柴胡（Bupleurum L.）为伞形科多年生草本植物，以干燥根入药。柴胡提取物或制剂能够改善动物肠道结构，增加动物的采食量，降低料重比，从而提高动物生长性能、机体免疫力[1]。2020年版《中国药典》所收录的柴胡品种分别为柴胡（北柴胡，Bupleurum chinense DC.）和狭叶柴胡（南柴胡，Bupleurum scorzonerifolium Willd.）[2]。柴胡属的植物种类繁多、分布广泛[3-5]。目前，甘肃、陕西、山东等地栽培的品种以北柴胡为主，四川、江苏、黑龙江、内蒙古等地主要种植南柴胡，湖北、河北等地栽种三岛柴胡。目前对柴胡进行质量评价的研究中，通常仅以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d为指标，但柴胡中还含有柴胡皂苷c、黄酮、多糖等有效成分[6]。因此，仅以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量作为评价指标并不能全面客观反映柴胡的品质和药理作用。本研究检测目前应用较广泛的北柴胡、南柴胡、三岛柴胡的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、总黄酮、多糖含量，以AHP层次分析法对3个品种柴胡质量进行综合评分，为客观全面评价柴胡品质提供参考。1材料与方法1.1试验材料供试材料为甘肃地产北柴胡，四川地产南柴胡，河北地产三岛柴胡，经铜仁职业技术学院梁玉勇教授鉴定分别为北柴胡、南柴胡和三岛柴胡。1.2主要仪器与试剂LC20-AT高效液相色谱仪购自岛津公司；LA-230S型电子分析天平购自北京赛多利斯仪器公司；XT5118L-OV240电热鼓风干燥箱购自杭州雪中炭恒温技术有限公司；TU-1901紫外可见分光光度计购自北京普析通用仪器有限责任公司。甲醇、乙腈均为色谱纯，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、屈臣氏纯净水。柴胡皂苷a标准品（批号：110777-200507）、柴胡皂苷d标准品（批号：110778-200506）由中国药品生物制品检定所提供；柴胡皂苷c由天津马克生物技术有限公司提供；芦丁标准品（批号：A05GB144263）、葡萄糖标准品（批号：Y19F11J108781）由上海源叶生物科技有限公司提供。1.3测定指标及方法1.3.1浸出物测定取各品种柴胡粉碎，过40目筛，精密称取各品种柴胡粉末约2.0 g，参照《中国药典》方法进行测定其浸出物含量。1.3.2柴胡皂苷含量1.3.2.1色谱条件KromasiL-C18色谱柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水，按照《中国药典》规定进行梯度洗脱，检测波长为210 nm。1.3.2.2对照品溶液的制备精密称定柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、柴胡皂苷c对照品7.16、5.18、7.61 mg，均置于10 mL容量瓶中，加色谱甲醇定容，制得混合对照品溶液，4 ℃保存。1.3.2.3供试样品溶液制备各品种柴胡粉碎，过40目筛，精密称取各柴胡样品粉末约0.5 g，参照《中国药典》方法操作。1.3.2.4方法学考察精密吸取1.3.2.2混合对照品溶液0.1、2.0、5.0、10.0、20.0 μL注入高效液相色谱仪，按1.3.2.1色谱条件进行分析。分别以峰面积为纵坐标，对照品量为横坐标，计算回归方程。1.3.3总黄酮含量1.3.3.1检测方法参考张笑颜等[7]方法，以芦丁对照品浓度（g/L）为横坐标（X），吸光度值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，在510 nm处测定吸光度，计算回归方程。1.3.3.2样品测定精密称取3个品种柴胡粉末约0.1 g，平行3份，按1.3.3.1方法在510 nm波长测定吸光度，代入回归方程，计算总黄酮含量。1.3.4多糖含量1.3.4.1检测方法采用硫酸-苯酚法，参考邓寒霜等[8]方法，以D-无水葡萄糖对照品浓度（g/L）为横坐标（X），吸光度值为纵坐标（Y）绘制标准曲线。1.3.4.2供试品溶液的制备精密称取药材粉末约1.0 g，加纯化水至100 mL，超声30 min，加热回流1 h，冷却，过滤，取滤液1 mL于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，得多糖供试品溶液。1.3.4.3样品测定精密称取3个品种柴胡粉末约1.0 g，平行3份，按1.3.4.1方法在488 nm波长处测定吸光度，计算多糖含量。1.4AHP评价指标权重的建立柴胡中的各种有效成分均具有一定的药理活性。