目前，肉鸡养殖中使用的抗生素替代品主要有复合有机酸、植物提取物、微生态制剂、抗菌肽等。微生态制剂在改善肉鸡肠道健康、提高生长性能方面的效果较理想。微生态制剂可调节动物肠道菌群结构，使有益菌大量在肠道中定植和生长，改善肠道健康[1]。益生菌的代谢产物可刺激动物机体产生肽和紧密连接蛋白，进而起抑菌作用，保证动物肠道微生物区系平衡[2]。肉鸡养殖中，肠道炎症是主要的多发疾病，严重影响了肉鸡的生长性能及养殖效益。肠道炎症表现为动物肠道中的有益菌数量减少，有害菌数量增加，导致肠道菌群紊乱[3]。研究发现，日粮中使用乳杆菌可增加肉仔鸡肠道中的有益菌数量，如乳酸菌和双歧杆菌；减少有害菌的数量，如大肠杆菌等致病菌，降低肉仔鸡的死亡率[4-5]。在日粮中添加乳双歧杆菌可通过改善肉仔鸡的肠道健康，提高其生长性能[6]。本研究在AA肉鸡日粮中添加不同水平的复合益生菌，探讨复合益生菌对肉鸡生长性能、免疫力及肠道健康的影响，为复合益生菌在肉仔鸡养殖生产中的合理使用提供参考。1材料与方法1.1试验材料本试验使用的复合益生菌由干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌（比例为１:１:２）的冻干菌粉组成，由陕西某生物公司提供，有效活菌数大于3×109 CFU/g。1.2试验设计试验选取1 200只AA肉仔鸡，随机分为4组，每组10个重复，每个重复30只鸡。各组AA肉仔鸡分别饲喂添加0（对照组）、0.1%（试验1组）、0.2%（试验2组）、0.4%（试验3组）复合益生菌的基础日粮。试验期6周，分为试验前期（1~21 d）和试验后期（22~42 d）。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.012.T001表1基础日粮组成及营养水平项目1~21 d22~42 d原料组成/%玉米59.5163.12豆粕30.5028.00鱼粉3.002.00豆油2.503.00L-赖氨酸0.830.77DL-蛋氨酸0.230.18磷酸氢钙1.551.17氯化胆碱0.200.20石粉0.880.76食盐0.300.30预混料0.500.50合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.0512.58粗蛋白/%20.8819.75钙/%1.020.88总磷/%0.690.57有效磷/%0.500.38赖氨酸/%1.461.38蛋氨酸+半胱氨酸/%0.950.87注：1.预混料购自乌鲁木齐贸丰饲料有限公司。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验开始前，对试验场地进行熏蒸消毒处理，通风晾干后开始试验。试验前期，第1周为育雏期，严格把控鸡舍内的温度和湿度，AA肉仔鸡饲养于层叠式育雏笼内；试验后期将AA肉仔鸡转入到育成舍３层重叠育成笼。试验期间，AA肉仔鸡的免疫程序按照养殖场的日常管理程序进行，自由采食饮水，每日仔细观察鸡群健康状况，及时淘汰病弱鸡。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验第1、21、42 d空腹称量AA肉仔鸡的体重，试验期间准确记录每组AA肉仔鸡的采食量，计算平均日采食量、平均日增重、料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2免疫功能分别于试验的第21、42 d，从每个重复中随机选取10只AA肉仔鸡，翅下静脉采集血液5 ｍＬ，3 500 r/min离心6 min，取上层的血清于EP管中，用于检测血清免疫指标。检测指标包括：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、分泌型免疫球蛋白A（sIgA）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）。AA肉仔鸡屠宰后，采集脾脏、胸腺和法氏囊称重，考察免疫器官指数指标。免疫指标检测的试剂盒购自苏州卡尔文生物科技有限公司。免疫器官指数=免疫器官重/活体重(4)1.4.3肠道指标采集上述屠宰的AA肉仔鸡的空肠、十二指肠、回肠约2 cm，使用0.9%的生理盐水将肠道食糜冲洗干净，使用甲醛固定24 h，对空肠、十二指肠、回肠组织进行HE染色，制成石蜡切片。ML-50显微图像采集分析系统在光学显微镜低倍镜（40倍）下挑选典型视野拍摄图片，测量小肠绒毛高度和隐窝深度，计算绒隐比。