植物性饲料添加剂逐渐成为养殖户的首选，广泛应用于畜禽养殖，如中草药、植物精油等[1-2]。在减抗、限抗的条件下，添加植物性饲料添加剂成为畜禽养殖业的关注点[3-5]。艾草又称艾蒿，为菊科蒿属，主要含有挥发油类、黄酮类、多糖类和三萜类等化学成分。现代药理研究显示，艾草具有抗虫、抗菌、抗病毒和抗癌等药理作用[6-8]。随着现代药理学发展，艾草的更多药理作用不断被揭示，具有广阔的应用前景[9-12]。基于此，本试验主要探究艾草对肉鸡抗氧化、免疫功能以及肠道菌群的影响，以期为后期艾草相关研究及其在肉鸡养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料艾草粉（中贝佳美生物科技有限公司）；120日龄罗斯308肉鸡（河北省邯郸市鑫冠禽业有限公司）。1.2试剂与仪器主要试剂：普通营养琼脂培养基（北京索莱宝生物科技有限公司）、MRS培养基（北京索莱宝生物科技有限公司）、碳酸钙（北京化工厂）、生理盐水（四川科伦药业股份有限公司）等。主要仪器：灭菌锅（厦门致微仪器有限公司）、分析天平（常州奥豪斯仪器有限公司）、恒温培养箱（力辰科技有限公司）、无菌操作台（苏州净化设备有限公司）、高速冷冻离心机（北京京立离心机有限公司）等。1.3试验设计试验选用120只120日龄罗斯308肉鸡，随机分为3组，公、母各半，每组4个重复，每个重复10只鸡。采用全自动3层笼养，常规饲养。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ组饲喂基础日粮加2%艾草，试验Ⅱ组饲喂基础日粮加4%艾草。试验期30 d，每日记录饲喂情况和试验鸡状态。按照NRC（1994）营养标准配制的玉米-豆粕型基础日粮，其原料组成及营养水平见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.07.006.T001表1基础日粮组成及营养水平Tab.1Composition and nutritional composition of basel diet原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米59.48代谢能/(MJ/kg)12.67豆粕32.30粗蛋白质/%19.46大豆油3.60钙/%0.90食盐0.30有效磷/%0.50石粉1.12赖氨酸/%1.20磷酸氢钙1.60蛋氨酸+半胱氨酸/%0.78DL-蛋氨酸0.21预混料1.09麦麸0.30注 ：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VD3 1 500 IU、VE 25 IU、VK 31 mg、VB6 8 mg、VB12 0.03 mg、泛酸16 mg、叶酸1.5 mg、生物素0.5 mg、铁95 mg、铜8 mg、锌70 mg、锰80 mg。2.营养水平均为计算值。1.4测定指标及方法试验结束后，每个重复随机挑选3只肉鸡，心脏采血，-20 ℃储存，解剖取其盲肠，做好标记放入液氮，转至-80 ℃冰箱保存。1.4.1血清抗氧化指标测定血清样品完全融化，测定丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性以及总抗氧化能力（T-AOC）等血清抗氧化指标。按照试剂盒内说明书进行操作，试剂盒购自南京建成生物公司。1.4.2血清免疫指标测定血清样品完全融化，测定白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）含量等血清免疫指标。按照试剂盒内说明书进行操作，试剂盒购自南京建成生物公司。1.4.3肠道菌群测定采用混合平板计数法进行计数。肠道总菌落计数：称取一定量的盲肠内容物，倍比稀释，选择10-6、10-7、10-8等3个浓度，每个浓度各吸取100 μL接种于营养琼脂培养基，每个浓度3个重复，37 ℃培养24 h，进行菌落计数。乳酸菌计数：称取一定量的盲肠内容物，倍比稀释，选择10-6、10-7、10-8等3个浓度，每个浓度各吸取100 μL于无菌培养皿中，加入50~55 ℃含碳酸钙的MRS培养基，混匀，每个浓度3个重复，凝固后37 ℃培养48 h，进行菌落计数，仅计数溶钙圈明显菌落。肠道总菌落=合适稀释度下营养琼脂平板上生长的平均菌落数×100×稀释倍数（1）乳酸菌总菌数=合适稀释度下MRS平板上生长的平均菌落数×100×稀释倍数（2）1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1艾草对肉鸡血清抗氧化指标的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，各试验组肉鸡血清T-AOC提高，GSH-Px和CAT活性增加，MDA的含量有所降低，但差异均不显著（P0.05）。试验Ⅰ组肉鸡血清中SOD活性显著高于试验Ⅱ组（P0.05），但两试验组与对照组相比差异均不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.07.006.T002表2艾草对肉鸡血清抗氧化指标的影响Tab.2Effect of Artemisia argyi on serum antioxidant indexes of broilers组别GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)CAT/(U/mL)T-AOC/(μmol/L)对照组853.50±83.34417.11±25.21ab3.06±0.801.84±0.781.02±0.17试验Ⅰ组994.41±218.27450.14±26.23a2.99±0.502.17±0.301.16±0.11试验Ⅱ组910.14±105.82394.43±44.65b2.81±0.552.14±1.171.08±0.14注 ：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2艾草对肉鸡血清免疫指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，各试验组肉鸡血清IgG、IgA、IgM含量差异均不显著（P0.05）。