柑橘属植物的外果皮可以入药，代表植物为枳壳、陈皮[1-2]。橙皮苷（HSD）广泛存在于柑橘属植物的外果皮中。HSD具有抗氧化、抗炎、抗癌、抑菌等生物活性[3-4]。文章对HSD的化学结构及构效关系、提取分离技术、在动物体内代谢规律、生物活性及其在畜牧业生产中的应用进行综述，为其在畜牧业方面的应用提供参考。1HSD的化学结构及构效关系HSD是一种黄酮类物质，具有双氢黄酮氧苷结构，母核为2-苯基色原酮类化合物，中心有15个C原子，由2个苯环和通过中间杂环相连，C7位连接芸香糖。分子式为C28H34O15，相对分子质量为610.57[5]。抗氧化应激是HSD的主要生物活性之一。Li等[6]运用铁抗氧化反应试验（FRAP）研究双氢黄酮结构与抗氧化活性的关系时发现，该结构的化合物是通过酚羟基与活性氧自由基（ROS）中的·OH结合失去氢原子，而使ROS失去活性。而且苯环B的4'位-OCH3与苯环B形成p-π共轭效应，使B环3'羟基的H原子更易与ROS结合。2HSD的提取纯化技术HSD选择适当的提取方法可以避免HSD活性成分的损失，提高HSD的纯度，是深入研究HSD的活性和工业化生产的需要[7]。提取HSD的方法有很多报道，中国药典附录中使用的方法为热回流法，使用75%乙醇，在料液比1∶35（w/v），提取温度85℃下，提取2.5 h，HSD得率为3.31%[8]。微波辅助提取法和超声辅助提取法主要是通过微波和超声波破碎细胞壁得到HSD，具有用时短、提取纯度高的优势[9-10]。碱溶酸沉法利用HSD易溶于碱难溶于酸的特性，在70℃条件下，以1∶30的料液比加入0.1%氢氧化钠-65%乙醇溶液，连续超声2次，每次30 min，得率为59.48%[11]。酶提取法主要是通过酶类破坏细胞壁，使有效物质流出而不破坏HSD本身结构[12]。柱层析提取法是根据HSD在组分中的洗脱时间不同来达到纯化目的，优点为提取纯度较高[13]。目前，对于HSD提取纯化技术有多种方法结合使用的趋势，酶解法和柱层析法有望在工业生产上得以应用[7]。3HSD在动物体内代谢规律由于HSD结构的特殊性，在生物体内直接利用度低，需要经过一系列的修饰后才能在体内转运、吸收、利用。有研究表明，HSD在肠道内的消化吸收不是由体内的酶系统完成，而是由肠道内的益生菌群完成[14]。HSD在肠道内的代谢分为2种方式：一种是由益生菌群作用后，脱去C7位的芸香糖链，变为苷元，再由肠壁吸收；一种是被益生菌群作用后，经过一系列甲基化、糖醛酸化后被机体吸收。Nectoux等[14]利用LC-MS和MALDI-MS检测SD大鼠血液中HSD的代谢规律发现，给大鼠口服HSD（10 mg/kg）后，在大鼠的门静脉血液中未检测到HSD成分，而检测出HSD的葡醛酸形式，同时，在血液中还检测出圣草酚和高圣草酚的联合物，说明HSD在透过肠膜组织时经过甲基化或去甲基化等化学变化。Jiao等[15]测定HSD在大鼠体内的药代动力学，发现HSD的17~52种代谢物，均为HSD主链脱芸香糖后的葡萄糖醛酸化、甲基化产物，说明HSD通过血液运行至各器官发挥生物活性需要经过一系列化学修饰。4HSD生物活性4.1抗氧化应激氧化应激（OS）是指动物体内氧自由基的产生多于氧自由基的消除，氧化与抗氧化作用失衡。多项研究表明，HSD对抑制多种原因导致的动物体内OS反应效果显著。赖星[16]研究HSD对断奶仔猪的生长性能和抗OS活性的影响，发现饲喂HSD的断奶仔猪的血浆中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性显著高于空白组，且HSD组仔猪的肠组织生长更好，而肠组织的发育情况直接决定动物生长发育的好坏。HSD不但能够提高仔猪的抗OS水平，还能促进仔猪的生长发育。