1.5数据统计与分析试验数据使用SPSS 24软件进行单因素方差分析，LSD法进行组间多重比较，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同水平的复合益生菌对AA肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验2组、试验3组的AA肉仔鸡的42日龄体重提高了18.53%、20.26%（P0.05），1~42日龄肉仔鸡的平均日增重提高了18.91%、20.66%（P0.05），料重比显著降低了9.14%、9.14%（P0.05）；与试验1组相比，试验2组、试验3组的AA肉仔鸡1~42日龄平均日增重比显著提高了10.20%、11.82%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.012.T002表2不同水平的复合益生菌对AA肉仔鸡生长性能的影响项目1日龄体重/g42日龄体重/kg平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比对照组45.302.32b54.16b94.671.75a试验1组45.352.50ab58.44b97.671.67ab试验2组45.302.75a64.40a102.321.59b试验3组45.352.79a65.35a103.781.59bSEM2.830.244.627.650.17P值0.3190.0480.0320.0950.0162.2不同水平的复合益生菌对AA肉仔免疫功能的影响（见表3、表4）由表3可知，与对照组相比，42日龄时，试验2组、试验3组AA肉仔鸡的脾脏指数显著提高了24.24%、25.00%（P0.05），胸腺指数显著提高了27.87%、30.66%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.012.T003表3不同水平的复合益生菌对AA肉仔免疫器官指数的影响项目21日龄42日龄脾脏指数法氏囊指数胸腺指数脾脏指数法氏囊指数胸腺指数对照组0.901.503.841.32b0.892.87b试验1组1.021.794.161.49ab0.943.19ab试验2组1.051.804.341.64a0.963.67a试验3组1.051.834.401.65a0.983.75aSEM0.090.240.580.170.100.48P值0.1730.0870.1040.0440.1380.039g/kg由表4可知，各试验组AA肉仔鸡血清中的IgM和sIgA含量显著高于对照组（P0.05）；试验2组和试验3组AA肉仔鸡血清中的IgM和sIgA含量显著高于试验1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.012.T004表4不同水平的复合益生菌对AA肉仔免疫指标的影响项目IgA/(g/L)IgM/(g/L)IgG/(g/L)sIgA/(mg/L)TNF-α/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)IL-10/(ng/L)对照组0.501.47c4.077.73c105.45a335.60a176.04a10.56c试验1组0.581.56b4.189.04b85.17b253.98b157.18ab11.84b试验2组0.651.68a4.2510.63a73.06c248.39b139.17b13.45ab试验3组0.681.73a4.3011.74a69.50c245.07b128.94b14.69aSEM0.080.250.590.848.3220.6510.741.52P值0.0920.0450.3860.0080.0030.0160.0130.005与对照组相比，试验组AA肉仔鸡血清TNF-α、IL-2含量均显著降低（P0.05），IL-10含量显著提高（P0.05）；试验2组和试验3组AA肉仔鸡血清中的IL-6含量显著降低（P0.05）。2.3不同水平的复合益生菌对AA肉仔鸡肠道形态的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验2组和试验3组肉鸡十二指肠的绒毛高度分别提高了20.29%、21.09%（P0.05），十二指肠的绒隐比分别提高了21.23%、22.11%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.15.012.T005表5不同水平的复合益生菌对AA肉仔鸡肠道形态的影响项目空肠十二指肠回肠绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比对照组918.4585.2710.77964.97b94.3810.22b749.0682.649.06试验1组929.4184.9810.941 063.87ab93.8011.34ab763.1081.069.41试验2组953.4084.8411.321 160.73a93.6512.39a784.2680.869.70试验3组960.3784.8011.331 168.48a93.6012.48a790.5380.529.82SEM45.627.041.3950.748.641.3037.047.431.28P值0.5410.8310.2050.0420.3610.0440.7280.2960.5173讨论3.1不同水平的复合益生菌对AA肉仔鸡生长性能的影响本试验中，与对照组相比，试验2组和试验3组的AA肉仔鸡42日龄体重显著提高了18.53%、20.26%；平均日增重显著提高了18.91%、20.66%；料重比显著降低了9.14%、9.14%；试验2组和试验3组的AA肉仔鸡的平均日增重比0.1%复合益生菌组显著提高了10.20%、11.82%；表明日粮中添加0.2%的复合益生菌可以有效改善AA肉仔鸡的生长性能。