饲料添加剂具有防治疾病、提高畜产品品质的作用[1]。植物提取物是目前备受关注的饲料添加剂之一[2]。沙棘是一种富含氨基酸、微量元素和维生素的植物。沙棘叶易收集、产量大，能够产生较高的社会效益、经济效益[3]。沙棘黄酮可以提高猪血清生长激素含量，改善肉质[4]。沙棘黄酮可以显著提高肉鸡游离脂肪酸和高密度脂蛋白含量[5]。沙棘黄酮为2-苯基色原酮结构的化合物，主要活性成分为槲皮素（3,3',4',5,7-五羟基黄酮）[6-7]。槲皮素属于一种多酚类物质，为黄酮化合物[8-9]。槲皮素可以提高肉鸡免疫器官指数，降低脂肪沉积[10]。槲皮素能够通过影响环磷酸腺苷抑制脂肪合成[11]，对鸡脂肪细胞过氧化物酶体代谢产生影响，从而减少肉鸡脂肪沉积[12]。无抗养殖是目前家畜养殖主要方向之一，能够缓解由于抗生素滥用引发的食品安全问题[13]。槲皮素可以减轻家畜全身炎症反应，起到抗病、促生长的作用。目前，饲粮中添加槲皮素在奶牛生产中的报道较少。本试验研究槲皮素对奶牛免疫功能、生产性能的影响，为槲皮素作为饲料添加剂在奶牛养殖生产中的进一步应用提供参考依据。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物及日粮试验所用荷斯坦奶牛由吉林九台广源牧业有限公司提供。基础日粮购自沈阳康德权生物科技有限公司，基础日粮营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.T001表1基础日粮营养水平项目泌乳净能/(MJ/kg)粗蛋白/%钙/%磷/%中性洗涤纤维/%酸性洗涤纤维/%含量6.214.31.10.441.123.9注：泌乳净能为计算值，其余均为实测值。1.1.2试验材料与仪器槲皮素由美国阿拉丁公司美国阿拉丁公司提供。DT-110X30恒温水浴摇床（上海笃特科学仪器有限公司）、TGL-16E高速冷冻离心机（上海舜制仪器制造有限公司）、STATFAX2100全自动酶标仪（西安捷骋仪器仪表有限公司）、Leica生物显微镜（上海笃特科学仪器有限公司）、Leica805冰冻切片机（上海笃特科学仪器有限公司）、数显pH计pHS-2F（上海笃特科学仪器有限公司）、日立L8800全自动氨基酸分析仪（株式会社日立制作所）、乳成分分析仪（美国Bentley400）、流式细胞仪（上海舜制仪器制造有限公司）；免疫球蛋白检测试剂盒（上海晶抗生物工程有限公司）。1.2试验设计选取18头处于泌乳中期、泌乳量相近、体重相近、胎次相同健康的荷斯坦奶牛，随机分为3组，每组6个重复，每个重复1头牛。对照组不添加槲皮素，高剂量槲皮素组为基础日粮+200 mg/kg槲皮素，低槲剂量槲皮素组为基础日粮+100 mg/kg槲皮素。试验期60 d。1.3饲养管理日粮为全混合日粮，每日饲喂2次。槲皮素与日粮混合饲喂。试验奶牛管理为散栏式，自由活动、饮水和采食，每日挤奶3次。1.4测定指标及方法1.4.1免疫指标试验第60 d早晨第1次日粮投喂前，采集奶牛尾静脉血，每头奶牛采血40 mL，静置，离心，血清分装于1.5 mL安培管，-20 ℃冰箱冷冻保存。测定奶牛血清中的免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、可溶性CD4抗原（sCD4）、可溶性CD8抗原（sCD8）免疫指标。免疫球蛋白、可溶性抗原均采用酶联免疫吸附测定法进行检测。1.4.2乳成分及营养物质表观消化率参考文献[14]测定奶牛日产奶量、乳成分、乳尿素氮、体细胞数、营养物质表观消化率。H=100-100×u×vm×n (1)式中：H为营养物质表观消化率（%）；m为日粮中盐酸不溶灰分含量（g/100 g）；u为粪中营养物质含量（g/100 g）；n为粪中盐酸不溶灰分含量（g/100 g）；v为饲料中营养物质含量（g/100 g）。1.4.3生产性能测定奶牛的料重比、耗料量、平均日增重和剔除率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)料重比=耗料量/平均日增重(3)剔除率是当试验中出现严重疾病奶牛时的剔除头数与原有总头数的比值。C=Y-Y'Y (4)式中：C为剔除率（%）；Y为试验奶牛数（头）；Y'为出现严重疾病的奶牛数（头）。