在肉兔饲粮中使用抗生素可以很好地解决断奶肉兔的腹泻问题，但长期使用抗生素会引发药物残留和耐药性问题，因此需要寻找抗生素替代品[1]。植物精油提取物具有纯天然、安全、方便等优点，关于植物提取物作为抗生素替代品的研究较多[2-4]。Su等[5]研究表明，饲粮中添加不同浓度的复合植物提取物能够显著提高石斑鱼的生长性能，保护肠道形态结构的完整性。李彬等[6]研究发现，在肉鸡饲粮中添加复合形式的香芹酚和百里香酚能够提高肉鸡屠宰率，改善肉鸡空肠形态。研究发现，百里香酚能够通过降低有害菌数量，增加有益菌数量，改善畜禽肠道菌群的功能[7-8]。目前，植物精油复合提取物在肉鸡和断奶仔猪中的研究较多，在肉兔中的研究较少。因此，本试验通过饲喂不同剂量的复合植物精油，研究复合植物精油对肉兔生长性能、屠宰性能、小肠形态和盲肠微生物菌群的影响，为植物精油在肉兔生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料肉桂醛的有效含量为12%；香芹酚、百里香酚的有效含量均为5%；3种植物精油均由郑州聚有享农业科技有限公司提供。1.2试验动物与试验设计选取35日龄公、母各半的伊拉肉仔兔270只，随机分为5组，每组6个重复，每个重复9只兔。对照组为基础日粮，抗生素组在基础日粮中添加15 mg/kg的恩拉霉素，O1组（肉桂醛）、O2组（百里香酚和香芹酚各50%）和O3组（肉桂醛和百里香酚各50%）分别在基础日粮中添加100、300和500 mg/kg的植物精油。预试期7 d，正式试验期30 d。试验期间，肉兔自由采食和饮水。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米17.00消化能/(MJ/kg)10.42麸皮14.00粗蛋白/%16.35豆粕16.00粗纤维/%16.85苜蓿草粉4.00中性洗涤纤维/%30.77花生秧22.00酸性洗涤纤维/%21.46花生壳9.00钙/%0.80玉米胚芽粕15.00总磷/%0.43食盐0.50磷酸氢钙0.40石粉1.10预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 6 800 IU、VD3 1 200 IU、VE 9 mg、VK3 1.4 mg、VB1 0.5 mg、VB2 1.75 mg、生物素0.09 mg、泛酸2.5 mg、叶酸0.45 mg、烟酸18 mg、铁70 mg、锌70 mg、锰10 mg、铜20 mg、钴0.15 mg、碘0.2 mg、硒0.25 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验开始和结束时，分别称量各组肉兔的体重，记为初重和末重，计算平均日增重；试验期间记录喂料量和剩料量，计算平均日采食量和料重比；试验期间记录各组肉兔的腹泻情况，计算腹泻率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=(喂料量-剩料量)/(试验天数×肉兔数量)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)腹泻率=各组肉兔腹泻数/各组肉兔总数×100%(4)1.3.2屠宰性能试验结束，各个重复随机挑选1只与平均体重相近的肉兔，禁食12 h，测定屠宰性能。屠宰前对肉兔称量，记为宰前活重，宰后称量全净膛重和半净膛重。试验兔屠宰后，去除头、血、毛皮、尾、前脚（腕关节以下）、后脚（跗关节以下）和全部内脏及腹脂等的胴体重为全净膛重。屠宰后保留心、肝、肾和腹脂等可食用的内脏在内的胴体为半净膛重，计算全净膛率和半净膛率。全净膛率=全净膛重/宰前活重×100%(5)半净膛率=半净膛重/宰前活重×100%(6)1.3.3肠道形态试验结束时，每组随机选取6只肉兔麻醉，颈动脉放血处死，取小肠部位肠段各3 cm，保存在20倍体积的10%的福尔马林溶液中固定。经石蜡包埋，切片，苏木精-伊红染色（HE染色法），中性树胶封片，利用显微成像系统拍照，测量小肠绒毛高度和隐窝深度，每个肠段随机选择6个视野进行测量，各指标取其平均值作为测定数据，计算绒毛高度与隐窝深度的比值。1.3.4肠道微生物16S rRNA取出3 mL盲肠内容物置于无菌5 mL冻存管，迅速放入液氮中，转入-80 ℃冰箱保存。待测样品送至上海派森诺生物科技有限公司进行16S rRNA高通量测序，根据测序结果分析各组肉兔的盲肠微生物菌群存在的差异。