2011年，柴达木绒山羊被认定为国家级畜禽新品种[1]。柴达木绒山羊长期生活在高寒环境中，具有适应性强、耐粗饲[2]、绒毛细长有光泽、产绒量好的优点[3]，是青海省的优良畜种[4]。双歧杆菌可刺激肠内黏膜和机体免疫反应，抑制、杀灭革兰氏阴性菌[5]。双歧杆菌在肠道中定植后，可产生维生素及丙氨酸、缬氨酸等氨基酸类物质供宿主利用[6]，还具有影响细胞凋亡和纤维素代谢[7]的作用。目前，双歧杆菌多作为食品添加剂在食品生产、辅助性药物治疗等方面应用，在单胃动物方面的研究也多集中于复合益生菌产品，而双歧杆菌单剂对反刍动物调控作用的研究较少。因此，本研究探讨短期补饲双歧杆菌单剂对柴达木绒山羊生长性能和血清生化指标的影响，以期为反刍动物无抗养殖提供技术参考。1材料与方法1.1试验设计本试验于2020年2月至4月在青海伊清农牧科技有限责任公司进行。双歧杆菌单剂（50亿活菌/kg）及基底辅料购自内蒙古和美科盛生物技术有限公司。选取健康、体况相近的6月龄柴达木绒山羊60只，随机分为3组，每组20个重复，每个重复1只。对照组绒山羊饲喂基础饲粮，LD组、HD组在基础饲粮的基础上添加双歧杆菌使其含量达到5×106、5×107 CFU/g。试验期间，组间分群单圈饲养，绒山羊自由饮水，正常防疫。预试期7 d，正式试验期30 d。基础饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.004.T001表1基础饲粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米39.92代谢能/(MJ/kg)10.97豆粕12.99粗蛋白质/%15.99小麦麸7.73钙/%0.79菜籽饼6.93总磷/%0.40石粉1.42赖氨酸/%0.67预混料1.01蛋氨酸/%0.26干玉米秸秆30.00中性洗涤纤维/%33.34酸性洗涤纤维/%19.79注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 2 000 IU、VD 342 IU、VE 200 mg、铜18 mg、锌16 mg、碘0.36 mg、硒0.56 mg、钴0.08 mg、锰15 mg、铁50 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2样品采集试验结束前1 d，20：00开始禁食，第2 d 8：00，试验羊空腹颈静脉采血3 mL，血样静置30 min，3 500 r/min离心15 min，分离血清后-80 ℃保存。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能正式试验开始时第1 d和第30 d，空腹状态下测定各组试验羊体重，计算平均日增重。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)1.3.2血清指标测定本研究测定的血清生化、免疫和抗氧化相关指标ELISA酶标反应试剂盒购自江苏酶标生物科技有限公司，TecScan Safire2多功能酶标仪（瑞士）进行检测。血清生化指标：谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、雌二醇（E2）、生长激素（GH）、胰岛素（INS）、尿素（UREA）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、总胆固醇（TC）。血清免疫指标：免疫球蛋白A（IgA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、免疫球蛋白G（IgG）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-2（IL-2）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-6（IL-6）、球蛋白（GLB）。血清抗氧化指标：超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）。1.4数据统计与分析数据采用Excel软件对数据进行初步整理，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA）检验，Duncan's法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响（见表2）由表2可知，LD组和HD组绒山羊平均日增重均显著高于对照组（P0.05），但HD组和LD组绒山羊的平均日增重差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.004.T002表2饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响项目对照组LD组HD组初重/kg21.18±1.7620.97±2.3021.83±1.85末重/kg24.70±2.0926.27±2.5927.47±2.18平均日增重/[g/(只·d)]117.50±10.83b176.67±9.73a188.33±11.15a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，HD组绒山羊血清ALB、TC、TG、E2、GH、TP的含量和AST的活性均显著升高（P0.05），但UREA含量显著降低（P0.05）。