1.4.4免疫器官指数及肠道指标试验结束时，各组随机选取3头奶牛屠宰，解剖，肉眼观察是否出现器官病变。对肺、脾、肝、十二指肠、空肠、回肠进行称量（鲜重），将各器官组织放入4%福尔马林中，固定48 h，样品的制作采用一般病理学组织切片制作步骤进行[15]，在光学显微镜下进行观察，测定免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官鲜重/活体重(5)取肠道内容物10 g，加入100 g生理盐水中混匀，置于平皿中采用数显pH计进行测定。水解氨基酸的测定，取屠宰后的背肌中100 g组织块，冷冻干燥，粉碎样品中加入盐酸，恒温下在水解管中干燥水解，冷却，过滤定容，取稀释样品于氨基酸分析仪中，计算氨基酸含量。Q=N×B×V×M×150F (6)式中：Q为氨基酸含量；B为稀释倍数；V为定容体积；M为氨基酸分子量；F为试样质量；N为测定液中氨基酸含量。取试验奶牛肠道各段部位各5 cm，使用4%福尔马林固定48 h，逐级脱水，包埋，切片，染色，封片。选取视野中3根完整的绒毛，测定绒毛深度和长度，记录平均值。1.5数据统计与分析试验数据采用Microsoft Excel 2010进行整理，结合SAS 9.4软件进行方差分析和差异显著性分析。2结果与分析2.1槲皮素对奶牛血清免疫功能的影响（见图1）由图1可知，除sCD8以外，槲皮素组其余的免疫球蛋白与可溶性抗原含量均高于对照组，其中试验组奶牛血清IgM含量最高达280.4 mg/L，IgG含量最高为3.5 μg/L。低剂量槲皮素组奶牛血清的IgA含量明显高于对照组，低剂量槲皮素组奶牛血清的sCD8含量高于对照组。图1槲皮素对奶牛免疫功能影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F1a1（a）槲皮素对奶牛血清IgG和可溶性抗原的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F1a2（b）槲皮素对奶牛血清IgM和IgA的影响2.2槲皮素对奶牛产奶性能及乳品质的影响2.2.1槲皮素对奶牛产奶量的影响（见图2）由图2可知，高剂量槲皮素组的奶牛产奶量最高，对照组和低剂量槲皮素组的奶牛产奶量差异不明显。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F002图2槲皮素对奶牛产奶量的影响2.2.2槲皮素对奶牛产奶乳脂率和乳蛋白率的影响（见图3、图4）由图3、图4可知，试验第30 d时，低剂量槲皮素组牛奶中乳蛋白率和乳脂率高于对照组。第30 d和第60 d，试验组牛奶的乳蛋白率和乳脂率均高于对照组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F003图3槲皮素对奶牛产奶乳脂率的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F004图4槲皮素对奶牛产奶乳蛋白率的影响2.2.3槲皮素对奶牛产奶乳糖率的影响（见图5）由图5可知，添加槲皮素使奶牛产奶乳糖率具有一定的提高，高剂量槲皮素组牛奶的乳糖率数值最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F005图5槲皮素对奶牛产奶乳糖率的影响2.2.4槲皮素对奶牛产奶总固形物含量的影响（见图6）由图6可知，试验第60 d，高剂量槲皮素组对牛奶中的总固形物含量影响最大，低剂量槲皮素组对牛奶中总固形物含量影响低于高剂量槲皮素组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F006图6槲皮素对奶牛产奶总固形物含量的影响2.2.5槲皮素对奶牛产奶中尿素氮的影响（见图7）由图7可知，对照组牛奶尿素氮含量明显高于试验组，奶牛尿素氮含量随日粮中槲皮素剂量的增加而减少。