肉鸡生长性能及死亡率与养殖经济效益密切相关，为确保生产效益、保障肉鸡健康生长，通常在肉鸡日粮中添加饲用抗生素提高肉鸡生长性能，预防疾病，但抗生素的持续使用、误用及滥用会导致产品中抗生素残留，增加细菌耐药性，存在很大的安全隐患，因此，开发饲用抗生素替代品是目前的研究热点。紫苏籽属于《饲料原料品种目录》中可饲用天然植物，其粗提物可以长期用于动物商品饲料生产中[1]。紫苏籽提取物中富含酚酸、不饱和脂肪酸、黄酮及多糖等活性物质[2-4]，具有抑菌、抗炎和抗氧化等多种生物学功能[5]。研究表明，日粮中添加剂紫苏籽或其提取物可以有效改善猪、蛋鸡、水产生物的生产性能[6-8]，但其在肉鸡上的应用及其作用机制有待进一步研究。因此，本试验在肉鸡日粮中添加不同水平的紫苏籽提取物，研究其对肉鸡生长性能、血清抗氧化和免疫功能的影响，为紫苏籽提取物在肉鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料与试验动物紫苏籽提取工艺参考李占君等[9]研究并进行微调，主要工艺参数为：70%乙醇溶液作为溶剂、液料比10 mL/g、提取时间35 min、提取功率80.93 W、水浴温度60 ℃。紫苏籽提取物纯品使用麦芽糊精稀释，得到试验用紫苏籽提取物，紫苏籽提取物主要成分见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.008.T001表1紫苏籽提取物主要成分项目α-亚麻酸/(g/kg)亚油酸/(g/kg)总黄酮/(mg/kg)含量≥258.31≥103.54≥45.38试验动物为爱拔益加（AA）肉鸡，购自河南省鹿邑县满意禽业有限公司。1.2试验设计试验采用完全随机分组，选取360只1日龄AA肉鸡随机分为4组，每组6个重复，每个重复15只肉鸡，分别在A组、B组、C组、D组肉鸡日粮中添加0、150、300、450 mg/kg紫苏籽提取物，其中A组为对照组，紫苏籽提取物等量替代日粮中的麸皮。基础日粮组成及营养水平见表2。试验期42 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.008.T002表2基础日粮组成及营养水平原料组成/%1~21 d22~42 d营养水平1~21 d22~42 d合计100.00100.00玉米淀粉渣7.969.98代谢能/(MJ/kg)12.2512.75豆粕13.5110.18粗蛋白/%19.9719.12玉米55.9155.91钙/%1.060.84玉米蛋白粉3.993.99总磷/%0.710.64膨化大豆1.502.10赖氨酸/%1.101.03麸皮10.9011.61蛋氨酸/%0.490.37椰子油粉0.330.37棕榈油粉1.041.00石粉1.701.70氯化钠0.400.40磷酸氢钙1.101.10赖氨酸1.001.00蛋氨酸0.200.20苏氨酸0.100.10植酸酶0.100.10复合酶0.020.02维生素预混料0.020.02抗氧化剂0.020.02氯化胆碱0.100.10微量元素预混料0.100.10注：1.维生素预混料与微量元素预混料为每千克日粮提供：VA 7 700 IU、VD3 2 755 IU、VE 14.35 mg、VK 2.0 mg、VB1 2.54 mg、VB2 1.21 mg、VB5 5.56 mg、VB7 0.10 mg、VB12 0.10 mg、烟酸1.06 mg、叶酸0.22 mg、Mn 9.46 mg、Fe 62.13 mg、Cu 6.62 mg、Zn 18.88 mg、Se 0.02 mg、I 0.05 mg。2.营养水平均为实测值。1.3饲养管理试验肉鸡在标准肉鸡鸡舍饲养，提供充足的饮水，保证肉鸡自由采食。每天记录试验肉鸡死淘数和采食量。根据养殖规范对试验场地和鸡舍进行严格清扫与消毒，保障鸡舍空气质量，保持所需的温度，肉鸡治疗、免疫和保健等程序参考《无抗肉鸡饲养技术规范》（T/JLWK 12-2021）执行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能饲喂试验期间，以重复为单位每天记录试验肉鸡每日采食量与死淘数，定期统计1日龄、21日龄、42日龄的体重（BW），保证称重时为空腹，计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）和死淘率（DR）。ADG=(末重-初重)/(试验天数×试验鸡数)(1)ADFI=试验阶段总采食量/(试验天数×试验鸡数)(2)F/G=ADFI/ADG(3)DR=死淘数/试验初始鸡数×100%(4)1.4.2血清抗氧化、免疫指标试验最后1 d，每个重复中选择体重接近各组均值的试验鸡1只采血。翅静脉采血4 mL于促凝管，3 000 r/min离心12 min，取上清液保存于EP管中，-20 ℃保存，用于检测血清抗氧化指标和免疫指标。