与对照组相比，LD组绒山羊血清GH含量显著升高（P0.05），但AST、ALT、ALP活性和INS的含量均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.004.T003表3饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响项目对照组LD组HD组AST/(IU/L)313.10±17.32b291.14±5.65c338.98±3.91aALT/(U/L)82.65±2.81a69.30±2.66b85.71±3.70aALP/(IU/L)12.75±1.27a9.44±0.54b13.99±2.03aALB/(g/L)305.75±14.63b320.38±29.18b365.40±13.96aTC/(mmol/L)14.10±0.18b14.26±0.65b16.26±0.45aTG/(µmol/L)1 326.44±10.41b1 336.88±19.60b1 796.67±51.21aE2/(ng/L)145.93±10.13b157.84±12.37ab165.28±12.45aGH/(μg/)L10.26±0.37c14.40±0.95b15.74±0.65aINS/(mIU/L)42.73±1.63a36.99±0.42b46.66±5.62aUREA/(mmol/L)18.07±1.54a19.61±1.65a16.04±1.31bTP/(mg/L)402.35±21.51b404.11±19.12b455.31±35.46a与LD组相比，HD组绒山羊血清AST、ALT、ALP活性以及ALB、TC、TG、GH、INS、TP的含量显著增加（P0.05），但UREA含量显著低于LD组（P0.05）。2.3饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组和LD组相比，HD组绒山羊血清IL-1β、IgG、IgA、IgM、IL-2、IL-4、GLB、IL-6的含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.004.T004表4饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清免疫指标的影响项目对照组LD组HD组IL-1β/(ng/L)49.96±5.44b51.51±4.81b59.71±8.34aIgG/(mg/L)53.46±2.10b60.90±4.19a63.19±5.19aIgA/(mg/L)240.12±14.45c266.45±17.33b304.16±32.30aIgM/(mg/L)1 505.12±87.66c1 812.20±149.15b2 006.31±79.61aIL-2/(ng/L)872.16±31.20b799.11±28.56c995.62±56.39aIL-4/(ng/L)63.76±0.77b66.17±1.54b82.36±4.80aGLB/(mg/L)266.58±25.94b279.21±15.46b299.57±43.09aIL-6/(ng/L)128.30±7.49b124.23±8.60b145.79±10.78a与对照组相比，LD组绒山羊血清IgG、IgA、IgM的含量显著升高（P0.05），IL-2含量显著降低（P0.05）。LD组绒山羊血清的IL-4、GLB、IL-6含量与对照组相比差异不显著（P0.05）。2.4饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，LD组绒山羊血清GSH-Px、LDH的活性显著升高（P0.05），CAT活性显著降低（P0.05）.10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.004.T005表5饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清抗氧化指标的影响项目对照组LD组HD组GSH-Px/(U/mL)1 386.06±170.78c1 518.65±108.70b1 811.39±84.31aMDA/(μmol/L)6.31±0.43b6.21±0.44b7.61±0.30aSOD/(U/mL)15.10±0.48b15.34±0.71b20.37±2.19aLDH/(IU/L)5.65±0.49b7.24±0.67a7.88±0.86aCAT/(U/mL)213.29±2.75a158.78±6.07c189.04±3.16bLD组绒山羊血清的SOD活性和MDA与对照组相比差异均不显著（P0.05）。