葡萄糖氧化酶（GOD）具有独特的杀菌、抑菌作用[1]。GOD的作用原理是通过葡萄糖酸和过氧化氢发挥抑菌和杀菌作用[2]，能够清除肠道内的氧自由基，减少细胞氧化损伤，维持肠道上皮细胞结构完整[3]。GOD对内源消化酶的耐受性强，可在动物胃肠道内有效发挥作用[4]。GOD能够有效维持畜禽肠道微生态平衡，减少腹泻和水样便发生，改善畜禽生长性能[5-6]。当养殖管理水平较低或养殖条件较为恶劣、病原微生物大量存在情况下，添加GOD更易体现其效果[7-8]。本研究在玉米-豆粕型日粮中添加GOD4000，研究GOD4000对AA肉鸡的生长性能、免疫功能、血清生化指标和肠道形态结构的影响，为GOD4000在畜禽养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计选用600只1日龄体重（36.32±0.33）g健康AA肉雏鸡随机分为3组，每组5个重复，每重复40只（公、母各半）。试验设计见表1，基础日粮组成及营养水平见表2。试验期42 d。试样样品葡萄糖氧化酶GOD4000由武汉新华扬生物股份有限公司提供，酶活≥4 000 U/g。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.T001表1试验设计组别试验日粮对照组玉米-豆粕型基础日粮试验Ⅰ组基础日粮+400 U/kg GOD4000（100 g/t）试验Ⅱ组基础日粮+1 000 U/kg GOD4000（250 g/t）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.T002表2基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目1~21日龄22~42日龄原料组成/%玉米54.1155.34豆粕29.4026.50菜籽饼5.606.50玉米蛋白粉3.002.00豆油4.006.00石粉1.201.30磷酸氢钙1.401.30赖氨酸盐酸盐0.300.27蛋氨酸0.200.15食盐0.300.30氯化胆碱0.100.10米糠0.150维生素预混料0.120.12矿物质预混料0.120.12合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.5913.06粗蛋白/%21.0019.50总磷/%0.740.70有效磷/%0.430.41钙/%0.800.81赖氨酸/%1.241.14蛋氨酸/%0.550.47蛋氨酸+半胱氨酸/%0.910.81苏氨酸/%0.800.75色氨酸/%0.230.22精氨酸/%1.361.26注：1.维生素预混料为每千克日粮提供：VA 6 125~12 500 IU、VD3 2 400~6 000 IU、α-生育酚乙酸酯≥32 mg、甲萘醌≥2.88 mg、VB1硝酸盐≥2.4 mg、VB2≥7.2 mg、VB6≥4.2 mg，氰钴胺≥0.014 mg、烟酰胺≥38 mg、D-生物素≥0.10 mg、D-泛酸钙≥9.8 mg、叶酸≥1.16 mg。2.矿物质预混料为每千克日粮提供：铜7.2~21.6 mg、铁36~180 mg、锰72~150 mg、锌60~120 mg、碘0.48~1.08 mg、硒0.18~0.36 mg。3.营养水平均为计算值。1.2饲养管理肉仔鸡采用网栏平养，进鸡苗前对鸡舍进行彻底熏蒸消毒，鸡舍内保持良好卫生和通风，肉仔鸡1~14日龄期间进行育雏，育雏期间室内温度维持在31~35 ℃，育雏结束后将室温逐渐降低至约25 ℃，维持室温在20~25 ℃，湿度保持在65%~75%。按正常饲养管理程序进行，按照正常程序免疫、驱虫。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验第21、21、42 d的20：00所有处理组停止供料，断料12 h，试验第1、22、43 d的8：00空腹称重；试验期间每日记录各组的耗料量，计算各组的平均日采食量、平均日增重、料重比。平均日采食量=总采食量/试验天数(1)平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2血清生化指标试验第43 d，每个重复中随机选取1只鸡称重，翅静脉采血，血样静置10 min，3 500 r/min离心15 min，取血清，-20 ℃保存，用于检测血清生化指标。使用双缩脲法测定血清总蛋白（TP）含量，使用GK-GPO-PAP法测定甘油三酯（TG）含量，使用OPA法测定尿素氮（BUN）含量，使用CHOD-PAP法测定总胆固醇（TC）含量，使用GOP-PAP法测定葡萄糖（GLU）含量，使用溴甲酚绿法测定白蛋白（ALB）含量。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。1.3.3免疫器官指数试验第43 d，试验鸡采血，屠宰，打开腹腔，分离各内脏器官和肠段，取出胸腺、脾脏和法氏囊，去除器官表面多余的组织并吸干组织表面的血水，分别置于分析天平称重（精确到0.001 g），计算免疫器官指数。免疫器官指数＝免疫器官重量/活体重(4)1.3.4肠道组织结构观察取空肠和回肠中段约1~2 cm，生理盐水反复冲洗，经4%甲醛固定液固定24 h，经过脱水，包埋，切片，染色，制作成石蜡切片，使用Eclipse Ci-L拍照显微镜选取组织的目的区域进行40倍成像，测量绒毛高度（VH）和隐窝深度（CD），计算绒毛高度与隐窝深度比（V/C）。