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 24软件进行单因素方差分析，Duncan's法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1植物精油对肉兔生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，O2组肉兔的平均日增重显著提高（P0.05），O2组和O3组肉兔的料重比和腹泻率均显著降低（P0.05）；O1组肉兔的平均日采食量较其他各组显著降低（P0.05）；O2组肉兔的平均日增重显著高于O1组（P0.05），且高于抗生素组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.T002表2植物精油对肉兔生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日采食量/[g/(只·d)]平均日增重/[g/(只·d)]料重比腹泻率/%对照组1.30±0.032.19±0.10121.20±2.78a31.76±0.58b3.82±0.12a3.33±1.92a抗生素组1.31±0.052.33±0.20121.48±9.58a34.07±6.12ab3.61±0.38ab1.48±1.70abO1组1.30±0.002.21±0.16109.79±8.11b31.01±4.92b3.57±0.29ab2.22±1.92abO2组1.32±0.052.40±0.26128.86±0.06a39.29±1.65a3.28±0.13b0.37±0.64bO3组1.31±0.012.42±0.08122.22±2.94a37.04±2.80ab3.31±0.19b0.37±0.64b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2植物精油对肉兔屠宰性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，添加植物精油和抗生素对肉兔的活体重、全净膛重和半净膛重的影响均不显著（P0.05），但均有提高趋势；O3组肉兔的全净膛率和半净膛率均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.T003表3植物精油对肉兔屠宰性能的影响组别活体重/kg半净膛重/kg全净膛重/kg半净膛率/%全净膛率/%对照组2.10±0.161.15±0.071.03±0.0654.76±1.84b49.11±1.00b抗生素组2.24±0.301.29±0.231.17±0.2257.37±2.91ab52.00±3.04abO1组2.11±0.291.18±0.131.06±0.1356.11±1.56ab50.42±0.81abO2组2.33±0.091.33±0.061.17±0.0757.35±0.56ab50.22±1.21abO3组2.31±0.211.38±0.121.25±0.1359.93±3.60a53.99±4.12a2.3植物精油对肉兔肠道形态的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，抗生素组肉兔十二指肠绒毛高度增加102.44%，回肠绒毛高度增加138.73%（P0.05）；O2组肉兔十二指肠、回肠绒毛高度均显著增加（P0.05）；O3组肉兔的空肠绒毛高度显著降低（P0.05）。抗生素组肉兔十二指肠绒毛高度显著高于O1组、O2组和O3组（P0.05）。O2组肉兔的十二指肠绒毛高度显著高于O3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.T004表4植物精油对肉兔肠道形态的影响组别十二指肠空肠回肠绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比对照组262.80±49.32c190.35±65.871.54±0.61b285.96±50.45a137.24±85.02a2.60±1.46110.96±33.39c77.17±26.42a1.58±0.67c抗生素组532.02±92.69a228.02±63.843.24±2.15a255.