马齿苋（Portulaca oleracea L，POL）为药食同源草本植物，广泛分布于温带和热带地区。POL主要含有生物碱、甾体、萜类、黄酮类、多糖、有机酸等化学成分，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、保护神经、降血糖、降血脂等多种药理作用。程凤霞等[1]研究大鼠急性湿疹模型发现，马齿苋提取物（POLE）具有抗炎和免疫作用。吕有为等[2]研究小鼠高尿酸血症模型发现，POLE物具有抗氧化、抗病和增强免疫力作用。王杰等[3]采用响应面法水提POL黄酮发现，马齿苋黄酮具有抗氧化活性。梁艳妮等[4]从POL中利用超声波辅助提取工艺优化总黄酮，发现总黄酮具有抗肿瘤和体外抗氧化活性。王成祥等[5]研究幼年大鼠糖尿病模型发现，POL多糖可以促进糖和蛋白质的代谢，保护肾功能。POLE含有多种生物活性成分，但其作用机理研究还不够深入，仍需进一步探索。本试验研究POLE对蛋鸡免疫能力、抗氧化功能和产蛋性能的影响，为进一步拓展POL的生物学功能、开发POLE相关产品、在蛋鸡生产中应用与推广POLE提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物26周龄海兰褐商品鸡由锦州鸿强牧业有限公司提供。1.1.2基础日粮试验基础日粮购自大成农技（葫芦岛）有限公司。主要原料组成为玉米、豆粕、棉籽粕、鱼粉、磷酸氢钙、石粉、氯化钠、微量元素、（硫酸亚铁、硫酸铜、硫酸锰、硫酸锌、亚硒酸钠等）、维生素（VA、VD3、VE、VB2、VB12）、氯化胆碱、功能性氨基酸（L-赖氨酸、DL-蛋氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、赖氨酸等）。营养成分为粗蛋白质≥16.0%、粗纤维≤7.0%、粗灰分≤13.0%、水分≤14.0%、钙为3%~4.2%、总磷≥5.0%、氯化钠为0.3%~0.8%、赖氨酸≥0.9.0%、蛋氨酸为0.42%~0.89%。1.1.3马齿苋提取物制备参照宋依等[6]方法，使用材料总质量10倍的三蒸水浸泡24 h，使用武火使药液沸腾，改用文火使药液保持沸腾煎煮2 h，过滤，收集滤液，滤渣加5倍量的三蒸水用武火使药液沸腾，改用文火使药液保持沸腾煎煮2 h，过滤，收集滤液，两次滤液混匀浓缩至含中药材1 g/mL。1.1.4主要药品及试剂POL产自河南信阳；免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM），白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6），总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛测（MDA）试剂盒均购自宝生物工程有限公司。1.2试验方法选取26周龄海兰褐蛋鸡240只，随机分为4组，每组3个重复，每个重复20只蛋鸡。1组（对照组），2组、3组和4组蛋鸡饮水中分别添加0.5、1.0和2.0 g/L POLE。预试期2 w，34周龄检测免疫、抗炎和抗氧化指标，31~40周龄检测产蛋性能指标，35~36周龄检测蛋品质指标。配制试验全期的日粮使用各种原料均为同一批次，蛋鸡自由饮水，正式试验期84 d。1.3测定指标及方法1.3.1样品采集蛋鸡34周龄时，每组随机选取10鸡，每只鸡翅静脉采血10 mL，4℃静置4 h，3 500 r/min离心10 min，收集血清，-20 ℃保存。1.3.2血清免疫和抗炎指标参考文献[7]至文献[9]利用试剂盒检测IgA、IgG和IgM含量，利用试剂盒检测细胞因子IL-2、IL-10、IL-6和IL-1β含量。1.3.3血清抗氧化指标参考文献[10]至文献[11]利用试剂盒检测血清中T-SOD、GSH-Px、T-AOC、CAT活性和MDA含量。1.3.4产蛋性能试验期间记录每日每组产蛋数、蛋重、投料量、剩余料量、存栏鸡数，计算产蛋率、平均日采食量、平均日产蛋重及料蛋比[12]。