与对照组相比，HD组绒山羊血清GSH-Px、SOD、LDH的含量和MDA的含量均显著升高（P0.05），CAT活性显著降低（P0.05）。与LD组相比，HD组绒山羊血清的GSH-Px、SOD、LDH、CAT的活性和MDA的含量显著提高（P0.05）。3讨论3.1饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响在高寒牧区，补饲可以提高动物生长性能，缓解高寒高海拔气候对动物的不利影响[8]。补饲双歧杆菌可产生维生素等营养物质供宿主利用，增强宿主对营养物质的吸收，促进动物生长发育。曹健等[9]研究发现，添加双歧杆菌可提高肉羊的平均日增重。李海珍[10]研究发现，添加双歧杆菌后试验组仔猪的平均日增重显著高于对照组。本试验中，与对照组相比，LD组和HD组绒山羊的平均日增重显著增加，但不同添加剂量对平均日增重影响的差异不显著。饲粮中添加一定量的双歧杆菌可提高柴达木绒山羊的生长性能，原因可能是适当补饲双歧杆菌能够促进机体对营养物质的吸收。3.2饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响血清生化指标可综合反映动物新陈代谢情况[11]，其中ALB含量变化与蛋白质的消化代谢有关[12]。AST、ALT是肝脏的代谢产物，肝脏损伤后，ALT活性上升[13-14]。本试验中，HD组绒山羊血清的AST、ALB、ALT的活性比对照组和LD组显著升高。饲粮中添加5×107 CFU/g的双歧杆菌后可能对柴达木绒山羊肝脏等与代谢有关组织的健康具有一定的促进作用，增加机体对营养物质的利用，与Yi等[15]、Tian等[16]的研究结果相似。E2可以影响家畜生殖器官的发育并参与细胞的增殖和分化[17]。INS和GH可促进糖原、脂肪和蛋白质的合成和代谢过程，INS含量可反映动物机体能量代谢状况[18]。TP含量越高，代表体内蛋白质的代谢情况越好[19]。TG的主要功能是供给与储存能源以及固定、保护内脏[20]。UREA是体内蛋白质代谢的终产物，血清中尿素氮含量越低代表体内蛋白沉积越好[21]。本试验中，HD组绒山羊血清的GH、INS、TP、TC、E2含量显著高于对照组和LD组，UREA含量显著低于对照组和LD组，饲粮中添加5×107 CFU/g双歧杆菌后可能对柴达木绒山羊体内糖类、脂质及蛋白质等营养物质的消化代谢具有一定的促进作用，利于体内蛋白质的沉积，减少营养物质的浪费，对柴达木绒山羊的生长与能量代谢具有促进作用，与王雪飞[22]在肉鸡饲粮中添加苦豆籽粕-两歧双歧杆菌合生元得到的结果一致。3.3饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊血清免疫指标的影响IgA、IgG、IgM的含量升高，表示机体免疫功能的提高[23]。本试验中，HD组柴达木绒山羊血清中IgA、IgG、IgM含量显著升高，表明饲粮中添加双歧杆菌可提高柴达木绒山羊的免疫球蛋白含量，提高其机体免疫功能。IL-lβ是一种急性炎症细胞因子，参与感染、应激等过程的调节[24]。IL-1β、IL-6等促炎细胞因子可反映机体的炎症状态[25]。IL-2能够刺激T细胞生长[26]。IL-4可减轻炎症反应[27]。IL-4和IL-13可诱导B细胞分泌免疫球蛋白E（IgE），激活肥大细胞参与免疫调节[28]。在本试验中，与对照组相比，HD组绒山羊血清的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6含量均显著提高，表明饲粮中添加双歧杆菌可以有效调节机体的免疫和炎症反应。管晓冉等[29]研究发现，双歧杆菌发酵果蔬汁能提高小鼠机体的免疫功能。研究表明，双歧杆菌的添加可提高柴达木绒山羊的免疫功能，促进机体炎症反应调节，与范金波等[30]发现长双歧杆菌和青春双歧杆菌能够促进提高小鼠免疫力的结果相似。3.4饲粮中添加双歧杆菌对柴达木绒山羊抗氧化指标的影响SOD能够有效抑制自由基的产生和转移[31]。内脏细胞破损后，血清中LDH含量增高[32]，其含量与能量转化相关[33]。本试验结果显示，HD组柴达木绒山羊血清中SOD、GSH-Px、LDH、CAT的活性均显著高于对照组和LD组，饲粮中添加双歧杆菌可提高机体的抗氧化能力，清除体内产生的自由基，对肝脏细胞的健康具有一定的促进作用，还可促进机体的能量转换。MDA是机体脂质过氧化强度重要指标[34]。本试验中，HD组绒山羊血清中MDA的含量显著提高，表明饲粮中添加双歧杆菌后，体内脂质过氧化程度升高，机体细胞的损伤程度也有一定增加，但是本试验结果中MDA含量处于正常范围内。4结论饲粮短期添加双歧杆菌对柴达木绒山羊的生长代谢，免疫功能以及抗氧化功能均具有一定的改善进作用，建议添加5×107 CFU/g的双歧杆菌为宜。