55±69.80ab79.57±18.37b3.44±1.32264.89±147.16a65.32±20.55ab4.36±2.49aO1组314.23±33.95bc192.34±74.631.83±0.58b224.41±56.56ab81.01±40.85b3.12±1.08173.71±69.72bc74.97±20.04a2.54±1.40bcO2组352.04±33.98b178.42±83.232.46±1.33ab240.63±89.34ab89.81±29.22b2.95±1.41189.67±68.16b55.48±13.49b3.65±1.59abO3组294.78±53.14c173.07±87.612.11±1.01b213.28±76.18b73.11±21.86b3.01±0.95154.46±63.78bc73.47±19.66a2.17±0.90c与对照组相比，抗生素组、O1组、O2组和O3组肉兔的空肠隐窝深度显著降低（P0.05）；O2组肉兔回肠隐窝深度显著低于对照组、O1组和O3组（P0.05）。抗生素组肉兔十二指肠绒隐比分别比对照组、O1和O3组高110.39%、77.05%和53.55%（P0.05）；抗生素组回肠绒隐比分别比对照组、O1和O3组高175.95%、71.65%和100.92%（P0.05），O2组肉兔十二指肠的绒隐比分别比O1组和O3组高34.43%和16.59%（P0.05）；O2组肉兔回肠的绒隐比分别比对照组和O3组高131.01%和68.20%（P0.05）。2.4植物精油对肉兔盲肠微生物菌群的影响2.4.1植物精油对肉兔盲肠微生物Alpha多样性的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，各组之间的Shannon、Simpson及Coverage指数均差异不显著，抗生素组和O3组的Chao1指数略微升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.T005表5植物精油对肉兔盲肠微生物Alpha多样性的影响组别Chao1ShannonSimpsonCoverage对照组5 167.14±96.599.72±0.560.98±0.000.98±0.00抗生素组5 466.30±200.2110.07±0.170.99±0.000.98±0.00O1组5 161.33±239.379.86±0.340.99±0.000.98±0.00O2组5 041.43±725.759.89±0.380.99±0.000.98±0.00O3组5 433.16±182.949.81±0.250.99±0.000.97±0.002.4.2植物精油对肉兔盲肠微生物门水平物种组成的影响（见图1、表6）由图1和表6可知，肉兔盲肠微生物的优势菌群主要由厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）组成，两者相加的比例在对照组、抗生素组、O1组、O2组和O3组分别是91.75%、92.57%、90.02%、90.74%和92.23%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.F001图1盲肠门水平微生物组成10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.T006表6样品门水平和属水平微生物组成组别厚壁菌门拟杆菌门瘤胃球菌属颤螺旋菌属对照组82.50±2.04a9.25±0.56c3.34±0.586.82±1.06a抗生素组68.75±8.01c23.82±6.74a6.24±4.055.83±0.74abO1组75.40±3.12abc14.62±0.49bc7.74±4.374.66±0.89bcO2组77.32±1.38ab13.42±2.08bc9.35±6.165.93±1.81abO3组73.08±3.18bc19.15±2.46ab5.00±1.413.48±0.33c%与对照组相比，抗生素组和O3组Firmicutes的相对丰度显著降低（P0.05）；抗生素组、O1组、O2组和O3组肉兔Bacteroidetes的相对丰度均升高，其中抗生素组Bacteroidetes的相对丰度显著高于对照组、O1组和O2组（P0.05）。