我国茶饮料和茶单宁生产中产生的茶渣资源丰富[1]。茶叶渣中的蛋白质含量很高，且氨基酸种类丰富，还含有粗纤维、矿物质、维生素等多种营养成分[2]。茶叶渣可以提高动物生产性能和抗氧化功能[3]，还可以作为吸附剂改善畜舍环境[4]。但茶叶渣中的单宁、生物碱、纤维素会降低适口性，影响机体对营养物质的吸收和利用[5]。另外，茶叶渣的含水量较高，极易腐败变质。黑曲霉具有生长旺盛、发酵周期短、产酶丰富、酶活性高、能分解抗营养因子、促进营养物质的吸收和利用等优势[6]，能降解霉菌毒素，改善青贮品质7]。本试验将其作为茶叶渣固体发酵饲料的发酵菌种，筛选适合的发酵辅料，并研究其最佳配比，以期为茶叶渣的饲料化利用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1发酵菌种黑曲霉菌粉为本实验室自行分离和收集，活菌数≥1.0×109 CFU/g。1.1.2发酵原料和辅料茶渣（提取过茶单宁后的废弃茶渣）由英德市绿源饮料有限公司提供。发酵辅料玉米皮、麸皮、豆粕、菜籽粕、高粱、米糠均为市售。1.1.3培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、水1 L、37 ℃培养24 h。1.2试验方法1.2.1黑曲霉发酵剂的制备取黑曲霉菌粉在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上接种，摇匀后29 ℃培养24 h。将上述培养液以5%的接种量接种到装有马铃薯葡萄糖琼脂液体培养基的三角瓶中，29 ℃ 180 r/min培养36 h，制成黑曲霉发酵剂。1.2.2固体发酵辅料筛选称取玉米皮、麸皮、豆粕、菜籽粕、高粱、米糠各100 g，与400 g茶叶渣（干燥、粉碎）混合，分别添加3%磷酸氢二钠和1%纤维素酶，加入1%黑曲霉发酵剂，拌匀，装入聚乙烯袋，室温（24~30 ℃）真空发酵45 d。发酵产物105 ℃烘干，粉碎后过40目筛，测定营养水平。1.2.3茶叶渣固体发酵菌种与辅料最佳配比的研究采用4×4双因素试验设计，2个因素分别为黑曲霉发酵剂的添加量和辅料含量，黑曲霉发酵剂的添加量设4个梯度，分别为0、0.5%、1.0%、2.0%，辅料含量设4个梯度，分别为0、10%、20%和30%，共16个处理，每个处理5个重复。将黑曲霉发酵剂按照不同添加量分别添加至不同辅料含量的茶叶渣中，充分搅拌、混匀，装入聚乙烯袋中，室温（24~30 ℃）真空发酵45 d。发酵产物105 ℃烘干，粉碎后过40目筛，测定营养水平。1.3测定指标及方法粗蛋白（CP）测定参照GB 5009.5—2010；粗纤维（CF）测定参照GB/T 6434—2006；粗灰分（ASH）测定参照GB/T 6438—1992；钙（Ca）和磷（P）测定参照张丽英的方法[8]；茶单宁含量测定参照GB/T 8313—2008。1.4数据统计分析数据采用SPSS 20.0统计软件GLM模型进行双因素方差分析，Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同辅料茶叶渣固体发酵的粗蛋白质、粗纤维、茶单宁含量（见表1）由表1可知，添加不同辅料对茶叶渣固体发酵的粗蛋白质含量均显著提高（P0.05），其中，茶叶渣+豆粕的组合粗蛋白质含量最高。其原因在于豆粕可以促进茶叶渣中的不溶性大分子蛋白质转化为可溶性蛋白质，有利于机体的吸收和利用。添加不同辅料对茶叶渣固体发酵的粗纤维水平均显著降低（P0.05），茶叶渣+豆粕组合的粗纤维水平最低。其原因在于豆粕可以促进微生物生长与繁殖，从而更好地降解茶叶渣中的粗纤维。添加不同辅料对茶叶渣固体发酵的茶单宁含量均显著降低（P0.05），说明添加辅料可以降解茶叶渣中的茶单宁，但辅料种类与茶叶渣中的茶单宁降解率并无显著关联。豆粕更有利于发挥微生物的作用，改善固体发酵效果，因此选择豆粕作为茶叶渣发酵辅料进行下一步研究。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.020.T001表1不同辅料茶叶渣固体发酵的粗蛋白质、粗纤维、茶单宁含量组别粗蛋白质粗纤维茶单宁茶叶渣24.31±0.80d18.90±0.67a6.00±0.21a茶叶渣+玉米皮27.16±0.74b14.75±0.51b4.91±0.19b茶叶渣+麸皮25.12±0.64c16.59±0.97b5.12±0.37b茶叶渣+豆粕30.61±0.28a11.40±0.40c4.63±0.47b茶叶渣+菜籽粕26.42±0.81b14.91±0.57b4.81±0.22b茶叶渣+高粱27.90±0.92b15.23±0.62b4.90±0.14b茶叶渣+米糠27.23±0.31b15.67±0.77b5.07±0.19b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）。