产蛋率=总产蛋数/(试验鸡数×试验天数)×100%(1)平均日采食量=总采食量/试验鸡数/试验天数(2)平均日产蛋重=总蛋重/试验天数(3)料蛋比=平均日采食量/平均日产蛋重(4)1.3.5蛋品质每组随机抽取10枚蛋，利用游标尺测定蛋形指数，利用多功能蛋品质测定仪测定蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色，利用蛋壳厚度测定仪测定蛋壳厚度。1.4数据统计与分析试验数据采用统计软件SPSS 17.0进行一维方差分析组间差异。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1POLE对蛋鸡血清免疫、抗炎和抗氧化指标的影响2.1.1POLE对蛋鸡血清免疫和抗炎指标的影响（见表1）由表1可知，2组和3组蛋鸡血清IgA含量极显著高于1组（P0.01），4组显著高于1组（P0.05）；3组蛋鸡血清中IgG含量极显著高于1组和4组（P0.01），显著高于2组（P0.05），2组和4组蛋鸡血清IgG含量均显著高于1组（P0.05）；2组和3组蛋鸡血清IgM含量极显著高于1组（P0.01），4组显著高于1组，3组显著高于4组（P0.01）。研究表明，POLE能够促进蛋鸡血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM的分泌。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.006.T001表1POLE对蛋鸡血清免疫和抗炎指标的影响项目1组2组3组4组IgA/(g/L)2.10±0.32Bc2.85±0.29Aab3.05±0.15Ab2.55±0.29ABbIgG/(g/L)2.67±0.36Bc4.74±0.52ABb4.88±0.56Aa3.67±0.17BbIgM/(g/L)0.70±0.05Bc0.86±0.07Aab0.95±0.06Aa0.82±0.07ABbIL-2/(ng/L)37.03±2.94Bc45.23±1.19ABab50.36±2.69Aa44.01±5.97ABbIL-10/(ng/L)217.17±20.21Bc318.00±52.50Aab364.67±26.73Aa295.50±30.31ABbIL-1β/(ng/L)74.37±9.07Aa60.82±1.35ABb51.97±5.33Bb64.54±5.35ABabIL-6/(ng/L)197.36±15.19Aa172.64±17.71ABb158.85±4.75Bb133.28±10.76Bc注：同行数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。3组蛋鸡血清IL-2含量极显著高于1组（P0.01），显著高于4组（P0.05），2组和4组显著高于1组（P0.05）；2组和3组蛋鸡血清IL-10含量均极显著高于1组（P0.01），4组显著高于1组（P0.05），3组显著高于4组（P0.05）。3组蛋鸡血清IL-1β含量极显著低于1组（P0.01），2组显著低于1组（P0.05）；3组和4组蛋鸡血清IL-6含量均极显著低于1组（P0.01），2组显著低于1组（P0.05），4组显著低于2组和3组（P0.05）。研究表明，POLE能够提高蛋鸡血清抗炎因子含量，降低血清促炎因子含量。2.1.2POLE对蛋鸡血清抗氧化指标的影响（见表2）由表2可知，3组蛋鸡血清T-SOD活性极显著高于1组（P0.01），显著高于2组和4组（P0.05），2组和4组均显著高于1组（P0.05）；2组和3组蛋鸡血清GSH-Px活性均极显著高于1组（P0.01），4组显著高于1组（P0.05），3组显著高于4组（P0.05）。3组蛋鸡血清T-AOC和CAT活性极显著高于1组（P0.01），2组和4组均显著高于1组（P0.05）。