根据各成分的重要性，运用AHP层次分析法[9]，将浸出物、柴胡皂苷（a+c+d）、总黄酮、多糖含量作为权重指标，通过SPSS PRO分析计算各成分的权重得分，多糖的权重得分为0.067 5，总黄酮的权重得分为0.150 9，柴胡皂苷的权重得分为0.390 8，浸出物的权重得分为0.390 8，一致性比例因子（CR）=0.016 40.1，表明各指标成分所得权重具有一致性。综合评分（T）=S浸出物×0.390 8+S柴胡皂苷×0.390 8+S总黄酮×0.150 9+S多糖×0.067 5(1)式中：S为各指标成分的含量。1.5数据统计与分析采用Excel 2010和SPSS 23.0软件对试验数据进行统计分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1混合对照品和柴胡样品的HPLC图（见图1）图1混合对照品和柴胡样品的HPLC图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.F1a1（a）混合对照品的HPLC图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.F1a2（b）柴胡样品的HPLC图2.2柴胡皂苷含量测定方法学考察结果（见表1）由表1可知，柴胡皂苷a含量在0.07~14.32 μg，柴胡皂苷c含量在0.05~10.36 μg，柴胡皂苷d含量在0.08~15.22 μg范围内线性关系良好，试验所用方法精密度、重复性、回收率高，样品24 h内稳定性好，可用于柴胡皂苷的测定。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.T001表1柴胡皂苷含量测定方法学考察结果（n=6）样品回归方程R2精密度相对标准偏差/%稳定性标准偏差/%重复性标准偏差/%加样回收率/%柴胡皂苷aY=0.000 005C+0.033 00.999 81.001.102.3099.80柴胡皂苷dY=0.000 005C-0.062 70.999 50.951.242.0099.10柴胡皂苷cY=0.000 003C+0.008 80.999 70.811.410.9499.432.33个品种柴胡皂苷类成分含量比较（见表2）由表2可知，3个品种柴胡的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c和柴胡皂苷d的含量变化规律一致，均为柴胡皂苷a柴胡皂苷d柴胡皂苷c；柴胡皂苷（a+d）含量高低顺序为北柴胡南柴胡三岛柴胡，三岛柴胡的柴胡皂苷（a+d）含量极显著低于北柴胡和南柴胡（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.T002表23个品种柴胡皂苷类成分含量比较（n=3）种类柴胡皂苷c柴胡皂苷a柴胡皂苷d柴胡皂苷（a+d）柴胡皂苷（a+c+d）北柴胡0.05±0.01B0.30±0.02A0.21±0.03A0.51±0.05A0.56±0.05A南柴胡0.08±0.01A0.25±0.01B0.18±0.02AB0.43±0.03B0.51±0.03A三岛柴胡0.05±0.01B0.19±0.01C0.10±0.01B0.33±0.01C0.38±0.01B注：同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%2.4总黄酮含量测定方法学考察结果（见表3）由表3可知，总黄酮的测定方法精密度、重复性、回收率高，样品在8 h内稳定性好，可用于柴胡总黄酮的测定。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.T003表3总黄酮含量测定方法学考察结果（n=6）对照品回归方程R2精密度相对标准偏差/%稳定性相对标准偏差/%重复性相对标准偏差/%加样回收率/%芦丁Y=10.838 0X+0.010 40.999 61.121.251.80100.302.5多糖含量测定方法学考察结果（见表4）由表4可知，多糖含量的测定方法精密度、重复性、回收率高，样品6 h内稳定性好，可用于柴胡多糖的测定。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.T004表4多糖含量测定方法学考察结果（n=6）对照品回归方程R2精密度相对标准偏差/%稳定性相对标准偏差/%重复性相对标准偏差/%加样回收率/%无水葡萄糖Y=71.050X+0.0130.999 91.081.430.98100.602.63个品种柴胡各指标成分含量及AHP层次分析综合评分结果（见表5）由表5可知，3个品种柴胡中，浸出物含量最高的是北柴胡，为23.12%，极显著高于南柴胡和三岛柴胡（P0.01）。