2.4.3植物精油对肉兔盲肠微生物属水平物种组成的影响（见图2、表6）由图2和表6可知，肉兔盲肠微生物的优势菌种（相对丰度大于2%）为瘤胃球菌属（Ruminococcus）和颤螺旋菌属（Oscillospira），两者相加的比例在对照组、抗生素组、O1组、O2组和O3组的比例分别是10.16%、12.07%、12.4%、15.28%、8.48%，抗生素组、O1组、O2组和O3组肉兔盲肠中的Ruminococcus的相对丰度均高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.013.F002图2盲肠属水平微生物组成3讨论3.1植物精油对肉兔生长性能的影响植物精油作为天然植物中的有效成分，在动物生长、抗氧化、改善机体健康等方面均具有很好的促进作用[9]。本试验中，与对照组相比，O2肉兔的平均日增重显著提高，且高于抗生素组，O2组和O3组肉兔的料重比和腹泻率均显著降低。马伟斌等[10]研究发现，在肉仔鸡的饲粮中添加植物精油，能够显著提高肉仔鸡的末重和平均日增重。陶春卫等[11]研究表明，在饲粮中添加100 mg/kg牛至香酚能够通过增强肉鸡肠道消化酶的活性，显著提高肉鸡的平均日增重并提高出栏量，与本试验的研究结果一致，可能是添加植物精油能够促进肉兔的肠道消化，提高饲料转化率，降低肉兔的养殖成本。3.2植物精油对肉兔屠宰性能的影响全净膛和半净膛屠宰率能够直接反映动物的产肉性能，屠宰率越高，养殖动物的效益越好[12]。田梅等[13]研究发现，在基础饲粮中添加百里香酚能够显著提高肉兔的宰前活重和屠宰率，适宜添加量是100 mg/kg。徐姗姗[14]研究发现，饲粮中添加沙葱精油，有提高肉羊的宰前活重与屠宰率的趋势。本试验中，添加植物精油可以显著提高肉兔的半净膛率与全净膛率，且肉兔的宰前活重均高于对照组，与上述研究结果一致。3.3植物精油对肉兔肠道形态的影响小肠黏膜结构是判定动物肠道健康的重要依据，肠绒毛作为小肠黏膜上的特有结构，绒毛越长，表明吸收细胞越多，小肠吸营养物质面积越大，对养分的吸收利用率越高。隐窝深度与上皮细胞生成速率相关，隐窝深度降低表明细胞的形成速率升高，对营养物质的吸收能力增强[15-16]。黄崇波等[17]研究表明，肉兔的基础日粮中添加50~100 mg/kg百里香酚能够显著提高十二指肠、空肠的绒毛高度和绒隐比。周洪彬等[18]研究表明，添加百里香酚、香芹酚和肉桂酚能够有效降低肉鸡十二指肠和空肠的隐窝深度，提高空肠的绒隐比。本试验中，添加植物精油有效提高了O2组肉兔的十二指肠绒毛高度和绒隐比，降低了回肠的隐窝深度。王思宇等[19]研究发现，百里香酚和香芹酚复合植物精油可显著提高仔猪十二指肠的绒毛高度，提高空肠和回肠的绒隐比，与本研究结论一致，可能是植物精油中的醛类和酚类可以刺激绒毛细胞生长。因此，O2组对肉兔肠道结构影响最好，且O2组的植物精油作用效果与抗生素组相近。3.4植物精油对肉兔盲肠微生物菌群的影响Alpha多样性通常用来研究微生物的多样性，一般使用一系列的统计学分析指数代表一个特定环境或群落的物种丰富度和均匀度[20]。根据本研究肉兔的屠宰性能、肠道形态结果，进一步研究了添加植物精油试验组和对照组盲肠微生物区系的差异。本试验发现，肉兔盲肠微生物的优势菌群在门水平上主要由Firmicutes和Bacteroidetes组成。Firmicutes是肉兔肠道丰度最高的门[21-22]，与本试验的研究结果一致。Firmicutes与蛋白质和碳水化合物的吸收相关，而Bacteroidetes在非纤维性碳水化合物的降解中发挥重要作用。本试验中，植物精油的添加提高了Bacteroidetes含量，降低了Firmicutes含量。Chiumento等[23]研究表明，Ruminococcus能够产生具有抗菌活性物质，通过抑制核酸合成对多重耐药菌等病原菌起到杀菌作用。Castañeda-Correa等[24]研究发现，百里香酚能够调节牛瘤胃微生物的活动，增加有益菌数量。本试验中，植物精油组肉兔盲肠Ruminococcus含量均增加，推测植物精油可能是通过抑制肠道中致病菌的繁殖，增加有益菌的相对丰度调节肉兔肠道微生物区系，使肠道健康，促进营养物质的吸收，从而提高肉兔的生长性能和屠宰性能。4结论在肉兔日粮中添加植物精油可以提高肉兔生长性能和屠宰率，改善肠道形态及增加盲肠微生物的丰度和均匀度，以O2组即百里香酚和香芹酚组合效果最好，效果与抗生素接近，可以作为抗生素的替代品。