂醛明显改善了鳗鲡前肠和中肠的炎症反应，对后肠的影响则相对有限，可能与肉桂醛未经包埋处理有关。但肉桂醛似乎整体下调了鳗鲡肠道的杯状细胞数量，结果与蒋溥等[22]在半滑舌鳎中的研究具有一定的相似性。杯状细胞的突出功能之一是分泌黏液蛋白，进而在肠道上皮外组成黏液屏障抵御病原体[13,16]。Ringø等[16]研究发现，杯状细胞增加是肠道对病原体入侵的免疫应答反应。说明P组后肠中杯状细胞的数量异常增加可能与其发生炎症反应有关，因为在正常情况下，鳗鲡肠道从前至后杯状细胞的数量呈递减趋势[23]。4结论肉桂醛可有效增加日本鳗鲡的绒毛数量和绒毛高度，肌层厚度和绒毛分支也得到改善。肉桂醛可以减少鳗鲡肠道炎症的发生，维持组织结构的完整性。