莫西菌素是一种具有较高的驱虫活性和安全特性的药物，对畜禽消化道线虫、肺线虫和体外寄生虫均具有良好的驱杀作用，具有广谱、高效、安全、不易产生耐药性、单次投药效果显著等优势，是兽医临床理想的抗寄生虫药物[1-2]。目前，莫西菌素药物剂型主要包括粉剂、胶囊、浇泼剂等[3]。莫西菌素相对难溶于水和大多数有机溶剂，但溶解度优于伊维菌素、阿维菌素等药物[4]。多数莫西菌素液体制剂使用大量的有机溶剂，成本高且载药量低，临床用药量大，常引起用药部位发生炎症以及坏死，影响了药物的使用效果。微乳是一种新型的药物载体，于20世纪80年代首次被发现并命名。目前，微乳作为药物载体受到了一定重视，我国对于微乳制剂的研究也愈发广泛[5]。微乳的基质是由水相、油相、表面活性剂以及助表面活性剂根据一定的比例融合，形成一种均匀、透明度高、热力学稳定性强的分散体系，其颗粒个体直径十分细小，相对优于乳剂，是一种适合应用于临床的药物载体[6-7]。本研究结合微乳制备技术研制了莫西菌素微乳剂，旨在方便莫西菌素的临床使用，提高对寄生虫病的防治作用，增加畜牧业的经济收益；通过安全性试验将药物应用于靶动物绵羊，确定其药物安全性，为莫西菌素微乳制剂未来应用于临床提供参考。1材料与方法1.1试验材料莫西菌素原料药物购自河南零壹药业有限公司，1%莫西菌素微乳制剂由黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院养羊研究室自制。60只健康绵羊公羊由齐齐哈尔某绵羊养殖场提供，体重为37~42 kg。试验绵羊单独进行饲养，试验前进行疫病检测，结果均为阴性；隔离饲养21 d后复检仍为阴性，开始进行安全性试验。饮水及喂食的全价绵羊饲料，不含抗生素以及抗寄生虫类药物。1.2仪器与试剂主要仪器：HB-7501兽用全自动血细胞分析仪（江苏英诺华医疗技术有限公司）、日立-7020全自动生化分析仪（日立有限公司）、RM2235石蜡组织切片机（莱卡公司）。主要试剂：血清生化检测总胆固醇、葡萄糖、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、尿素氮、钙、尿酸、磷、镁、球蛋白、乳酸脱氢酶、总蛋白、白蛋白、碱性磷脂酶、磷酸肌酸激酶等指标，试剂盒购自长春汇力生物技术有限公司。1.3试验设计60只健康绵羊，随机分为5个组，每组4个重复，每个重复3只羊，记录每组绵羊的耳号。T1组为对照组（颈部皮下注射等体积的微乳基质）,T2组、T3组、T4组、T5组绵羊分别按照0.2、0.6、1.0、2.0 mg/kg颈部皮下注射1%莫西菌素微乳制剂。按照耳号注射不同剂量的药剂及对照，于首次给药后1周进行第二次给药，完成两次给药后24 h，采集绵羊全血、肝素抗凝血及尿液，进行血液生理指标、血清生化指标及尿液理化指标检测。试验期7 d。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能注射药物后每日观察绵羊精神状态、采食量、体温、呼吸是否出现异常现象、死亡情况。在试验开始前及试验第7 d称重，记录每日剩料量，计算平均日增重、平均日采食量及料重比。平均日增重=（末重-初重）/试验天数（1）平均日采食量=总采食量/试验天数（2）料重比=平均日采食量/平均日增重（3）1.4.2血液生理指标完成两次给药后24 h，对进行试验的所有绵羊进行血液采集，每只羊采静脉血10 mL，放置于肝素抗凝管中，全血样本采用全自动血细胞分析仪进行血常规检测。1.4.3血清生化指标完成两次给药后24 h，对进行试验的所有绵羊进行血液采集，每只羊采静脉血10 mL，于37 ℃静置4 h析出血清，样本采用全自动生化分析仪进行血清生化检测。1.4.4尿液理化指标完成两次给药后24 h，对进行试验的所有绵羊进行尿液理化指标检测，每只羊插管采集尿液50 mL，立即测定pH值，并尽快在实验室采用试剂盒测定尿液钙、磷、镁、肌酐等指标（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）。1.5数据统计与分析试验数据应用Excel2017软件与SPSS19.0统计学软件进行数据处理。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊生长性能的影响（见表1）注射药物后对试验组绵羊进行观察，可见精神状态良好、采食量正常、体温呼吸无异常现象，试验组绵羊无死亡情况。