2组和3组蛋鸡血清MDA含量极显著低于1组（P0.01），显著低于4组（P0.05），4组显著低于1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.006.T002表2POLE对蛋鸡血清抗氧化指标的影响组别T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)T-AOC/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)1组448.26±14.82Bc585.53±58.05Bc0.82±0.02Bb1.20±0.07Bb5.69±0.35Aa2组494.39±15.91ABb727.60±26.27Aab0.90±0.04ABa1.36±0.07ABa4.33±0.43Bc3组542.80±26.57Aa788.65±55.24Aa0.94±0.07Aa1.42±0.07Aa4.15±0.39Bc4组496.89±26.88ABb692.09±62.61ABb0.90±0.04ABa1.32±0.04ABa5.02±0.30ABb注：同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4、表5与此同。研究表明，蛋鸡日粮中添加POLE能够提高蛋鸡血清的抗氧化功能。2.2POLE对蛋鸡产蛋性能的影响（见表3）由表3可知，POLE各浓度组蛋鸡产蛋率均极显著高于1组（P0.01），蛋鸡的平均日采食量均显著高于1组（P0.05），平均日产蛋重均极显著高于1组（P0.01），料蛋比均显著低于1组（P0.05）。研究表明，POLE能够提高蛋鸡的产蛋性能。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.006.T003表3POLE对蛋鸡产蛋性能的影响组别产蛋率/%平均日采食量/[g/(只·d)]平均日产蛋重/(g/枚)料蛋比1组86.23±1.41Bb112.42±7.06b49.01±2.42Bc2.29±0.05a2组91.04±0.88Aab125.87±8.36a59.41±1.43Aa2.12±0.09b3组91.81±2.25Aa126.04±7.13a59.71±1.15Aa2.11±0.08b4组90.83±1.51Aab125.20±8.31a58.74±1.42Aa2.13±0.09b2.3POLE对蛋鸡蛋品质的影响（见表4）由表4可知，2组和3组鸡蛋的蛋形指数均极显著高于1组（P0.01），3组极显著高于2组和4组（P0.01）；POLE各浓度组鸡蛋的蛋白高度和哈夫单位均极显著高于1组（P0.01），4组极显著高于2组（P0.01），显著高于和3组（P0.05）。4组鸡蛋的蛋黄颜色极显著高于1组和2组（P0.01）。POLE各浓度组鸡蛋的蛋壳厚度均极显著高于1组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.006.T004表4POLE对蛋鸡蛋品质的影响组别蛋形指数蛋白高度/mm蛋黄颜色哈夫单位蛋壳厚度/mm1组1.218±0.017Cc4.99±0.38Cc5.80±0.92Bb55.27±10.37Cc0.331±0.016Bb2组1.250±0.022Bb5.67±0.64Bb6.70±1.49Bb74.65±4.62Bb0.354±0.011Aa3组1.283±0.034Aa5.80±0.38ABb7.60±0.97ABab77.68±2.95ABab0.353±0.016Aa4组1.222±0.023BCc6.22±0.23Aa8.50±0.53Aa83.46±7.15Aa0.356±0.011Aa3讨论3.1POLE对蛋鸡免疫功能的影响血清白细胞介素、血清抗体水平可以反映动物的免疫能力，血清白细胞介素介导免疫细胞活化、增殖与分化，调控炎症反应。IL-2由T细胞或T细胞系产生，能够参与造血功能，调控白细胞活性，为T细胞生长因子。IL-6由活化的T细胞和成纤维细胞产生，IL-1β主要由单核细胞和巨噬细胞产生，IL-1β和IL-6常被称为促炎因子。IL-10由活化的B细胞、单核细胞、巨噬细胞产生，为抑炎因子。生长因子和促炎因子相互作用维持机体炎症反应水平，过度的炎症反应会影响动物的生产性能[13]。IgA、IgG和IgM是由B细胞分泌的抗体活性物质[14]。张贝贝[15]研究发现，日粮中添加精氨酸可能降低肉仔鸡血清中IL-1β和IL-6水平。石海仁等[16]研究发现，日粮中添加藏药“达里”可以提高雪域白鸡血清中IL-10含量。徐光科等[17]研究发现，日粮中添加POL粉提高了乌鸡血清的免疫球蛋IgA和IgG的含量。