使用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定总抗氧化能力（T-AOC），超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GHS-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量。使用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（(IgM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素（IL-10），具体操作步骤根据试剂盒参考说明书进行。1.5数据统计与分析以重复为单位对各项测定结果进行统计，试验数据采用Excel 2010软件中初步整理，采用SAS 9.2 软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1紫苏籽提取物对肉鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，C组和D组肉鸡42 d体重显著高于对照组和B组（P0.05）。1~42 d，D组肉鸡ADFI显著高于对照组（P0.05）。1~21 d，各组试验鸡ADG差异不显著（P0.05），22~42 d和1~42 d，C组和D组肉鸡ADG显著高于对照组（P0.05）。1~21 d，各组肉鸡F/G差异不显著（P0.05），22~42 d和1~42 d，试验组肉鸡的F/G均显著低于对照组（P0.05）。试验鸡仅在1~21 d出现死亡现象，且各试验组肉鸡的DR均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.008.T003表3紫苏籽提取物对肉鸡生长性能的影响项目A组（对照组）B组C组D组BW/g1 d46.60±0.5347.03±1.0247.33±0.8547.23±1.1521 d776.71±10.31770.39±14.94803.12±23.88810.43±28.8742 d2 171.33±24.47b2 234.93±43.13b2 364.11±22.81a2 388.12±22.85aADFI/[g/(只·d)]1~21 d57.72±0.8957.88±0.9159.74±1.2960.69±1.0822~42 d142.12±2.53137.39±1.43141.23±1.62143.50±2.001~42 d99.92±1.23b97.64±1.58b100.49±1.34ab102.10±1.57aADG/[g/(只·d)]1~21 d34.77±1.0134.45±0.8935.99±0.8736.34±0.7422~42 d66.41±0.72b69.74±1.89ab74.33±1.31a75.13±1.54a1~42 d50.59±1.03b52.10±1.67b55.16±1.34a55.74±1.67aF/G1~21 d1.66±0.021.68±0.031.66±0.031.67±0.0222~42 d2.14±0.14a1.97±0.06b1.90±0.05b1.91±0.05b1~42 d1.98±0.02a1.87±0.03bc1.81±0.04c1.83±0.05cDR/%1~21 d6.67±0.03a4.44±0.04b3.33±0.01b3.33±0.01b22~42 d00001~42 d6.67±1.13a4.44±1.04b3.33±1.21b3.33±1.21b注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2紫苏籽提取物对肉鸡血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，各试验组肉鸡血清中T-AOC显著高于对照组（P0.05）；C组和D组肉鸡血清GSH-Px活性显著高于对照组（P0.05）；D组肉鸡血清CAT活性显著高于对照组（P0.05）；C组和D组肉鸡血清SOD活性显著高于对照组（P0.05）；各试验组肉鸡血清中MDA含量均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.008.T004表4紫苏籽提取物对肉鸡血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)A组（对照组）13.26±1.23b225.15±6.40b45.18±5.23b152.37±5.11c3.58±0.22aB组15.78±0.94a231.38±8.39b46.19±3.72b156.49±4.36bc3.13±0.35bcC组16.11±1.66a280.29±5.11a47.73±4.14b165.82±4.35b3.08±0.61bcD组18.22±1.57a283.46±6.27a53.87±5.89a176.24±8.67a2.97±0.45c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表5与此同。