猪瘟是我国重点防控的主要猪病之一，通过采用以猪瘟疫苗免疫接种为主的综合防控措施，已有效控制了猪瘟在我国的流行。但受到猪瘟母源抗体的干扰，仔猪免疫猪瘟疫苗的首免一般在4周龄左右，而此时正处于仔猪断奶时期。受到断奶应激的影响，仔猪极易发生以肠道黏膜破坏、腹泻、生长缓慢、免疫力下降等为主要特征的“断奶应激综合征”[1]，直接降低猪瘟疫苗的免疫效果，甚至造成疫苗免疫失败。如何改善断奶仔猪的肠道功能、提高生长性能、降低腹泻率、增强猪瘟疫苗的免疫效果，是仔猪健康养殖中亟待解决的难题。抗菌肽是生物机体产生的一类具有广谱抗菌活性和免疫调节作用的小分子多肽，可保护生物机体免受病原微生物的侵害，具有抗菌谱广、不产生耐药性、绿色环保等优点[2-4]。抗菌肽能够改善动物肠道功能，促进营养物质消化吸收，提高生长性能，改善机体健康状况，是目前具有潜在应用价值的抗生素替代品之一[5-8]。本研究探讨不同添加水平的抗菌肽对断奶仔猪生长性能、腹泻率和猪瘟疫苗免疫效果的影响，为抗菌肽在仔猪养殖生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料抗菌肽购自中农颖泰林州生物科园有限公司。90头28日龄断奶“杜×长×大”三元杂交仔猪，体重为（7.15±0.17）kg，由河南省林州市玉生养殖场提供。1.2疫苗、试剂盒猪瘟活疫苗（传代细胞源）购自普莱柯生物工程股份有限公司。猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒购自爱德士公司。免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）检测试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。1.3试验设计将90头断奶仔猪分别免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源，1头份），疫苗免疫完成后，随机分成未添加组、添加Ⅰ组、添加Ⅱ组等3个处理组，每组3个重复，每个重复10头仔猪。未添加组、添加Ⅰ组、添加Ⅱ组分别在基础日粮中添加0、0.05%、0.10%抗菌肽。基础日粮组成及营养水平（风干基础）见表1。试验仔猪自由采食与饮水，试验期30 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.006.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米61.0消化能/(MJ/kg)14.29豆粕21.0粗蛋白/%18.18麦麸9.0粗脂肪/%4.31鱼粉4.0钙/%0.80大豆油2.0总磷/%0.57石粉0.5赖氨酸/%0.81磷酸氢钙0.5蛋氨酸/%0.33食盐0.5赖氨酸0.3蛋氨酸0.2预混料1.0注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VD3 3 000 IU，VE 120 IU、VB1 15 mg、VB2 5.0 mg、烟酸50 mg、D-泛酸20 mg、叶酸2.0 mg、Fe 80 mg、Zn 60 mg、Cu 40 mg、Mn 10 mg、I 0.4 mg、Se 0.3 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能根据每头仔猪的试验初重和末重计算平均日增重；根据每日仔猪的饲料消耗量计算平均日采食量；根据平均日采食量和平均日增重计算料重比。平均日增重=(末重－初重)/试验天数(1)平均日采食量=(投料量－剩料量)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2腹泻率每日观察各重复内试验仔猪的腹泻情况，根据腹泻头次计算腹泻率。腹泻率=仔猪累计腹泻头次/(试验仔猪头数×试验天数)×100%(4)1.4.3猪瘟疫苗免疫效果1.4.3.1血清样品采集试验结束后，仔猪前腔静脉处采集血液约5.0 mL，待其自然凝集后分离析出血清样品，-20 ℃保存，用于检测相关指标。1.4.3.2猪瘟抗体水平的测定利用猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒依次对血清样品进行检测，当阻断率≥40%时判为阳性。1.4.3.3免疫球蛋白和细胞因子含量的测定利用试剂盒依次测定血清样品中IgA、IgG、IgM、IL-2、IL-4、IFN-γ的含量。1.5数据统计与分析采用SPSS 13.0软件对数据进行方差分析，Duncan's法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1抗菌肽对断奶仔猪生长性能及腹泻率的影响（见表２）由表2可知，与未添加组相比，添加Ⅰ组、添加Ⅱ组断奶仔猪的末重、平均日采食量、平均日增重均显著升高（P0.05），料重比和腹泻率均显著降低（P0.05）。