Yatao等[17]认为，HSD是一种作用很强的抗氧化剂，可以促进细胞抗氧化防御，以对抗过氧化氢（H2O2）诱导的OS效应。HSD可通过降低异嗜淋巴细胞与淋巴细胞的比率，来减少夏季热应激所产生的活性氧，以此来缓解夏季对禽类养殖的热应激。Solomon等[18]发现，HSD能够通过降低脂多糖（LPS）在体内的循环来抑制LPS诱导的OS。其作用机制是降低细菌渗透蛋白和原降钙素在体内循环，降低OS必须的一系列细胞因子的表达，如细胞间黏附因子1、NO合成酶。可见，HSD对于多种因素导致的OS均有抑制作用。4.2抗炎炎症是机体为抵御病原体而发生的必要的免疫应答反应[19]。炎症因子TNF-α、白细胞介素-6（IL-6）、环氧合酶2（COX2）、前列腺素E2（PEG2）等的出现是炎症产生的标志。Tsai等[20]研究H2O2介导的软骨细胞炎症反应，发现HSD能显著的抑制一系列炎症因子（TNF-α、IL-6、COX2等）mRNA的表达，从而抑制该类炎症反应。在LPS介导的细胞炎症反应中，Hyun等[21]用ELISA法检测显示HSD能够显著的降低PEG2、COX2、TNF-α等炎症因子的表达水平。HSD通过多种信号通路调节炎症因子的表达、释放，阻止各种原因诱发的炎症对机体的损害。Qi等[22]通过对HSD治疗LPS介导的成纤维细胞中金属蛋白酶类（MPPs）的研究发现，HSD显著降低金属基质蛋白酶3（MMP3）、金属基质蛋白酶9（MMP9）、金属基质蛋白酶13（MMP13）的蛋白含量，显著抑制巨噬细胞的极化水平，推测HSD是通过PI3K/AKT信号通路发挥作用。Fu等[23]研究HSD对白细胞介素1β（IL-1β）介导的软骨细胞的炎症反应，结果表明，HSD由NF-κB信号通路降低PEG2和NO的产生。此外，HSD对于脊椎损伤导致的炎症的作用体现在促使核红细胞相关因子2（Nrf-2）和血红素氧合酶-1（NO-1）含量显著提升，HSD通过Nrf-2/HO-1信号通路调节炎症因子的表达[24]。炎症往往与OS相伴存在。HSD抗炎症的作用还体现在对OS中SOD、CAT等酶类的影响。Wang等[25]用HSD作用于肺部有炎症的小鼠，发现HSD能够增强肺部细胞内SOD、CAT活性，缓解OS导致的炎症反应。给抗生素引起的肾损伤小鼠口服300 mg/kg HSD 7 d后，发现HSD给药组小鼠的肾脏中GSH-Px、SOD、CAT活性显著提高，炎症得到控制[26]。4.3诱导肿瘤细胞凋亡肿瘤细胞的一个显著特点是细胞的无限增殖，HSD能够抑制肿瘤细胞无限增殖，并诱导其凋亡[27]。Thoria等[28]用RT-PCR检测HSD对恶性肿瘤细胞的诱导凋亡作用发现，HSD通过使抗凋亡基因B淋巴细胞瘤基因2（Bcl-2）碎片化，激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）基因和Bax基因表达促使细胞凋亡。同时，HSD还可以降低肿瘤细胞中谷胱甘肽含量，降低肝脏组织中GSH-Px和CAT的活性。在二乙基亚硝胺（DEN）诱导的患有肝癌小鼠体内，Yomna等[29]发现，HSD通过PI3K/AKT信号通路降低由DEN激发而提高的PI3K、AKT、细胞周期蛋白激酶（CDK-2）表达，从而保护肝脏组织细胞，避免其转化为肝癌细胞。4.4抑菌张启焕等[30]在HSD体外抑菌试验中发现，HSD在浓度为0.3%～0.5%时，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果较好。HSD在浓度为0.5%时抑菌效果达到最强。耿敬章等[31]从柑橘皮提取出HSD后，对其抑菌活性进行体外研究，结果表明，HSD对6种试验菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）为6.25 g/L，对枯草芽孢杆菌的MIC为3.13 g/L，对大肠杆菌和青霉的MIC为12.5 0 g/L，对根酶和啤酒酵母的MIC为25.00 g/L。