由表1可知，各组绵羊初重、末重、平均日增重、平均日采食量和料重比均差异不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.08.002.T001表1不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊生长性能的影响Tab.1Effect of different doses of 1% moxidectin microemulsion on growth performance of sheep组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比T1组36.74±3.1937.61±5.97124.13±26.15622.13±19.245.10±0.45T2组37.27±4.1338.12±4.05122.47±35.77659.15±18.175.40±0.52T3组37.20±1.0338.07±4.57125.00±15.95632.63±15.845.08±0.31T4组37.66±4.1238.52±3.74122.14±24.12620.04±30.155.12±0.32T5组38.34±6.7239.17±4.07118.75±34.55644.97±40.225.44±0.52注 ：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4与此同。2.2不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊血液生理指标的影响（见表2）由表2可知，各组绵羊的血液生理指标差异均不显著（P0.05），结果表明，莫西菌素微乳制剂对靶动物绵羊血细胞生产无不良影响。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.08.002.T002表2不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊血液生理指标的影响Tab.2Effect of different doses of 1% moxidectin microemulsion on blood physiological indexes of sheep项目T1组T2组T3组T4组T5组白细胞数目/(×109/L)21.54±4.2122.21±3.4521.05±4.0822.10±3.4122.40±4.32淋巴细胞百分比/%39.41±0.4540.45±0.2439.87±0.2539.85±0.3940.05±0.14中间细胞百分比/%13.15±0.2112.98±0.1713.04±0.0912.87±0.1513.09±0.13粒细胞百分比/%45.43±0.3144.35±0.1544.98±0.2845.07±0.4245.11±0.19淋巴细胞数目/(×109/L)9.53±0.259.45±0.349.95±0.179.54±1.069.39±0.17中间细胞数目/%3.17±0.093.21±0.143.15±0.063.25±0.213.09±0.11粒细胞数目/%10.34±0.3310.25±0.4110.44±0.2810.57±0.2110.19±0.23红细胞数目/(×1012/L)2.21±0.172.22±0.102.17±0.092.31±0.222.30±0.15血细胞比容/%9.78±0.129.15±0.459.12±0.339.02±0.179.84±0.37平均红细胞体积/fL35.15±0.3435.42±0.4135.17±0.3735.09±0.0935.42±0.26血红蛋白含量/pg38.25±0.4738.17±0.7838.77±1.1237.95±1.0938.05±0.94注 ：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3与此同。2.3不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，各组绵羊的血清生化指标差异均不显著（P0.05），表明莫西菌素微乳制剂对于靶动物绵羊物质代谢能力无显著影响，并且对肝功能、肾功能未见损伤。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.08.002.T003表3不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊血清生化指标的影响Tab.3Effect of different doses of 1% moxidectin microemulsion preparation on serum biochemical indexes of