柴胡皂苷（a+c+d）含量最高的是北柴胡，为0.56%，南柴胡和三岛柴胡分别为0.51%和0.38%；北柴胡和南柴胡的柴胡皂苷（a+c+d）含量极显著高于三岛柴胡（P0.01）。总黄酮含量最高的是三岛柴胡，为5.87%，极显著高于北柴胡和南柴胡（P0.01）。多糖含量最高的是北柴胡，为1.21%，三岛柴胡为1.16%，南柴胡为0.94%；北柴胡和三岛柴胡多糖含量极显著高于南柴胡（P0.01）。综合评分最高的为北柴胡。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.023.T005表53个品种柴胡各指标成分含量及AHP层次分析综合评分结果（n=3）种类浸出物/%柴胡皂苷（a+c+d）/%总黄酮/%多糖/%T北柴胡23.12±0.34A0.56±0.05A3.64±0.42B1.21±0.08A9.89南柴胡17.35±0.12B0.51±0.03A3.29±0.18B0.94±0.08B7.54三岛柴胡17.38±0.06B0.38±0.01B5.87±0.17A1.16±0.05A7.903讨论3.1不同品种柴胡浸出物含量的对比分析浸出物是评价中药材质量的重要功能性指标，能够整体反映复杂中药的整体成分[10]，浸出物对制剂工艺影响较大[11]。侍宝路[12]研究发现，日粮中添加0.5 g/kg的柴胡提取物能够调节奶牛激素分泌，从而缓解热应激对奶牛机体的损伤。张钊等[13]报道，阴道整复配合黄芪多糖、柴胡注射液穴位注射对羊阴道脱垂效果良好。《中国药典》对柴胡浸出物含量要求为不低于11.0%，本试验测定的北柴胡、南柴胡、三岛柴胡浸出物含量均符合《中国药典》要求，北柴胡浸出物含量高于药典要求的2倍，显著高于南柴胡和三岛柴胡。中药浸出物中一般含有大量淀粉、蛋白质、植物油等成分，由于柴胡品种、生长环境、气候土壤、栽培管理等方面的差异，会导致淀粉、蛋白质等物质的积累不同，从而影响浸出物的含量。特别是品种不同的药材，其生长繁育过程中需要消耗的营养物质不同，从而导致淀粉、蛋白质等物质的积累量不同，可能是不同品种柴胡之间浸出物含量差异较大的直接原因。3.2不同品种柴胡皂苷含量的对比分析柴胡皂苷是柴胡的重要有效成分，柴胡皂苷具有镇痛、抗炎、解热、保肝利胆等作用[14]。谢涛[15]研究发现，饲粮中添加0.1%柴胡提取物能够降低血清促炎细胞因子活性，从而对肉鸡肠道起一定的保护作用，减轻球虫对肉鸡肠道造成的损伤。柴胡皂苷含量也是评价柴胡质量的主要指标，《中国药典》要求含柴胡皂苷a+柴胡皂苷d总量≥0.30%，本试验检测的3个品种柴胡均达到《中国药典》要求。研究表明，柴胡皂苷c具有抗乙型肝炎病毒（HBV）活性的功能[16]。本试验中，柴胡皂苷a含量顺序为：北柴胡南柴胡三岛柴胡；柴胡皂苷c含量最高的是南柴胡，北柴胡和三岛柴胡含量相当；柴胡皂苷d含量最高的是北柴胡，南柴胡次之，三岛柴胡最低。因此，北柴胡中柴胡皂苷含量整体水平高于南柴胡和三岛柴胡，应用时可根据药理作用选择适合的柴胡品种。3.3不同品种柴胡总黄酮含量的对比分析柴胡中的黄酮类物质具有较强的自由基清除作用，能够调节机体免疫力，抗感染[17-19]。黄甜[20]报道，小柴胡汤对于治疗鸡大肠杆菌感染的疾病疗效显著。戴辉宏等[21]利用升麻、柴胡升举清阳的作用，治疗大肠杆菌感染引起的仔猪黄白痢效果确切。研究表明，柴胡的地上部分，特别是茎和叶中含有大量的黄酮类成分[22-23]。某些地区并不是单纯以柴胡的根部入药，而是将柴胡的全草入药，可以发挥柴胡中总黄酮类成分的作用。本试验中，三岛柴胡总黄酮含量显著高于北柴胡和南柴胡，为5.87%；而北柴胡和南柴胡的总黄酮含量也较高，分别为3.64%和3.29%，可以为柴胡药材的深度开发和综合利用提供参考。3.4不同品种柴胡多糖含量的对比分析柴胡中所含的多糖类成分具有抗辐射、降血脂、增强免疫力等功能[8]。王元荪[24]在雏鸡1~10 d的日粮中加入柴胡、楤木等药材，结果表明，肉鸡的免疫力明显提高，发病率降低，肉品质得到改善。何雯娟等[25]研究发现，在肉仔鸡日粮中添加一定量的柴胡-黄芩配伍提取物可以提升肉仔鸡的生长性能，降低死亡率。本试验中，3个品种柴胡中，北柴胡（1.21%）和三岛柴胡（1.16%）的多糖含量极显著高于南柴胡（0.94%）。因此，种植环境和品种差异对柴胡多糖含量影响较大。石丽霞等[26]研究发现，不同品种柴胡其糖谱专属性存在差异，可以将柴胡多糖作为柴胡的鉴别和评价指标加以应用。4结论本研究以浸出物、柴胡皂苷、总黄酮、多糖等指标综合评价柴胡品质，确保了柴胡质量评价的客观性和可操作性。为保证药用柴胡的质量，改变中药制剂疗效不稳定的现状，应该依据产品开发需求选择合适产地、品种的柴胡资源。