目前，中药在饲料中的应用较为普遍。用硫黄熏制中药可杀死或者抑制附在药材上的螨虫和虫卵[1]；可杀死或者抑制附在药材上的霉菌[2]；可使药材表皮漂白[3]。硫黄熏蒸后食用会对胃肠有刺激作用[4]。因此，建立饲料中二氧化硫及亚硫酸盐检测方法十分必要。食品中二氧化硫的检测方法有盐酸副玫瑰苯胺法[5]、酸蒸馏滴定法[6]，M-W法（Monier-Williams法，AOAC及美国FDA采用的方法）[7-10]、离子色谱法[11-13]。盐酸副玫瑰苯胺法、酸蒸馏滴定法存在假阳性，结果偏大。样品中挥发性酸较高时，M-W法的结果会偏高。离子色谱法一般需要电化学检测器才可以检测，且对样品前处理的要求比较高[14]。考虑各方法存在的问题，本研究将Monier-Williams法和离子色谱法相结合，建立新的饲料中亚硫酸盐的检测方法。1材料与方法1.1试验原理样品在酸性条件下煮沸，释放出来的二氧化硫由惰性载体氮气带出，在吸收管中被双氧水溶液吸收并氧化为稀硫酸溶液，用离子色谱检测吸收液中的硫酸根含量，换算样品中亚硫酸盐的含量。1.2试验试剂0.01 mol/L氢氧化钠（南京化学试剂股份有限公司，优级纯）溶液、甲基红（南京化学试剂股份有限公司，分析纯）指示剂、3%过氧化氢（南京化学试剂股份有限公司，优级纯）、4 mol/L盐酸（南京化学试剂股份有限公司，优级纯）溶液、硫酸根标准溶液（国家标准物质研究中心，1 000 mg/L）。1.3试验步骤在吸收管中加入3%过氧化氢溶液30 mL，精确称取5~10 g粉状饲料，通过漏斗无损量的投入蒸馏烧瓶中，加入500 mL水。在分液漏斗中加入90 mL 4 mol/L的盐酸，打开冷凝器的自来水，对接口处进行气密性检查。开启分液漏斗活塞将盐酸注入蒸馏烧瓶，关闭活塞，打开气体导管，以0.2 L/min的速度通过氮气，加热至蒸馏烧瓶内的物料沸腾，并在此状态下蒸馏1.75 h，收集吸收液待测。同时做空白试验。1.4仪器条件1.4.1色谱条件戴安IonPac AG11-HC；淋洗液：氢氧根淋洗液；发生器：0~8 min 10 mmol，8~22 min 10~45 mmol，22~24 min 45 mmol，24~29 min 10 mmol；柱温：25 ℃；柱箱温度：25 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：25 μL；检测器：电导检测器；抑制器：AS-RS-4 mm；抑制电流：112 mA。1.4.2绘制标准曲线将硫酸根标准溶液逐级稀释，配制成浓度分别为0、1、2、4、10、20 mg/L的标准工作液。1.4.3样品检测吸取样品溶液1.5 mL于进样瓶中，（稀释体积可根适度调整），进样体积25 μL。1.4.4结果计算通过保留时间定性，记录峰面积；根据绘制的峰面积-浓度绘制标准曲线，结合稀释倍数和称样量来定量。亚硫酸盐含量（以二氧化硫计）（mg/kg）=C×V×64/（m×96）（1）式中：C为测得吸收溶液中硫酸根的浓度（mg/L）；V为吸收液体积（mL）；m为样品重量（g）。2结果与分析2.1色谱图及分离度（见图1、图2）由图1可知，标准溶液中的硫酸根在1.4.1色谱条件下，与氟离子、氯离子、硝酸根、磷酸酸根等分离度良好，RT为13.373 min。由图2可知，饲料样品通过MW法提取后，亚硫酸盐转化为硫酸根，样品中亚硫酸盐转化成硫酸根的色谱峰分离度良好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.024.F001图1硫酸酸根标准溶液离子色谱图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.024.F002图2饲料样品中亚硫酸盐转化的硫酸根的色谱图2.2方法线性关系（见图3）将1 000 mg/L的硫酸根离子溶液稀释为100 mg/L，再配制成浓度分别为1、2、4、10、20 mg/L的标准溶液，进样体积25 μL，保留时间定性，绘制峰面积-浓度标准曲线。由图3可知，标准曲线公式为：Y=3.927 1X-0.072 0，R2=0.999 9，线性关系良好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.024.F003图3工作曲线及线性关系2.3样品消解液的酸度控制样品中可能存在的挥发性有机酸会被一并蒸馏出来进入吸收液，因此样品吸收液在用离子色谱检测前，需要用0.01 mol/L的氢氧化钠溶液中和至中性。试验发现，如果某样品中亚硫酸盐很高，吸收液需要稀释10倍及以上才能检测。在此情形下，吸收液的酸性可以被稀释，可以不必用碱中和，对保留时间无影响。2.4方法的优点本方法采用氮气作为载气，且冷凝管竖直放置，只有气体流出，被吸收液吸收，样品中大量的干扰物质不会出来。因此，本法的前处理方法去基质效果较为理想。通过验证试验，氮气作为载气，将产生的二氧化硫气体充分带出进入吸收液，效率非常高。在样品中添加亚硫酸钠进行添加回收试验时，回收率均在95%以上，多次出现近乎100%的回收率。2.5方法的加标回收试验结果（见表1）由表1可知，该方法测定饲料中亚硫酸盐的回收率较高、精密度好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.024.T001表1饲料中亚硫酸盐的加标回收试验结果样品本底值添加值/(mg/kg)测定值/(mg/kg)平均回收率/%RSD/%12345泥鳅配合饲料未检出109.699.919.539.889.7897.601.6乳猪配合饲料未检出5049.2047.1048.9048.1049.3097.001.9肉鸡配合饲料未检出10094.9098.5099.9097.3096.1097.302.02.6保留时间精密度试验结果（见表2）对3种不同类型饲料样品，称取5个平行样使用MW-离子色谱法进行检测。由表2可知，离子色谱法检测中，硫酸根离子保留时间的重复性相对标准偏差小于0.5%，样品浓度重复性相对标准偏差小于1.2%，本方法具有较好的稳定性。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.024.T002表2离子色谱法保留时间与浓度重复性试验结果试验样品（n=5）保留时间/minRSD/%乳猪配合饲料13.3730.6013.32113.21613.20113.198泥鳅配合饲料13.2110.5213.20513.31613.18513.127南美白对虾配合饲料13.3020.4813.28713.21613.19113.1543结论利用MW法提取，将饲料中亚硫酸钠转化为硫酸根，用离子色谱仪完成硫酸根的定性定量检测。方法的准确度和国际方法一致，精密度和定量限满足检测需求，该方法能够实现饲料样品亚硫酸盐含量的精准检测。