紫花苜蓿（Medicago sativa L.）具有适口性好、草质优良和适应性强等特点[1]，不仅含有均衡的氨基酸、丰富的矿物质与维生素以及类胡萝卜素、类黄酮、多糖和皂苷等大量功能性活性成分，还能够降低胆固醇、调节免疫，对机体内分泌激素的分泌也有积极影响[2]。家禽具有盲肠和独特的嗉囊，能够消化部分苜蓿。但由于苜蓿中的纤维含量较高，饲粮中苜蓿的添加比例过多会造成其抗营养作用增强，影响家禽对矿物质、氮及能量的利用，延长消化时间[3]，限制苜蓿在家禽饲养中的应用。因此，本试验拟探索家禽饲粮中苜蓿草粉的适宜添加比例，既能发挥苜蓿对家禽产蛋性能和品质的积极影响，又能节制苜蓿中纤维成分的抗营养作用。1材料与方法1.1试验设计本试验选用体重2.1 kg左右、44周龄的庄河大骨鸡240只，采用单因素完全随机试验设计，随机分成4个组，分别在饲粮中添加0%、3%、6%、9%的苜蓿草粉，每组3个重复，每个重复20只大骨鸡。饲养试验过程预试验7 d，正式试验28 d，共35 d。1.2试验饲粮试验饲粮按项目团队提出的饲养标准配制[4]，饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.010.T001表1饲粮组成及营养水平原料组成对照组3%组6%组9%组营养水平对照组3%组6%组9%组合计100.00100.00100.00100.00玉米63.1861.5660.0358.59代谢能/(MJ/kg)11.0311.0111.0011.00大豆粕25.6024.4023.0021.20粗蛋白质/%16.5016.5216.5116.50玉米蛋白粉000.100.50钙/%3.413.413.403.40紫花苜蓿粉03.006.009.00有效磷/%0.320.320.320.32磷酸氢钙1.301.301.301.30钠/%0.160.160.160.16石粉8.708.508.308.10氯/%0.160.160.160.16食盐0.260.260.260.26赖氨酸/%0.800.800.800.80小苏打0.200.200.200.20蛋氨酸/%0.510.510.520.52预混料0.500.500.500.50蛋氨酸+半胱氨酸/%0.800.800.800.80蛋氨酸0.230.240.250.26色氨酸/%0.180.180.180.18赖氨酸0.030.040.060.09中性洗涤纤维/%6.507.608.739.94酸性洗涤纤维/%5.125.676.206.72粗纤维/%3.473.914.354.78注：预混料为每千克饲粮提供：Fe 70 mg、Cu 20 mg、Zn 70 mg、Se 0.5 mg、VA 7 000 IU、VD3 2 500 IU、VE 30 mg、VK3 1 mg、VB1 1.5 mg、VB2 4 mg、VB6 1.5 mg、烟酸30 mg、叶酸0.55 mg、D-泛酸10 mg、VB12 0.02 mg、生物素0.16 mg、胆碱400 mg。1.3试验材料苜蓿草粉采自锦州医科大学试验鸡场种植的紫花苜蓿，经自然干燥，取苜蓿植株的前1/3粉碎加工而成。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能每日以重复为单位记录产蛋数，每周以重复为单位统计耗料量，计算产蛋率、料蛋比。1.4.2蛋品质每周各组随机选取10枚鸡蛋进行蛋黄色泽、蛋黄比率、蛋壳厚度、蛋形指数、蛋白高度、哈夫单位等常规蛋品质指标测定。