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F007图7槲皮素对牛奶中尿素氮含量的影响2.2.6槲皮素对奶牛产奶体细胞数的影响（见图8）由图8可知，高剂量槲皮素组奶牛产奶体细胞数明显低于对照组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F008图8槲皮素对牛奶中体细胞数的影响2.3槲皮素对奶牛营养物质表观消化率的影响（见图9）由图9可知，添加槲皮素奶牛的营养物质表观消化率均高于对照组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F009图9槲皮素对奶牛营养物质消化率的影响2.4槲皮素对奶牛料重比、死淘率及器官指数的影响（见图10）由图10可知，高剂量槲皮素组奶牛的料重比高于低剂量槲皮素组和对照组，添加槲皮素能够降低奶牛死淘率。脾脏指数和肺脏指数无明显差异，高剂量槲皮素组奶牛的肝脏指数明显高于对照组。图10槲皮素对奶牛料重比、死淘率、器官指数的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F10a1（a）槲皮素对奶牛料重比的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F10a2（b）槲皮素对奶牛死淘率的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F10a3（c）槲皮素对奶牛器官指数的影响2.5槲皮素对奶牛肠绒毛、肠道内容物pH值和微生物数量的影响（见图11）由图11可知，低剂量槲皮素组奶牛的肠绒毛长度高于其他两组，槲皮素提高了肠道pH值，槲皮素组盲肠和直肠中的大肠杆菌数高于对照组。图11槲皮素对肠绒毛、肠道内容物pH值、微生物的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F11a1（a）槲皮素对奶牛绒毛长度的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F11a2（b）槲皮素对奶牛肠道内容物pH值的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F11a3（c）槲皮素对奶牛肠道微生物数量的影响2.6槲皮素对水解氨基酸的影响（见图12）由图12可知，添加槲皮素对水解氨基酸具有一定影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.005.F012图12槲皮素对水解氨基酸的影响3讨论在抗原刺激下，B淋巴细胞可先后产生5种免疫球蛋白IgM、IgA、IgG、IgD和IgE。IgM是个体发育过程中最早产生和分泌的抗体，也是最初体液免疫反应中产生的第一种免疫球蛋白，占血清免疫球蛋白总量的5%~10%。本试验结果表明，奶牛血清中IgM、IgA、IgG的含量均高于对照组。研究发现，添加槲皮素对奶牛产奶具有积极作用[16]。奶牛产奶量和乳品质是影响奶牛养殖业经济效益的重要因素。奶牛产奶量受多方面因素影响，乳蛋白率、乳糖和乳脂肪是评价乳品质的重要指标。牛奶的乳脂率一般为3%~5%，乳蛋白率为2.8%~3.4%，乳糖率为4.6%~4.8%。牛奶中尿素氮的水平反应奶牛日粮蛋白质利用率，最佳尿素氮范围为8~14 mg/dL，此时奶牛对碳水化合物和日粮蛋白质的利用较为协调。牛奶中尿素氮的水平较低时说明奶牛能够更有效利用日粮中的蛋白质。奶牛产奶中体细胞数量可以反映奶牛乳腺感染情况，健康状态下，正常乳体细胞数低于20万个/mL，当奶牛患乳房炎时，体细胞数会上升，当体细胞数达到50万个/mL时，认为奶牛有患乳房炎的可能。本研究表明，槲皮素能够提高奶牛的乳脂率、乳蛋白率和乳总固形物含量，降低尿素氮含量和体细胞数。本研究中，添加槲皮素能够降低奶牛死淘率，提高经济效益。小肠作为物质吸收的主要器官，主要依靠小肠绒毛对物质的运输和吸收[17]。本研究中，试验组肠绒毛长度和完整性均高于对照组。氨基酸作为衡量肉质主要的生化指标，能够反映肉质风味状况。本试验中，试验组和对照组肌糖原并没有明显的差异，均处在正常范围内；试验与对照组在氨基酸含量差异较大，在最为关键的风味氨基酸物质如谷氨酸、组氨酸、甘氨酸等均高于对照组。4结论本试验条件下，添加槲皮素对提升奶牛产奶性能和抗病性具有积极作用。本试验中设计的梯度较少，肠道微生物种类仅对大肠杆菌进行统计，可能对试验结果的全面性具有一定影响，后续将增加试验梯度和检测指标。