田浪等[7]研究发现，黄羽肉鸡养殖中使用由枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、酪酸菌组成的复合益生菌，平均日增重最多比对照组提高了4.11%，料重比比对照组降低了4.58%，复合益生菌的最适添加量为0.1%。刘淑娇等[8]研究发现，由乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌等比例组成的复合益生菌可显著提高雄性AA肉仔鸡的平均日增重和平均日采食量，显著降低料重比，且复合益生菌的最适添加量为0.6%。本试验结果与上述结论类似，表明在肉鸡日粮中添加适量的复合益生菌可以有效改善肉鸡的生长性能。益生菌改善肉鸡的生长性能可能是由于有益的益生菌可在动物肠道中有效定植，分泌大量消化酶，帮助动物机体有效吸收日粮中的营养物质，进而提高动物的生长性能[9-11]。3.2不同水平的复合益生菌对AA肉仔免疫功能的影响家禽主要的免疫器官主要有胸腺、脾脏、法氏囊，对机体的中枢、外周及体液免疫起至关重要作用，其发育状况能够反映机体的免疫水平[12]。本研究中，42日龄时，试验2组和试验3组的AA肉仔鸡的脾脏指数比对照组显著提高了24.24%、25.00%；胸腺指数比对照组显著提高了27.87%、30.66%，表明AA肉仔鸡饲喂0.2%水平复合益生菌可以有效促进其免疫器官的生长发育。谢童等[13]研究表明，在黄羽肉鸡日粮中使用0.1%复合乳酸菌制剂可显著提高肉鸡脾脏指数，添加0.2%可显著提高法氏囊指数。郭欣怡等[14]研究表明，饲喂1 mL/kg的乳酸菌可显著提高AA肉仔鸡胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数。因此，在肉鸡养殖中使用适量的益生菌制剂可促进免疫器官的生长发育。动物机体内的免疫球蛋白及细胞因子对机体的体液免疫和细胞免疫功能至关重要。免疫球蛋白可清除病原微生物及抗原，溶解细菌，中和病毒，在免疫调节和预防疾病方面发挥重要功能[15]。细胞因子包括促炎因子和抗炎因子，当动物机体受病原微生物侵害时，Th1细胞产生促炎因子，而Th2细胞可分泌白细胞介素，其中IL-10是一种非常重要的抗炎因子[16]。本研究中，各试验组AA肉仔鸡血清中的IgM和sIgA含量显著高于对照组；试验2组和试验3组AA肉仔鸡血清中的IgM和sIgA含量显著高于试验1组；与对照组相比，各试验组肉仔鸡血清中的TNF-α、IL-2含量显著降低，IL-10含量显著提高；试验2组和试验3组AA肉仔鸡血清中的IL-6含量显著升高。本研究结果表明，AA肉仔鸡饲喂适量的复合益生菌可增强机体的体液免疫和细胞免疫功能。宋丹等[17]在AA肉公鸡日粮中添加1 g/kg包被植物乳杆菌+1 g/kg屎肠球菌可提高IgA、IgM、IgG含量，提高抗炎因子IL-10的含量，降低促炎因子TNF-α、IL-2、IL-6的含量。于明等[18]研究发现，添加1.0%复合益生菌能够明显提高肉鸡血清IgA和IgG含量。Wu等[19]研究发现，使用植物乳杆菌可增加肉鸡回肠黏膜IL-10的表达量。益生菌可有效调节动物机体的免疫系统，通过平衡机体内的抗炎因子和促炎因子水平激活机体的免疫系统，防止病原微生物的侵害，稳定动物肠道的内环境[19]。3.3不同水平的复合益生菌对AA肉仔鸡肠道形态的影响肠道的健康发育对机体吸收饲料中的营养物质至关重要，主要的检测指标包括小肠绒毛的高度、隐窝深度及二者的比值。本研究中，与对照组相比，试验2组和试验3组肉鸡十二指肠的绒毛高度显著提高了20.29%、21.09%，绒隐比分别提高了21.23%、22.11%。结果表明，在AA肉仔鸡日粮中使用0.2%的复合益生菌可促进肠道发育，改善肠道健康。田浪等[7]等研究发现，在日粮中使用300 g/t的复合益生菌可显著提高黄羽肉鸡十二指肠的绒毛高度及绒隐比。谢文惠等[20]研究表明，使用由枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌组成的复合益生菌，可改善AA肉仔鸡小肠绒毛高度、隐窝深度及绒隐比，但影响不显著。张彩凤等[21]在肉仔鸡日粮中添加1 000 mg/kg的复合益生菌（乳酸菌+酵母菌）显著提高了空肠绒毛高度和绒隐比。益生菌能够改善肠道健康的原因是益生菌进入动物肠道中可有效在肠道定植，抑制有害菌繁殖，阻止有害菌对肠道黏膜的损害作用，保证肠道形态及功能的完整性[22]。4结论本试验结果表明，在日粮中添加一定水平的复合益生菌可以改善AA肉仔鸡的生长性能、免疫功能及肠道健康，综合生产成本考虑，复合益生菌在AA肉鸡生产中的适宜添加量为0.2%。