徐亚慧[18]研究发现，饮水中添加POL发酵物可以提高血清中IgA、IgG和IL-2含量。本研究中，饮水中添加POLE可以提高蛋鸡血清中IL-2、IL-10和IgA、IgG和IgM含量，降低IL-1β和IL-6含量，与上述结果相一致。研究表明，POLE可以激活T细胞，产生IL-2T和IL-6；激活B细胞、单核细胞、巨噬细胞，产生IgA、IgG和IgM、IL-10和IL-1β。通过分泌IgA、IgG和IgM实现体液免疫，通过分泌IL-2T实现细胞免疫，通过抑制IL-1β和IL-6分泌，促进IL-10的分泌实现抗炎作用。3.2POLE对蛋鸡抗氧化功能的影响抗氧化功能增强有助于提高机体免疫水平，SOD、GSH-Px和CAT是重要的抗氧化酶，能够有效清除体内自由基，T-AOC能够反映机体系统性抗氧化及清除自由基的能力，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为MDA，与细胞损伤、脂质过氧化有关，具有细胞毒性，其含量综合反映生物体内防御和免疫反应水平。黄晶等[19]研究发现，日粮中添加POL粉可以显著提高肉鸡T-AOC和T-SOD活性，降低MDA含量，对GSH-Px和CAT活性影响不显著。Ghorbanali等[20]研究表明，日粮中添加POL干粉显著提高肉鸡肝脏中CAT活性，对MDA含量、SOD和GSH-Px活性影响不显著，对血清中MDA含量、CAT抗氧化活性影响不显著。本研究中，饮水中添加POLE极显著或显著提高蛋鸡血清中T-AOC、T-SOD、GSH-Px和CAT活性，降低MDA含量。结果表明，POLE通过提高血清中T-AOC、T-SOD、GSH-Px和CAT活性，提高清除自由基的能力，减少MDA产生，对细胞起保护作用。3.3POLE对蛋鸡产蛋性能的影响陈国妮等[21]研究表明，POL黄酮类化合物能够抑制酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。冯轩彪等[22]研究表明，日粮中添加POL粉能够显著提高东乡黑鸡产蛋率，降低料蛋比，显著提高肠道乳酸杆菌的数量，降低大肠杆菌数量。盛东峰等[23]研究表明，POL粉替代部分日粮显著提高海兰褐鸡的蛋重。徐光科等[17]研究表明，日粮中添加POL粉显著提高乌鸡的平均蛋重和产蛋率，降低料蛋比。本研究中，饮水中添加POLE极显著提高产蛋率和平均日产蛋重，显著提高平均日采食量，显著降低料蛋比。与上述结果相一致，其作用机制可能为POLE提高了蛋鸡的免疫、抗炎和抗氧化活性，从而提高鸡的抗病能力；POLE可能改善肠道微生物菌群，促进营养物质的消化和吸收，进而提高饲料的利用率和产蛋性能。3.4POLE对蛋鸡蛋品质的影响蛋品质能够决定蛋的适口性、贮藏和运输。蛋形指数影响种用价值、破蛋率和孵化率；哈夫单位是衡量蛋白品质的重要指标，哈夫单位越高，蛋白质越黏稠，蛋白品质越好；蛋壳厚度会影响破蛋率，影响蛋贮藏和运输，与钙和磷吸收有关，蛋壳厚度说明机体的吸收功能；蛋黄颜色是蛋品质的主要感官指标，取决于吸收类胡萝卜素含量，影响蛋的商品价值和价格[24]。徐光科等[17]研究表明，日粮中添加POL粉显著提高了乌鸡蛋的哈夫单位、蛋黄色泽、蛋黄比例和粗脂肪含量，添加POL粉可以改善乌鸡的蛋品质。盛东峰等[23]研究表明，POL能够显著改善鸡蛋蛋黄色泽，POL中的类胡萝卜素和其他色素有效地沉积在蛋黄中。本研究中，POLE能够提高蛋形指数、蛋白高度、蛋黄颜色、哈夫单位和蛋壳厚度。机体营养主要来源是肠道吸收，POLE可能促进消化腺分泌，从而促进机体对多种营养的消化、吸收和利用，可能改变肠道菌群。徐亚慧[18]研究表明，马齿苋发酵物组肉鸡盲肠中的沙门氏菌数量显著降低，乳酸菌和双歧杆菌数量明显升高。蛋形指数与种用价值、破蛋率和孵化率成正比，蛋黄颜色加深可以满足消费者喜好，能够产生一定的经济效益。适量的POLE对促进蛋鸡的营养调控和养分吸收可以起到一定的积极作用，对蛋品质具有一定的改善作用，与上述结果相一致，但其作用机制有待于进一步深入研究。4结论饮水中添加POLE可以增强蛋鸡免疫、抗炎和抗氧化功能，提高蛋鸡的生产性能和蛋品质；在本试验的浓度范围内，综合各项检测指标，1 g/L的POLE效果最好。