1.5数据统计与分析采用SPSS 18.0软件对数据做单因素方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1苜蓿草粉对大骨鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，6%组产蛋率显著高于其他3组（P0.05）；3%组、6%组平均蛋重极显著高于对照组（P0.01）；9%组的料蛋比极显著高于对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.010.T002表2苜蓿草粉对大骨鸡生产性能的影响项目对照组3%组6%组9%组P值产蛋率/%60.71±2.81b60.90±3.30b66.08±3.02a60.01±3.17b0.029平均蛋重/g59.30±3.09Bc65.83±5.65Aa64.67±4.96Aab61.77±3.94ABbc0.010料蛋比3.13±0.16Bb3.06±0.03Bb3.03±0.13Bb3.43±0.16Aa0.010注：同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（P＞0.05），不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（P＜0.01）；下表同。2.2苜蓿草粉对大骨鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，苜蓿草粉组的蛋黄色泽显著高于对照组（P0.01）。6%组蛋白高度、哈夫单位极显著高于对照组（P0.01）。各组间蛋形指数、蛋黄比例、蛋壳厚度差异不显著（P＞0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.01.010.T003表3苜蓿草粉对大骨鸡蛋品质的影响项目对照组3%组6%组9%组P值蛋黄色泽6.50±0.53Bc9.17±0.94Ab9.83±0.94Aab10.08±1.26Aa0.010蛋壳厚/mm0.34±0.040.32±0.050.36±0.030.36±0.040.117蛋黄比例0.33±0.020.30±0.020.31±0.030.33±0.030.065蛋形指数1.36±0.041.35±0.041.3±0.051.37±0.070.802蛋白高度/cm0.49±0.03Bb0.53±0.09Bb0.58±0.04Aa0.51±0.04Bb0.010哈夫单位66.73±3.12Bb68.69±5.75Bb75.14±3.27Aa66.84±3.52Bb0.0103讨论3.1苜蓿草粉对蛋鸡生产性能的影响产蛋是禽类在神经内分泌系统调节下的复杂生理过程[5-7]。在蛋鸡生殖系统中，卵泡的生长发育经历细胞的增殖分化、类固醇的生物合成、促性腺激素受体的表达等复杂的生理生化变化。在这些变化中，动物雌激素在诱导卵泡发育中起着重要的作用。紫花苜蓿属于豆科植物，富含黄酮、香豆素等植物雌激素，具有与动物雌激素相似的化学结构和功效，可直接或间接作用于雌激素信号通路，具有一定的雌激素样或抗雌激素样的作用[8]，进而可能影响蛋鸡的产蛋率。Liu等[9]在饲粮中添加植物雌激素大豆黄酮发现，大豆黄酮可能通过提高产蛋高峰期与卵泡发育密切相关的促性腺激素受体的表达来促进卵泡发育提高蛋鸡的产蛋性能。Zhao等[10]研究发现，植物雌激素对绍兴鸭在不同生理条件下的产蛋性能有不同的影响，且呈剂量依赖关系。而Yang等[11]在37周龄的海赛蛋鸡饲粮中添加不同剂量植物雌激素槲皮素，结果表明，产蛋率与槲皮素水平相关，添加0.4 g/kg饲料可使产蛋率达到最大、料蛋比最低，而蛋重和采食量均无显著变化。上述结果表明，禽类饲粮中添加适量植物雌激素，可刺激家禽的内分泌激素的改变,从而提高家禽的产蛋性能。而本研究发现，在大骨鸡饲粮中添加6%苜蓿草粉组产蛋率显著高于对照组，但添加3%苜蓿草粉组和9%苜蓿草粉组产蛋率与对照组相比均无显著变化。这可能是由于3%组中植物雌激素含量过低所以对产蛋率影响不大。而9%组虽然植物雌激素的含量最高，但同时苜蓿中的纤维成分也最多，可能会引起肠道菌群的变化，影响苜蓿中富含的黄酮、香豆素等植物雌激素经由肠道细菌转化为苷元的脱糖化作用[12]，进而可能降低苜蓿草粉中含有的植物雌激素对产蛋率的积极影响，而6%的比例可能恰好就是植物激素的作用和纤维作用的最优组合，6%的苜蓿草粉添加比例是产蛋率最高的最佳添加比例。在家禽日粮中添加苜蓿草粉对生产性能的影响，不同的研究之间结果差异很大，Kwiatkowska等[13]研究发现，日粮中添加苜蓿草粉，饲料效率更高，这是由于苜蓿中的各种生物活性化合物，可以提高饲料养分的消化和利用所致。