试验Ⅱ组肉鸡血清IL-2含量高于对照组，但差异不显著（P0.05）。试验Ⅱ组肉鸡血清IL-1β、IL-6的含量显著高于试验Ⅰ组（P0.05），但两试验组与对照组相比差异均不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.07.006.T003表3艾草对肉鸡血清免疫指标的影响Tab.3Effect of Artemisia argyi on serum immune indexes of broilers组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)IL-1β/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)对照组7.36±0.521.90±0.221.63±0.0812.27±1.42ab21.83±3.2842.21±5.74ab试验Ⅰ组7.44±0.672.01±0.191.67±0.0910.91±1.42b20.03±3.4834.60±6.17b试验Ⅱ组7.39±1.051.86±0.281.57±0.1913.30±1.33a23.05±3.0748.19±9.29a2.3艾草对肉鸡肠道菌群的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，各试验组肉鸡盲肠的菌落总数和乳酸菌总数均显著提高（P0.05）。试验Ⅱ组肉鸡盲肠的菌落总数和乳酸菌总数均显著高于试验Ⅰ组（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.07.006.T004表4艾草对肉鸡肠道菌群的影响Tab.4Effect of Artemisia argyi on intestinal flora of broilers组别菌落总数乳酸菌总数对照组650.00±64.96c4.34±0.67c试验Ⅰ组886.89±58.23b45.55±6.65b试验Ⅱ组2 113.56±49.82a216.67±7.45a×108 CFU/mL3讨论3.1艾草对肉鸡血清抗氧化指标的影响当机体受到病原菌入侵或呈亚健康状态时，机体抗氧化能力减弱，出现氧化损伤[13]。抗氧化还原系统通过协调氧化与抗氧化之间的稳定性，进而降低自由基水平。当抗氧化还原系统中各种酶的活性升高时，即可有效地抑制自由基的生成和制止脂质过氧化。因此，SOD、T-AOC等指标常应用于评价抗氧化能力[14]。张旭等[15]研究发现，在日粮中添加3%艾草粉显著提高了京粉1号蛋鸡血清CAT、GSH的活性，增强了机体抗氧化能力。赵飞[16]在日粮中添加艾蒿水提物，结果发现，肉仔鸡血清中MDA含量显著降低，各艾蒿水提物添加组肉鸡的总抗氧化能力均有不同程度的升高。本试验结果与前人研究结论基本一致，表明在日粮中添加艾草可提高肉鸡血清中抗氧化能力，改善抗氧化功能。3.2艾草对肉鸡血清免疫指标的影响免疫功能在维护动物机体健康的方面发挥重要作用，而血清中的免疫球蛋白不仅能够诱导机体产生体液免疫，还可抵制外界病原菌的入侵，提高机体免疫能力[2]。免疫球蛋白与抗原相结合，参与体液免疫，其含量直接反应机体免疫能力的强弱，主要包括IgG、IgA、IgM、免疫球蛋白E（IgE）等[17]。研究表明，禽类的免疫球蛋白有3种，即IgG、IgA、IgM[18]。IgG在免疫应答中起到激活补体、中和多种毒素的作用。IgA在正常血清中的含量仅次于IgG，分为血清型及分泌型，分泌型IgA是机体黏膜局部抗感染免疫的主要抗体。IgM是免疫应答中首先分泌的抗体，主要作用为防止菌血症。炎性因子也是免疫功能表现的一个类型。其中IL-2由Ⅰ型免疫细胞因子分泌，参与细胞免疫；IL-6具有调节机体免疫应答和诱导细胞生长分化的作用；IL-1β在免疫应答和组织修复中起到重要作用，能够介导多种炎症反应。曹振兴等[19]研究发现，在日粮中添加艾蒿粉可提高肉仔鸡血清中IgG、IgA、IgM的含量。Yang等[20]研究发现，在日粮中添加艾蒿黄酮可作为一种天然免疫调节剂，改善肉鸡生长性能，提高免疫功能。Zhang等[21]研究发现，艾蒿多糖可促进免疫球蛋白（IgG和IgM）、细胞因子（IL-1β和IL-6）产生，对肉鸡外周血白细胞起到调节作用，进而调节机体免疫功能。3.3艾草对肉鸡肠道菌群的影响肠道菌群是一个复杂的微生物群落，其代谢能力是肝脏的100倍。肠道菌群一般在人和动物出生后不久即可定植，其结构受遗传、饮食、年龄和健康状况的影响[22-24]。有益的菌群可通过增加肠道有益菌落数量和限制病原体侵入，维护肠道健康，参与代谢，如乳酸菌[25]。有研究发现，乳酸菌不仅能提高肉鸡生产性能，还能够稳定肠道微生态，提高消化道免疫系统[26]。江阳[27]研究发现，在日粮中添加不同剂量的艾蒿提纯物饲喂肉仔鸡可不同程度地增加盲肠中乳酸菌数量，改善菌群结构。牛壮[28]研究表明，添加不同剂量的艾蒿多糖可显著降低盲肠大肠杆菌，并提高乳酸菌的数量。本试验结果显示，盲肠中菌落总数以及乳酸菌数量随艾草剂量增加而增加，与前人研究结论一致，且本试验条件下以艾草添加量为4%效果最好。4结论本试验结果表明，在肉鸡日粮中添加艾草可提高罗斯308肉鸡血清抗氧化能力，增强了肉鸡免疫力，改善了肠道菌群组成。在日粮中添加2%艾草对肉鸡血清抗氧化指标和免疫指标影响较大；添加2%、4%艾草对盲肠菌落总数和益生菌总数具有显著影响，且以添加4%艾草影响最大。