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 16.0软件进行单因素方差分析统计，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同水平GOD4000对肉鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组各阶段肉鸡的末重、平均日增重和平均日采食量均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.T003表3不同水平GOD4000对肉鸡生长性能的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组1~21日龄1日龄体重/g35.94±0.6336.56±0.2136.46±0.5421日龄体重/g592.30±5.93b628.75±18.17a642.50±32.08a平均日增重/[g/(只·d)]26.49±0.27b28.20±0.87a28.86±1.54a平均日采食量/[g/(只·d)]38.03±0.58b40.61±0.45a40.40±0.77a料重比1.44±0.011.44±0.031.40±0.08死淘率/%2.00±2.090.00±0.001.00±1.3622~42日龄42日龄体重/g1 939.92±49.65b2 114.55±46.85a2 133.45±49.76a平均日增重/[g/(只·d)]64.17±2.50b70.75±2.63a71.00±1.96a平均日采食量/[g/(只·d)]118.39±3.32b126.99±3.72a127.12±3.46a料重比1.85±0.041.80±0.021.79±0.07死淘率/%2.09±1.160.00±0.001.03±1.401~42日龄平均日增重/[g/(只·d)]45.33±1.20b49.48±1.22a49.93±1.18a平均日采食量/[g/(只·d)]78.21±1.40b83.80±1.66a83.76±1.90a料重比1.73±0.031.69±0.021.68±0.05死淘率/%4.00±1.370.00±0.002.00±1.11注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同水平GOD4000对肉鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验Ⅰ组肉鸡43日龄时的血清BUN含量显著降低（P0.05），试验Ⅱ组肉鸡43日龄时的血清TP含量显著提高（P0.05），血清BUN和TG含量显著降低（P0.05）。各组肉鸡血清TP、TC、GLU含量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.T004表4不同水平GOD4000对肉鸡血清生化指标的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组22日龄TP/(g/L)21.69±1.2721.68±0.4922.75±3.54ALB/(g/L)11.04±2.0511.31±0.3712.11±1.21BUN/(mmol/L)0.43±0.060.43±0.140.41±0.06TG/(mmol/L)0.49±0.090.57±0.040.62±0.05TC/(mmol/L)4.10±0.033.81±0.084.01±0.45GLU/(mmol/L)11.80±0.9912.40±0.2811.65±0.6443日龄TP/(g/L)21.24±2.12b23.06±0.37ab25.65±1.40aALB/(g/L)11.19±1.6911.82±0.5611.86±2.36BUN/(mmol/L)0.80±0.14a0.57±0.12b0.50±0.08bTG/(mmol/L)0.82±0.15a0.81±0.11a0.59±0.09bTC/(mmol/L)3.15±0.913.39±0.323.88±0.14GLU/(mmol/L)10.35±1.3411.00±0.709.90±2.102.3不同水平GOD4000对肉鸡免疫器官指数的影响（见表5）由表5可知，各组肉鸡的脾脏指数、法氏囊指数、胸腺指数差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.T005表5不同水平GOD4000对肉鸡免疫器官指数的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组22日龄脾脏0.74±0.130.91±0.261.23±0.80法氏囊2.88±0.502.74±0.222.31±0.43胸腺1.91±0.461.81±0.521.49±0.5043日龄脾脏0.92±0.191.12±0.201.17±0.63法氏囊1.79±0.581.89±0.452.19±0.26胸腺1.96±0.441.78±0.561.32±0.492.4不同水平GOD4000对肉鸡空肠和回肠黏膜的影响（见表6、图1、图2）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.F001图1不同水平GOD对空肠肠道形态的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.F002图2不同水平GOD对回肠肠道形态的影响由表6可知，与对照组相比，试验Ⅱ组肉鸡22日龄、43日龄的空肠绒毛高度显著提高（P0.05），43日龄的空肠绒毛高度与隐窝深度比显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.010.T006表6不同水平GOD对肉鸡空肠和回肠黏膜的影响日龄肠段项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组22日龄空肠绒毛高度/μm942.10±69.48b1 