而Lepkovsky等[14]研究发现，日粮中添加5%或更高比例的苜蓿草粉会对肉鸡的生产性能产生不利影响。熊小文等[15]在25日龄崇仁麻鸡母雏日粮中添加苜蓿草粉发现，苜蓿草粉组的料重比高于对照组，可能是由于苜蓿草粉中含有大量的纤维素,增加了动物消化道内源蛋白质、脂肪和矿物质的损失所引起的[16]。Guclu等[17]研究发现，在产蛋鹌鹑的日粮中添加3%、6%和9%的苜蓿草粉对产蛋量、饲料消耗量和饲料效率均没有显著影响。在本研究中，添加苜蓿草粉对产蛋率、平均蛋重和料蛋比与对照组相比均有显著影响。不同研究之间的性能差异可能是由于家禽品种、日龄、饲料中添加苜蓿的品种和苜蓿草粉的加工方式、浓度以及饲养条件的不同所致。3.2苜蓿草粉对蛋鸡蛋品质的影响决定禽蛋蛋黄颜色深浅的主要因素是家禽从饲粮中摄取的类胡萝卜素的种类和数量[18]。天然类胡萝卜素是一类脂溶性色素，主要存在于植物的茎叶中[3]，经动物采食、消化、吸收后，在家禽体内与HDL和LDL结合，沉积于蛋黄中，加深蛋黄色泽，提高蛋品质[19]。类胡萝卜素在苜蓿草粉中的含量高达100~550 mg/kg[20-21]。在家禽的日粮中添加苜蓿草粉，会提高类胡萝卜素的摄入水平。Laudadio等[22]在伊莎褐蛋鸡日粮中添加苜蓿草粉，研究发现，在鸡的蛋黄和血清中β-胡萝卜素的含量均显著高于未添加苜蓿草粉的对照组，并且显著提高伊莎褐蛋鸡的蛋黄颜色。Zheng等[23]在北京油鸡日粮中添加0、5%、8%和10%苜蓿草粉，蛋黄色泽显著加深。以上研究结果与本试验中的蛋黄颜色的变化一致。此外，苜蓿草粉中富含的类胡萝卜素还具有增强抗脂质过氧化作用的抗氧化能力[24]。Akdemir等[25]将富含类胡萝卜素的植物补充到家禽饲粮中，引起蛋黄类胡萝卜素浓度增加，高浓度的类胡萝卜素除影响蛋黄颜色外，类胡萝卜素在雏鸡胚胎健康发育中起着重要的抗氧化剂的作用。蛋壳厚度主要反映鸡蛋的抗破损程度，对包装运输中减少蛋的破损率方面具有重要意义，一般认为蛋壳厚度在0.35 mm以上时，具有良好的运输性和保存性[26]，这一指标主要受家禽对钙的摄入量和吸收量的影响。在本研究中，对照组与添加苜蓿草粉的各组蛋壳厚度无显著差异，说明苜蓿草粉的添加对蛋壳厚度没有消极影响，与Laudadio等[22]在伊莎褐蛋鸡日粮中添加苜蓿草粉对蛋壳厚度无显著影响的结果相一致，而且在本研究结果中，3%，6%组的蛋壳厚度相对于对照组还有增加的趋势，高于对照组0.34 mm的蛋壳厚度，达到0.36 mm。蛋形指数是鸡的种质分类标准之一，适合的蛋形指数可减少破蛋和裂纹蛋的产生，正常范围是1.20~1.58[27]，主要由遗传因子决定[28]。高月等[29]在12月龄健康产蛋豁鹅的日粮中添加苜蓿草粉，研究发现，苜蓿草粉比例的变化未能影响蛋形指数。杨雨鑫等[30]在35周龄新罗曼商品代蛋鸡日粮中添加不同水平的苜蓿草粉，对蛋形指数无显著影响。在本研究中，苜蓿草粉的添加也未对蛋形指数产生显著影响，与以上结果一致。蛋白高度、哈夫单位、蛋黄指数、气室高度等生物学指标[31]是衡量禽蛋新鲜程度的指标。蛋白高度越高，哈夫单位越高，蛋品质越好[32]。本研究表明，3%、6%、9%组的蛋白高度和哈夫单位相较于对照组均有增加，以6%组增加最为显著。这可能与苜蓿草粉中含有的多糖、黄酮等生物活性成分有关。辛小青等[33]研究发现，添加2 000 mg/kg苜蓿粗多糖组在试验第10、12和24周蛋白高度和哈夫单位显著提高。李宁[34]对26周龄尼克蛋鸡饲粮中添加不同水平的苜草素，显著增加蛋白高度和哈夫单位。上述研究结果与本试验结果一致，可能与苜蓿草粉中含有的苜蓿多糖和苜蓿黄酮具有较强的抗氧化能力有关。这种天然的抗氧化成分可以有效地增强母鸡的抗氧化状态，降低脂质过氧化的速度，从而提高母鸡肉蛋产品的新鲜程度、延长保质期[25]。此外，李宁[34]认为，苜蓿中的苜蓿皂苷可能通过调节脂质代谢来改善蛋白质代谢从而对鸡蛋中蛋白质的沉积有一定的作用，以提高鸡蛋的哈夫单位。4结论在庄河大骨鸡的饲粮中添加苜蓿草粉可以提高其生产性能、改善其产蛋品质。6%的添加比例对生产性能及蛋品质各项指标的影响效果最佳。