sheep项目T1组T2组T3组T4组T5组谷丙转氨酶/(U/L)20.88±4.5420.79±3.4720.81±4.3820.70±2.2420.77±5.74谷草转氨酶/(U/L)37.24±10.1740.12±8.9739.41±9.1742.13±10.4440.19±8.77总蛋白/(g/L)68.87±11.5768.74±9.6665.72±8.4267.32±15.2764.49±14.19白蛋白/(g/L)43.43±4.2442.95±5.2141.67±7.1940.01±6.1742.17±3.34碱性磷脂酶/(U/L)214.37±47.74220.13±38.19218.13±29.14214.99±41.12219.13±42.04葡萄糖/(mmol/L)2.72±0.712.88±0.822.60±0.452.72±0.442.75±0.82尿素氮/(mmol/L)6.18±1.546.23±1.426.20±1.276.41±2.056.31±0.95尿酸/(μmol/L)1.91±0.312.22±0.452.15±0.492.21±0.612.13±0.54钙/(mmol/L)2.22±0.542.30±0.322.25±0.292.17±0.412.20±0.35磷/(mmol/L)4.49±0.824.65±0.954.34±1.024.52±0.744.30±0.54总胆固醇/(mol/L)3.65±0.843.61±0.743.69±1.023.60±0.953.61±0.84甘油三酯/(mol/L)0.39±0.100.37±0.140.38±0.090.39±0.110.40±0.12高密度脂蛋白/(mol/L)1.03±0.271.08±0.191.05±0.141.06±0.221.05±0.16低密度脂蛋白/(mol/L)0.65±0.090.63±0.110.68±0.080.66±0.070.68±0.05磷酸肌酸激酶/(U/L)385.17±39.42384.13±48.94384.27±38.74388.12±59.06388.94±48.12乳酸脱氢酶酶/(U/L)664.21±87.72659.17±79.94665.21±97.64660.17±66.04657.79±57.15球蛋白/(g/L)23.69±4.0525.21±6.0923.71±5.0426.51±4.1722.68±3.05镁/(mmol/L)1.21±0.211.24±0.301.20±0.211.19±0.271.24±0.312.4不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊尿液理化指标的影响（见表4）由表4可知，各组绵羊的尿液理化指标差异均不显著（P0.05），表明莫西菌素微乳制剂对于靶动物绵羊对物质代谢水平无影响。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.08.002.T004表4不同剂量1%莫西菌素微乳制剂对绵羊尿液理化指标的影响Tab.4Effect of different doses of 1% moxicillin microemulsion on physicochemical indexes of sheep urine组别pH值肌酐/(mmol/L)钙/(mmol/L)磷/(mmol/L)镁/(μmol/L)T1组8.32±0.051.23±0.051.25±0.030.03±0.023.19±0.08T2组8.37±0.041.22±0.031.26±0.010.03±0.013.20±0.05T3组8.40±0.031.20±0.061.23±0.040.03±0.023.21±0.04T4组8.39±0.021.19±0.021.24±0.030.03±0.023.22±0.06T5组8.35±0.061.20±0.041.22±0.030.03±0.023.21±0.023讨论目前国内市场尚无莫西菌素微乳产品。莫西菌素微乳制剂的研制解决了莫西菌素难溶水以及多数有机溶剂的问题，生产便于推广使用的莫西菌素注射新剂型，能够使驱虫杀虫药具有缓释作用，延长药物的治疗时间。微乳剂提高了药物的生物利用度，用药剂量随之减少，可降低药物对靶动物的毒副作用、避免产生耐药性，局部组织刺激性小，并降低药物在动物体内的残留，从而提高动物食品的安全性[8-9]。为更好地验证莫西菌素微乳制剂的安全性，为莫西菌素微乳制剂的临床应用提供参考，研究进行了药物安全性试验[10]。安全性是药物最基本的属性之一，对于药物的新剂型而言，药物安全性的研究非常重要[11-12]。药物的临床应用可以很好地评价药物安全性，不同试验动物的临床反应可能有所不同[13-15]。因此，研究新剂型的药物时应针对不同的靶动物进行安全性试验，获得更加丰富的数据。本试验对研究室自制的1%莫西菌素微乳制剂进行药物安全性试验，对试验动物进行临床观察，计算平均日增重等生长性能指标，测定血液生理指标、血清生化指标及尿液理化指标，结果显示，对照组与各试验组绵羊各指标差异不显著，且均在正常范围内。试验结果表明，皮下注射1倍剂量（推荐剂量）、3倍剂量、5倍剂量、10倍剂量的1%莫西菌素微乳制剂对靶向动物绵羊安全，适用于临床推广，具有良好的应用前景，本试验结果为莫西菌素微乳制剂的进一步研究提供了参考。4结论试验结果表明，绵羊皮下注射1倍剂量（推荐剂量）、3倍剂量、5倍剂量、10倍剂量的1%莫西菌素微乳制剂对于靶向动物绵羊安全，1%莫西菌素微乳制剂对绵羊是一种较安全的剂型。