003.10±171.34ab1 202.90±158.64a隐窝深度/μm235.40±26.14236.20±37.12221.70±21.59绒毛高度/隐窝深度4.06±0.874.27±0.955.43±1.04回肠绒毛高度/μm937.40±170.18908.50±125.40973.50±185.14隐窝深度/μm218.40±74.34225.70±59.47226.50±71.37绒毛高度/隐窝深度4.34±1.214.07±1.564.39±1.6543日龄空肠绒毛高度/μm1 263.40±270.64b1 306.40±258.52ab1 443.20±224.45a隐窝深度/μm217.90±33.96224.30±47.92204.20±32.37绒毛高度/隐窝深度5.80±0.98b6.15±2.14ab7.08±1.10a回肠绒毛高度/μm1 162.60±273.131 152.90±171.301 090.70±138.59隐窝深度/μm197.60±52.83212.40±68.96193.80±81.54绒毛高度/隐窝深度5.95±1.735.59±2.005.69±1.823讨论3.1不同水平GOD4000对肉鸡生长性能的影响GOD在代谢过程中消耗氧气，可缓解氧自由基对肠道的氧化损伤，可以通过制造厌氧环境在一定程度上抑制好氧有害菌的生长和繁殖[9]。日粮中添加GOD能够提高肠道消化酶活性，从而增强肠道消化功能，提高营养物质消化率[10-12]。GOD代谢产生的葡萄糖酸为消化道内酶的激活提供酸性环境[13]，葡萄糖酸能够降低胃肠道pH值，进而在一定程度上抑制部分有害菌的生长，改善肠道微生物菌群平衡，维持肠道功能[14]。崔细鹏等[15]研究表明，日粮中分别添加100、200 U/kg GOD可显著提高肉鸡的平均日采食量，降低料重比。李向群等[16]研究表明，日粮添加GOD可以提高肉鸡平均日采食量，降低料重比，提高饲料粗蛋白、粗脂肪以及有机物的利用率。本研究在玉米-豆粕型基础日粮中添加400、1 000 U/kg的GOD，可显著提高肉仔鸡各阶段平均日采食量、平均日增重和末重，降低料重比，与上述研究结果一致，表明GOD具有改善肉鸡生长性能的显著效果。3.2不同水平GOD4000对肉鸡免疫器官指数的影响胸腺、脾脏和法氏囊作为肉鸡重要的免疫器官，免疫器官指数与其功能及免疫细胞数量密切相关，是评估机体免疫力的重要指标。GOD能够调节免疫器官发育，增强免疫功能。日粮中添加GOD能够提高肉仔鸡的胸腺指数、脾脏指数，对肉仔鸡血液中免疫球蛋白的含量具有显著影响[16]。宋海彬[17]研究发现，添加GOD可提高肉鸡脾脏、胸腺和法氏囊的器官指数，提升机体免疫功能，促进免疫器官发育。王洪军[18]研究表明，日粮添加4 000 U/g的GOD可显著增强21日龄肉仔鸡的脾脏指数及法氏囊指数。本试验条件下，随着GOD添加水平提高至1 000 U/kg，免疫器官指数有提高的趋势，但与对照组相比影响不显著，与上述研究结果略有差异，可能是在添加水平、试验动物、试验环境等方面存在差异，GOD对机体免疫机能的影响仍需进一步的研究论证。3.3不同水平GOD4000对肉鸡血清生化指标的影响血清生化指标中的TC、GLU和TG含量能够反映机体脂肪代谢水平[19-20]。本试验中，肉鸡日粮中GOD添加量为1 000 U/kg时，43日龄肉鸡的TC含量显著降低，表明GOD可能有助于调节机体脂肪中TC代谢。肉鸡血清中BUN和TP含量可反映机体蛋白质的代谢情况。宋海彬等[10]研究表明，添加GOD后，肉鸡小肠消化酶活性提高，蛋白质的消化、代谢状况得到改善，肉鸡血清中TP、ALB含量提高。本研究中，肉鸡血清中TP、ALB含量随着GOD添加量的增多而提高，其中添加量为1 000 U/kg时，43日龄肉鸡血清中TP含量显著提高，同时BUN含量显著降低，表明GOD能够在一定程度上改善肉鸡的蛋白质代谢。3.4不同水平GOD4000对肉鸡肠道形态的影响肠道健康是动物健康和生长的基础。肠道形态结构可反映小肠吸收功能。小肠黏膜绒毛作为机体内营养物质消化和吸收的重要组织，其绒毛高度和隐窝深度代表了肠道的功能状态[21]。GOD通过清除氧自由基、杀菌抑菌能力，改善抗氧化能力和免疫能力，维持肠道的正常结构和功能[22]。宋海彬[17]研究表明，肉鸡日粮添加GOD可提高十二指肠V/C比值，提高十二指肠的吸收功能。陈清华等[23]研究表明，在日粮中添加GOD能够提高仔猪十二指肠绒毛高度，进一步增强十二指肠的吸收功能。本研究中，超剂量添加1 000 U/kg GOD4000可显著提高肉仔鸡在22日龄和43日龄时的空肠绒毛高度，显著提高43日龄空肠V/C比值，与上述研究结果相似，表明超剂量添加GOD可显著改善肠道绒毛结构，为消化道成熟和吸收功能的完善提供了生理基础。4结论本试验条件下，在日粮中添加GOD4000可改善肉鸡生长性能，作用效果随GOD4000添加水平的提高而增强；添加1 000 U/kg GOD4000可进一步改善肉鸡蛋白质代谢、空肠绒毛结构。