2.3紫苏籽提取物对肉鸡血清免疫功能的影响（见表5）由表5可知，C组和D组肉鸡血清中IgA和IgG含量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.12.008.T005表5紫苏籽提取物对肉鸡免疫功能的影响组别IgA/(mg/L)IgG/(g/L)IgM/(mg/L)IL-6/(ng/L)IL-10/(ng/L)TNF-α/(ng/L)A组（对照组）126.38±7.47c1.25±0.02b346.55±10.1363.82±3.15a39.25±0.67c70.33±2.88aB组128.23±9.65c1.30±0.04ab348.67±8.6753.39±2.64b42.66±1.38bc68.39±1.94abC组143.25±8.98b1.36±0.07a351.08±9.1352.69±2.51b45.96±2.57b65.85±1.83bD组158.43±6.29a0.37±0.08a354.37±8.2250.37±3.63b50.37±1.38a64.91±1.52bC组和D组肉鸡血清抗炎因子IL-10含量显著高于对照组，各试验组肉鸡的促炎因子IL-6含量显著低于对照组（P0.05）；C组和D组试验鸡血清中TNF-α含量显著低于对照组（P0.05）。3讨论3.1紫苏籽提取物对肉鸡生长性能的影响紫苏籽提取物可以提高畜禽的生产性能。杨在宾等[10]在肉鸡基础日粮中分别添加0、150和250 mg/kg的紫苏籽提取物，发现紫苏籽提取物添加含量为150 mg/kg时，肉鸡ADFI和ADG显著高于对照组。宋代军等[11]分别在肉鸡日粮中添加0（对照组）、500、1 000和1 500 mg/kg紫苏籽提取物，并以50 mg/kg金霉素为阳性对照，发现各试验组肉鸡的存活率显著高于对照组，生产性能有提高的趋势，免疫器官指数显著提高。本研究中，紫苏籽提取物能够显著提高42 d肉鸡体重，21~42 d和1~42 d，各试验组肉鸡的ADG显著高于对照组，F/G显著降低，肉鸡早期存活率有明显提高，与上述研究基本一致，可能是由于紫苏籽提取物可以降低消化道pH值，提升鸡肠道中的淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶等活性，进而促进肉鸡对营养物质的吸收，从而提高生长性能。3.2紫苏籽提取物对肉鸡血清抗氧化指标的影响肉鸡养殖过程中出现的应激、炎症会导致体内产生氧化反应，所产生的自由基对细胞中蛋白与遗传物质造成损伤，影响细胞结构与功能的稳定性，进而危害动物健康[12]。肉鸡血清中T-AOC、GSH-Px、SOD活性可以反映抗氧化系统对外来刺激的应对能力；MDA是体内脂质过氧化反应的终产物，其含量可直接反映体内脂质过氧化物的程度，间接表明细胞损伤的程度[13]。梁先伟[14]在蛋鸡日粮中添加紫苏籽提取物，发现紫苏籽提取物可促进蛋鸡脂质代谢，影响MDA含量，提高鸡蛋的营养品质和蛋鸡生产性能。研究发现，紫苏籽提取物可以通过增强鸡体内抗氧化活性提升鸡的生产水平[15-17]。因此，紫苏籽提取物能够提高血清中抗氧化酶活性，降低MDA浓度。3.3紫苏籽提取物对肉鸡免疫功能的影响血清中免疫球蛋白和细胞因子等是衡量肉鸡机体免疫水平的重要指标，较强的免疫能力可有效保证鸡群整体健康，是保证肉鸡生产水平的基础[18]。程慧林等[19]研究发现，紫苏籽提取物在鸡日粮中添加量超过0.1%时，肉鸡血清中IgG和IgM含量有显著提升。宋代军等[11]研究发现，在肉鸡日粮中添加0.5%水平的紫苏籽提取物可以提高肉鸡免疫器官指数和IgG含量，与本研究结论基本一致。但目前没有关于紫苏籽提取物影响肉鸡血清中细胞因子含量的报道。但有研究表明，紫苏籽提取物可以作用于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和NF-κB两条经典的信号通路，阻碍NF-κB/NF-κB抑制蛋白(IκB)复合物合成和降解，定向抑制p38-M APK信号转导通路中TNF-α的产生，产生抗炎作用[20]。紫苏籽提取物中α-亚麻酸和亚油酸代谢过程中会影响二十碳五烯酸（EPA，C20∶5n-3）和二十二碳六烯酸（DHA，C22∶6n-3）的合成[21]，EPA和DHA可能影响细胞膜表面脂筏的脂肪酸组成与IL-10受体信号分子在膜上的分布，从而提高肉鸡血清中IL-10含量。因此，紫苏籽提取物能提高肉鸡血清中免疫球蛋白含量，通过影响细胞内细胞因子与炎症因子的合成提高肉鸡健康水平。4结论紫苏籽提取物可以有效提高肉鸡生长性能、血清抗氧化能力和免疫功能，且最适添加量为300 mg/kg。