%2.2不同豆粕与黑曲霉添加量对青贮茶渣营养水平的影响（见表2）由表2可知，以添加黑曲霉发酵剂为1%、豆粕20%的茶叶渣固态发酵饲料营养水平最高，可显著提高茶叶渣固态发酵饲料蛋白质和钙、磷含量（P0.05），显著降低粗灰分和茶单宁含量（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.020.T002表2不同豆粕与黑曲霉添加量对青贮茶渣营养水平的影响黑曲霉添加量豆粕含量粗蛋白质粗纤维粗灰分钙磷茶单宁0023.60±0.60bB18.90±1.00aA3.78±0.07bA0.74±0.10bA0.32±0.03bA6.00±0.50aA10%24.43±0.47abC17.93±0.55aA3.88±0.04abA0.85±0.06abA0.37±0.01abA5.87±0.31aA20%24.87±0.45aD17.64±0.91aA4.01±0.08aA0.96±0.06aA0.40±0.06abA5.47±0.42aA30%25.10±0.50aD17.89±0.69aA3.90±0.10abA0.99±0.09aA0.40±0.05aA5.67±0.50aA0.5%024.47±0.50cAB17.71±1.00aA3.80±0.10bA0.78±0.02bA0.33±0.04bA5.93±0.90aA10%25.83±0.68bB16.65±0.75aB3.89±0.10abA0.93±0.07aA0.38±0.04abA5.80±0.09aA20%27.43±0.71aC14.44±0.86bB4.00±0.04aA0.99±0.11aA0.41±0.04abA5.47±0.11aA30%27.43±0.55aC14.86±0.88bB3.92±0.20abA1.02±0.07aA0.42±0.07aA5.41±0.47aA1.0%024.73±0.81dA16.38±0.44aB3.81±0.12bA0.76±0.15bA0.34±0.04aA6.10±0.70aA10%28.40±0.78cA12.47±0.93bB3.87±0.05bA0.98±0.08aA0.39±0.07aA5.76±0.09aA20%30.60±0.40aA11.40±1.20bC4.05±0.06aA1.03±0.07aA0.42±0.07aA4.60±0.40bA30%29.93±0.31bA11.86±0.57bC3.97±0.14abA1.01±0.02aA0.41±0.04aA4.80±0.85abA2.0%024.97±0.40dA15.34±0.40aB3.81±0.12bA0.79±0.09bA0.34±0.05aA5.97±0.90aA10%28.13±0.71cA12.75±1.86bB3.87±0.12abA0.97±0.06aAA0.39±0.03aA5.78±0.13abA20%28.80±0.80bB11.88±0.74bC4.00±0.09aA1.02±0.05aA0.41±0.09aA4.97±0.85bcA30%28.83±0.90aB12.59±1.01bC3.96±0.14abA1.00±0.10aA0.41±0.04aA4.80±0.80cAP值黑曲霉添加量0.001，线性0.001，线性0.8810.2250.8210.213豆粕含量0.001，线性0.001，线性0.001，线性0.001，线性0.0020.001黑曲霉添加量×豆粕含量0.0010.0460.9990.9701.0000.791注：同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），肩标相同小写字母表示差异不显著（P0.05）。%3讨论茶叶渣在饲料中的应用有3种方式。第1种是直接添加，虽然能代替部分蛋白饲料，提高动物生产性能，但茶叶渣易腐败，直接添加在饲料中难以控制质量[9]。第2种是从茶叶渣中提取有效成分，如茶单宁、茶多糖、茶渣蛋白等，再添加到饲料中。虽然饲喂效果很好，但也面临着提取工艺难度大、产出率低、纯度不高、成本高等问题，想在饲料生产中广泛使用存在较大困难[10]。第3种是利用微生物进行发酵，经微生物固体发酵后的茶叶渣，不仅蛋白质含量有所提高，而且机体难以消化的纤维素得到降解[11]。因此，将茶叶渣利用微生物进行固体发酵生产发酵饲料可以节约成本、提高利用率。固体发酵的原料一般包括2大类：发酵基质和辅料。本试验研究的发酵基质为茶叶渣，而辅料选择玉米皮、麸皮、豆粕、菜籽粕、高粱、米糠6种常用的饲料原料，从而改善茶叶渣的营养水平，提高茶叶渣的饲料利用率。本试验结果表明，豆粕作为茶叶渣的发酵辅料较为适合，这是因为豆粕本身就是一种优质的蛋白质饲料，其经过发酵之后抗营养因子含量降低[12]，能够产生多种易于动物吸收的小肽、益生菌、消化酶等活性因子[13]。黑曲霉为中华人民共和国农业农村部2013年批准允许在饲料中添加的微生物。黑曲霉可分泌淀粉酶、纤维素酶、植酸酶等酶类，能降解茶叶渣中纤维素和茶单宁，提高茶叶渣的蛋白质含量，提高其饲喂价值[14]。本试验结果表明，将黑曲霉作为固体发酵菌种，豆粕作为固体发酵辅料时，可提高茶叶渣固体发酵饲料的蛋白质、粗灰分、钙、磷含量，降低粗纤维和茶单宁含量，与汤小明等[15]和朱飞等[16]的研究结果相似。黑曲霉在利用茶叶渣和豆粕中的营养物质进行自身生长和代谢的过程中，产生纤维素酶和淀粉酶等[17]，利用纤维素酶分解原料和辅料中的部分粗纤维，合成黑曲霉菌体蛋白，从而使蛋白质、粗灰分、钙、磷的含量有所升高，从而改善茶叶渣的营养价值。4结论利用黑曲霉固态发酵茶叶渣时，玉米皮、麸皮、豆粕、菜籽粕、高粱、米糠6种辅料中豆粕最为适合，黑曲霉发酵剂与豆粕的最适添加量为1.0%、20%，其粗蛋白质、粗纤维、粗灰分、钙、磷、茶单宁含量分别为30.60%、11.40%、4.05%、1.03%、0.42%、4.60%。