虽然HSD抑菌机制还不明确，但是从HSD抑菌谱测定结果来看，有深入研究的价值。5HSD在畜牧生产中的应用5.1HSD在家禽生产中的应用动物集约化养殖容易受到温度、饲喂水、饲料、传染性疾病等多种因素导致的OS反应[32]。HSD在提高家禽养殖质量方面具有良好的效果。Asghar等[33]在360只肉仔鸡的饲料中加入不同浓度的HSD（5、20 mg/kg），结果发现，HSD组肉仔鸡血液中的白细胞总数显著增加，血红蛋白浓度增高，中性粒细胞的黏合性增强，嗜碱性粒细胞的过敏性免疫反应优于对照组，说明HSD可以作为饲料添加剂加以研究。李贞明等[34]给黄羽肉鸡饲喂主要成分为HSD的柑橘提取物（10 mg/kg）35 d后，与对照组相比，HSD组肉鸡肌肉中GSH-Px活性提高15.57%，比抗生素对照组GSH-Px 活性提高32.03%，同时肉鸡脾脏指数和肝脏指数分别提高56.25%和21.25%，肉鸡腿肌率和胸肌率分别提高16.40%和21.18%。上述研究表明，饲喂HSD不但提高肉鸡的抗OS水平，而且提高肉鸡的免疫器官指数和肉品质。Kamboh等[35]先使用LPS给700只21 d肉鸡进行免疫抑制，再在饲料中加入不同浓度的HSD，发现肉鸡血液中总抗氧化力（T-AOC）和SOD活性得到提高，体液和黏膜免疫得到增强，表现出一定抗鸡新城疫和禽流感病毒特性。此外，Kamboh等[36]给试验肉鸡饲喂不同浓度的HSD，42 d后，发现HSD提高肉鸡肠道绒膜形态和免疫指数，说明HSD可以作为饲料添加剂用于提高肉鸡的免疫力，促进其健康生长。5.2HSD对家禽产品品质的影响Goliomytis等[37]在产蛋鸡饲料中加入0.77 g/kg HSD，发现鸡蛋中的丙二醛含量降低，鸡蛋的蛋重、蛋壳厚度和蛋黄颜色均优于对照组。Iskender等[38]在产蛋鸡饲料中加入0.50 g/kg的HSD，饲喂8 w后，鸡蛋中的胆固醇含量降低，蛋白质含量增加，鸡蛋的品质得到提升。Goliomytis等[39]对72只蛋鸡饲喂HSD（0.75 g/kg）67 d后，发现HSD组的蛋黄颜色更加偏重橘色，HSD组鸡蛋的抗OS性从第4 d开始增高，但是HSD没有改变蛋黄的胆固醇含量。5.3HSD对猪生长的影响HSD对于猪生长作用的研究主要集中在对仔猪生长发育的影响。赖星等[40]在断奶仔猪日粮中添加250 mg/kg HSD饲喂28 d，发现仔猪平均日增重和平均日采食量显著增加，胸腺指数、脾脏指数和小肠长度显著高于对照组，仔猪血液和肝脏中的SOD、CAT、GSH-Px活性显著提高，说明HSD通过改善仔猪体内的OS水平而促进肠道发育，肠道发育的程度直接影响断奶仔猪的生长发。5.4HSD对其他养殖动物的作用Panagiotis等[41]将HSD（2.50 g/kg）饲喂羔羊后发现，HSD降低血液中的丙二醛含量，表现出抗OS的生物活性，饲喂35 d后羔羊的胸肌肉中丙二醛含量也显著降低，从而提高羔羊肉的质量。Panagiotis等[42]发现，给产奶期母羊饲喂HSD（6 000 mg/kg）28 d后，羊奶中丙二醛含量显著下降，而且加入HSD没有影响羊奶的营养成分、凝固特性和脂肪酸指数。徐军等[43]研究发现，HSD可以提高仔兔的日增重、降低料重比、提高血清中蛋白质含量、改善仔兔的体质，从而降低养殖成本。6展望HSD以其生物活性多样、天然、绿色、毒副作用小的优势成为饲料及饲料添加剂的理想选择。HSD由柑橘属果皮提取而来，其原料来源广泛、易于获取、牲畜适口性强、提取方法简单易控、造价低廉、利于工业化生产。但是，HSD的生物活性作用机制仍不十分明确，需要深入研究其作用机制，为其在畜牧生产中发挥更大作用奠定基础。