与添加Ⅰ组相比，添加Ⅱ组仔猪平均日采食量、平均日增重均显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.006.T002表2抗菌肽对断奶仔猪生长性能及腹泻率的影响组别初重/kg末重/kg平均日采食量/[g/(头·d)]平均日增重/[g/(头·d)]料重比腹泻率/%未添加组7.13±0.1516.62±0.42b571.25±6.17c316.33±4.85c1.81±0.04a25.64±3.26a添加Ⅰ组7.16±0.1717.17±0.46a585.54±6.25b333.67±4.97b1.75±0.04b10.14±1.21b添加Ⅱ组7.15±0.1817.42±0.47a592.32±6.15a342.33±4.78a1.73±0.03b6.87±0.78c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2抗菌肽对断奶仔猪猪瘟疫苗免疫效果的影响（见表3）由表3可知，与未添加组相比，添加Ⅰ组、添加Ⅱ组猪瘟抗体阻断率及血清IgA、IgG、IL-2的含量显著升高（P0.05）；与添加Ⅰ组相比，添加Ⅱ组猪瘟抗体阻断率及IgG、IL-2含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.13.006.T003表3抗菌肽对断奶仔猪猪瘟疫苗免疫效果的影响组别猪瘟抗体阻断率/%IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-2/(ng/L)IL-4/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)未添加组52.42±8.85c1.35±0.31b10.24±1.21c0.98±0.14208.56±6.52c102.46±5.14412.24±9.85b添加Ⅰ组63.14±7.14b1.74±0.34a12.45±1.15b1.01±0.13217.44±7.85b105.47±5.71418.95±10.21ab添加Ⅱ组71.42±6.54a1.89±0.33a13.94±1.11a1.05±0.13228.95±8.14a106.79±5.84425.89±9.78a3讨论3.1抗菌肽对断奶仔猪生长性能的影响李平等[9]研究表明，21日龄断奶仔猪日粮添加50、100 mg/kg抗菌肽均能够显著提高日粮中干物质和粗蛋白质的表观消化率，改善断奶仔猪肠道的绒毛形态，提高断奶仔猪的日增重。肖发沂等[10]研究表明，日粮中添加1.0 g/kg抗菌肽能可使28日龄断奶仔猪的平均日增重提高11.31%，料重比降低9.55%。本研究表明，日粮添加0.05%和0.10%抗菌肽均能够显著提高28日龄断奶仔猪的日采食量和日增重，降低料重比，与李平等[9]、肖发沂等[10]的研究结果相似。但上述试验对抗菌肽最适添加剂量的确定存在一定差异，可能与抗菌肽的种类、来源、制备工艺、纯度以及仔猪的日龄、品种、日粮组成、健康状况、饲养管理水平不同有关。抗菌肽进入断奶仔猪肠道后能够抑制肠道内有害菌群的代谢活动，提高肠道黏膜绒毛高度以及对营养物质吸收的效率，进而提高断奶仔猪的生长性能。3.2抗菌肽对断奶仔猪腹泻率的影响药物治疗是断奶仔猪腹泻时有效的干预手段之一，然而大量使用抗生素所产生的副作用严重危害人体健康[11]。徐雅萍等[12]在日粮中添加0.5%的抗菌肽制剂代替硫酸黏杆菌素，有效防治了断奶仔猪的腹泻。肖发沂等[10]研究表明，日粮添加1.0 g/kg抗菌肽可使28日龄断奶仔猪腹泻率降低69.28%。本研究表明，日粮添加0.05%和0.10%抗菌肽均能够显著降低28日龄断奶仔猪的腹泻率，与徐雅萍等[12]、肖发沂等[10]的研究结果一致，表明抗菌肽能够改善断奶仔猪的肠道健康。3.3抗菌肽对断奶仔猪猪瘟疫苗免疫效果的影响仔猪在断奶后的前2周易受到环境和营养等应激因素的影响，导致机体免疫力和抗病力迅速下降，此时断奶仔猪的非特异性免疫对保障断奶仔猪的猪瘟疫苗免疫效果至关重要[13]。IgA对局部黏膜免疫起到重要作用[13]；IgG是抗体的主要成分，直接决定机体体液免疫应答[14]。本研究中，添加0.05%和0.10%抗菌肽均能够显著升高断奶仔猪血清IgA、IgG的含量，表明抗菌肽能够改善断奶仔猪的胃肠道黏膜免疫系统，提高体液免疫水平。IL-2、IFN-γ在参与免疫调节、抗病毒感染等方面发挥重要作用[15-16]。本研究中，添加0.10%抗菌肽均能够显著提高仔猪血清IL-2和IFN-γ的含量，表明抗菌肽可提高断奶仔猪的细胞免疫水平。猪瘟抗体水平是猪瘟疫苗免疫效果的最简单、直接的检测指标。本研究中，添加0.05%和0.10%抗菌肽均能够显著提高猪瘟抗体水平。综上所述，抗菌肽能够提高断奶仔猪的免疫力，改善猪瘟疫苗的免疫效果。4结论本试验中，随着日粮中抗菌肽添加水平的增加，断奶仔猪的生长性能、腹泻率、猪瘟疫苗免疫效果均得到明显改善，以0.10%添加剂量为临床最适的应用剂量。